高效液相色谱法测定竹筷中噻苯咪唑、邻苯基苯酚和联苯

何淑娟，范 斌*，李润岩，俞 婧，张 京

(河北省食品质量监督检验研究院，河北省食品安全重点实验室，河北 石家庄 050051)

高效液相色谱法测定竹筷中噻苯咪唑、邻苯基苯酚和联苯

何淑娟，范 斌*，李润岩，俞 婧，张 京

(河北省食品质量监督检验研究院，河北省食品安全重点实验室，河北 石家庄 050051)

建立高效液相色谱测定竹筷中噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯的方法。以甲醇为提取溶剂，用索氏提取法提取竹筷中噻苯咪唑、邻苯基苯酚和联苯3种保鲜剂。以甲醇-水(体积比70∶30)为流动相，流速1.0mL/min，采用C18柱(250mm×4.6mm，5μm)分离，紫外检测器检测，检测波长247nm，进样量20μL。方法的相关系数均大于0.999，最低检出限为0.01μg/mL，平均回收率为95.8%～97.1%，相对标准偏差为1.4%～2.6%。应用所建立的方法测定一次性竹筷中噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯的残留量，结果表明：该方法样品处理简单，色谱分离完全，结果准确可靠，适于竹筷中噻苯咪唑、邻苯基苯酚和联苯的分析检测。

高效液相色谱；竹筷；噻苯咪唑；邻苯基苯酚；联苯

噻苯咪唑别名 2-(4-噻唑基)-苯并咪唑、杀菌灵、涕必灵，为广谱性抗真菌剂，具有内吸性，即它可通过蒸腾流而在整个植物内运转分布，具有很长的残效。它可控制感染，而且可抑制芽孢发芽、干扰菌丝体的生长，并影响分生孢子的形成。可用于水果保鲜，具体应用可制成胶悬剂、液剂等供浸果，也可制成果酱和烟薰剂，用于柑橘、香蕉、等贮藏期防腐。邻苯基苯酚又名2-羟基联苯或2-苯基苯酚，为白色薄片或块状物或淡红色粉末，极易溶于水。邻苯基苯酚是用途十分广泛的有机化工产品，广泛应用于杀菌防腐[1-3]、合成纤维的染色载体[4]，合成新型塑料、树脂和高分子材料的稳定剂和阻燃剂[5]等领域。

噻苯咪唑(TBZ)、邻苯基苯酚(DPP)、联苯(DP)3种杀真菌剂具有高效广谱的杀菌防霉作用。已广泛应用于采收后的水果和蔬菜的防腐保鲜[6-12]。但过量使用对人体有致癌性、致畸性，并可造成肝脏和肾脏严重受损[13]。近年来，人们对防霉剂的研究越来越重视，主要以气象色谱和液相色谱法为主[14-20]。在竹制、木制卫生筷生产、运输过程中，常有过量加入杀真菌剂的情况。我国是竹筷消费和出口大国，因此，建立一种准确、快速的检验方法具有重大意义。

本实验采用高效液相色谱法同时测定竹筷中的噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯，通过对样品提取和色谱条件的优化，使回收率有很大的提高。方法分辨率高、灵敏度高、精密度好，适用于竹筷中噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯的检测。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

竹筷为河北省内以原竹为材料，经加工而成的一次性筷子；甲醇(色谱纯) 中国迪马公司；噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯(标准品) 德国Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 仪器与设备

Agilent 1200超快速液相色谱仪(配有自动进样器、二元泵、紫外检测器) 美国 Agilent公司；KQ-250DV型数控超声波清洗器 昆山市超声仪器有限公司；3K15离心机 美国Sigma公司；N-EVAP 111氮吹仪 美国OA-SYS公司；B-811索氏提取器 瑞士步琪公司；XHB旋涡混匀器 江苏康健医疗用品有限公司。

1.3 方法

1.3.1 标准溶液的配制

标准储备液：分别准确称取适量的噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯标准品，用甲醇溶解并定容至100mL，配置成噻苯咪唑100μg/mL、邻苯基苯酚100μg/mL、联苯100μg/mL的储备液。

标准工作液：根据需要用甲醇将上述3种储备液混合后稀释成20、40、60、80、100μg/mL。

1.3.2 样品前处理

从抽取的实验室样品中取样，把附在试样上的竹屑或碎片等清除干净。再将样品劈成厚约1mm、长小于1cm的竹条，精密称取1g(准确至0.001g)试样置于索氏提取装置中，加入150mL甲醇到接收瓶中，温度设置为90～95℃，抽提4h。用氮吹仪将提取液吹干，准确加入5.0mL甲醇溶解，样液用0.45μm微孔滤膜过滤至自动进样瓶中，供仪器分析用。

1.3.3 色谱分析条件

色谱柱：C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-水(体积比70∶30)；流速1.0mL/min；检测波长：247nm；进样量：20μL；柱温：25℃。

2 结果与分析

2.1 样品预处理的选择与优化

实验在相同色谱条件下，对不同提取方式、提取溶剂和提取时间进行分析。结果表明：以甲醇为提取溶剂，采用索氏提取法连续不断地萃取样品中的噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯4h，能够得到更有效的提取，得到了很好的分离效果和峰形。采用索氏提取法，回收率也较前两种方法有明显提高，详见表1、2。

表1 不同样品处理的结果Table 1 Comparison among different sample pre-treatment methods

表2 不同提取方法回收率比较Table 2 Comparison of recovery rates of different extraction methods for TBZ, OPP and DP

2.2 色谱条件的优化

分别以甲醇-水及十二烷基磺酸钠-甲醇-乙腈-水-磷酸两组流动相体系进行色谱分析，结果显示：用这两个系统进行色谱分析，都能得到较好的峰形和分离度。但乙腈是一种神经性毒剂，毒性比甲醇大，可经皮肤、消化道吸收。其蒸气则可经呼吸道侵入体内。因此，利用甲醇-水为流动相，更为简单低毒高效，操作简便快捷。试验还分别以甲醇、甲醇-水=80∶20、甲醇-水=70∶30、甲醇-水=60∶40、甲醇-水=1∶1为流动相进行色谱分析，结果表明：当以甲醇-水的体积比为70∶30为流动相时得到了分离度和峰形均较好的结果(图1)。

图1 噻苯咪唑(1)、邻苯基苯酚(2)、联苯(3)的标准色谱图Fig.1 Standard chromatograms of TBZ, OPP and DP

2.3 工作曲线和最低检出限

将100μg/mL的噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯标准储备液稀释成质量浓度20、40、60、80、100μg/mL的标准工作液，每种质量浓度平行测3次，取平均值，用标品的质量浓度对色谱峰面积绘制标准曲线，求得3种物质标准曲线回归方程和相关系数，见表3。

表3 线性关系和检出限Table 3 Linear equations and detection limits of the method for TBZ, OPP and DP

表3结果表明，噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯在20～100μg/mL的质量浓度范围内其峰面积与质量浓度呈良好的线性关系，按3倍信噪比得出方法检出限为0.01μg/mL。

2.4 精密度和回收率

选择未检出噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯的竹筷为基体，分别添加质量浓度为5、10、50mg/kg的噻苯咪唑、邻苯基苯酚、联苯标准液，每个质量浓度水平重复测定7次，求得加标回收率及精密度，结果见表4。

表4 回收率和相对标准偏差的测定结果(n=7)Table 4 Spike recovery rates and relative standard deviations of the method for TBZ, OPP and DP (n=7)

3 结 论

本实验对检测一次性竹筷中噻苯咪唑、邻苯基苯酚及联苯残留量的方法进行研究。本实验通过对样品前处理方法和流动相的选择进行优化，通过精密度、分离度和回收率实验，结果表明，该方法具有操作简便、重复性和准确度高等特性，各项技术指标均完全满足检测需要。

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Determination of Thiabendazole, O-phenylphenol and Diphenyl Residues in Chopsticks by High Performance Liquid Chromatography

HE Shu-juan，FAN Bin*，LI Run-yan，YU Jing，ZHANG Jing
(Key Laboratory of Food Safety of Hebei, Hebei Institute of Food Quality Supervision Inspection and Research, Shijiazhuang 050051, China)

A high performance liquid chromatography method was developed for determining three fungicides including thiabendazole (TBZ), o-phenylphenol (OPP) and diphenyl (DP) residues in chopsticks. The resi dues were extracted with methanol by Soxhlet extraction, separated on Cosmosil C18 column by using a mixture of methanol and water (70∶30) as the mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min and detected at 247 nm. The correlation coefficient and detection limit of this method were 0.999μ g/mL and 0.01μ g/mL, respectively. The recovery rates and relative standard deviations for TBZ, OPP and DP in a blank sample across three spike levels were 95.8%-97.1% and 1.4%-2.6%, respectively. This method proved simple, fast, highly efficient and accurate.

high performance liquid chromatography；chopsticks；thiabendazole (TBZ)；o-phenylphenol (OPP)；diphenyl (DP)

TS207.5

A

1002-6630(2011)14-0312-03

2010-11-01

何淑娟(1982—)，女，工程师，硕士研究生，研究方向为食品及相关产品的检测技术。E-mail：heshuj@163.com

*通信作者：范斌(1979—)，男，工程师，硕士研究生，研究方向为仪器分析。E-mail：fbin2006@126.com