血清胱抑素C对外周动脉粥样硬化诊断的潜在价值

夏宇

(湘潭市第二人民医院检验科，湖南 湘潭 411100)

动脉粥样硬化(Artherosclerosis)是西方发达国家人民的主要死亡原因。随着我国人民生活水平提高和饮食习惯改变，该病也逐渐成为我国人民的主要死亡原因。目前，临床通常以检测血液中脂蛋白、甘油三酯和胆固醇的浓度，结合X射线检查、动脉造影或多普勒超声波检查来诊断外周动脉粥样硬化。

此诊断方式存在一定的弊端，尤其难以诊断早期的外周动脉粥样硬化病变。近年来，随着对动脉粥样硬化分子病理学机理的研究发现，组织蛋白酶和其内源性胱抑素C(Cys C)表达的失衡，是造成动脉粥样硬化的重要因素[1]；同时，Cys C作为诊断外周动脉粥样硬化、冠心病等一些心血管疾病的实验室指标，备受国内外研究者的关注[2]。为了探讨Cys C在临床诊断外周动脉粥样硬化的应用价值，本文对100例外周动脉粥样硬化患者血清中Cys C、IL-6、hs-CRP和肾小球滤过率进行了检测，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 对象

1.1 .1 患者资料 选取外周动脉粥状硬化患者共100例。选取标准：男性，年龄大于45岁，包括有间歇性跛行史、踝/臂血压指数(ABI)小于0.9；排除由截肢等其他原因引起的有间歇性跛行史的患者；排除伴随I型糖尿病、房颤或心肌萎缩症状的患者。

1.1 .2健康对照 选取临床体检正常的健康人95例作为对照。选取标准：男性，年龄区间与实验组一致；无任何原因引起的间歇性跛行史；无I型糖尿病、房颤或心肌萎缩症状；踝/臂血压指数(ABI)大于0.9。

1.1 .3标本采集 受试者空腹，抽取静脉血液样品约5ml于EDTA-K2真空采血管，测定肌酐和糖化血红蛋白组分 (HbA1c)；另取静脉血约5ml于真空采血管，用于测定血清Cys C、hs-CRP和IL-6。

1.2 测定方法

1.2 .1空腹抽血做肌酐和糖化血红蛋白(HbA1c)分析 肌酐清除率以Cockcroft’s公式计算；肾小球滤过率以MDRD公式通过血肌酐、年龄、种族和性别计算得出。根据全国肾脏基金会建议，将肾小球滤过率的预估值分为四个范围 (少于45.0m l/min/1.73m2，45.0ml/min/1.73m2～59.9ml/min/1.73m2，60.0ml/min/1.73m2～74.9mL/min/1.73m2， 高 于 75.0m l/min/1.73m2)。

1.2 .2血清胱抑素C、血清超敏C反应蛋白和白介素6检测 血清胱抑素C和血清超敏C反应蛋白的检测按照试剂盒使用说明以颗粒增强免疫透射比浊法进行，血清胱抑素C的总体变异系数 (CV)为1.2mg/L小于3.5%；血清超敏C反应蛋在10mg/L以下时总体变异系数为3.9%。白介素6的检测用高灵敏度的ELISA试剂盒，检测灵敏度达到0.1 pg/mL。检测结果表明：白介素6的总体变异系数小于7%。以高效液相色谱法检测糖化血红蛋白，其参考区间小于5.2%，总体变异系数小于3%。

1.2 .3动态血压的测量 通过无创示波法血压检测系统进行动态血压的检测。血压和心跳的值可以在24h内每15min自动检测和记录一次。

1.3 统计分析

1.3 .1通过t检验和相关系数分析 分别对实验组和对照组的血清胱抑素C、内生肌酐清除率、肾小球滤过率进行比较。由于白介素6和血清超敏C反应蛋白水平显著的不对称，利用非参数统计(曼-惠特尼U检验)进行分析。

1.3 .2反向逐步多重回归分析 血清胱抑素C作为总体的因变量，外周动脉疾病、肾小球滤过率、身体质量指数、年龄、臀围、糖化血红蛋白、24h脉搏压和白介素6的对数值作为自变量，进行回归分析。

1.3 协方差分析 将外周动脉疾病和不同分级的肾小球滤过率作为自变量，年龄和白介素6的对数值作为因变量。由统计软件(STATISTICA，第七版)完成所有统计分析和数据管理。被用来检验外周动脉疾病在血清胱抑素C一项中的检出效率以及分析外周动脉疾病与肾脏损害可能的相互作用。

2 结果

2.1 各项基本生理特性和各项血液特定组分 外周动脉粥样硬化患者血清中Cys C的浓度非常明显高于健康人群(P＜0.01)。而在所选取的样本中，肌酐清除率或肾小球滤过率在实验组和对照组之间无统计学上的差异(P＞0.05)，从而基本排除了因肾小球病变对试验结果的影响。外周动脉粥样硬化患者的IL-6和CRP的浓度均非常显著高于健康对照组 (P＜0.01)，此结果和以前文献报道一致[3]，见表1。

2.2 血清Cys C浓度与其他各基本生理特性和血液特定组分浓度的相关性分析结果表明，在实验组和对照组中Cys C浓度与肌酐清除率、肾小球滤过率均呈负相关(γ＝-0.44～-0.78，P＜0.001)；Cys C 浓度与hs-CRP、IL-6 浓度的对数值呈正相关(γ＝0.30～0.38，P＜0.01～0.001)，见表 2。

2.3 多元回归分析 将Cys C的浓度作为因变量动脉粥状硬化症状、GFR、Log IL-6进行回归分析，结果显示，Cys C浓度可以用于预期外周动脉粥样硬化(见表3)。在协方差分析中，当肾小球滤过率或者肌酐清除率、白介素6作为相关变异加入时，外周动脉粥样疾病组的血清胱抑素C的值依然很高 (见图1)。2.4肾小球滤过率评估肾功能损害情况 根据肾小球滤过率的数值，将所选取的实验对象的数值分为严重、中度、轻度肾脏病变和无肾脏病变四组。根据此分组，同样将IL-6浓度的对数值，年龄作为相关变异加入时，对Cys C浓度进行协方差分析，结果显示外周动脉粥状硬化患者和各种级别的肾小球清除率之间的Cys C浓度之间具有显著的相关性(图2)。

表1 患者组与健康组的各项基本生理指标和血液特点组分比较(±s)

表1 患者组与健康组的各项基本生理指标和血液特点组分比较(±s)

外周动脉粥样硬化组(实验组,n=100)健康组(对照组,n=95) P＞0.05＞0.05＞0.05＜0.05＜0.001＞0.05＞0.05＞0.05＞0.05＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＞0.05＜0.001＞0.05＜0.001年龄体重ABI血压(收缩压/舒张压)高血压史Ⅱ型糖尿病史心肌萎缩肌酐清除率(ml/min)肾小球滤过率(ml/min1.73m2)Cys C浓度(ng/L)hs-CRP浓度(mg/L)IL-6浓度(mg/L)HbA1c浓度(%)胆固醇浓度(mmol/L)HDL浓度(mmol/L)LDL浓度(mmol/L)甘油三酯(mmol/L)68±8 26.6±3.2 0.66±0.19 0.96±0.05 61 16 44 81±27 76±21 68±8 25.7±3.7 1.11±0.11 0.94±0.05 17 70 82±22 79±14 1.09±0.40 2.63 1.60 4.8 5.4±0.9 1.2±0.3 3.4±0.8 1.7 0.95±0.17 1.45 0.98 4.7 5.5±0.9 1.3±0.3 3.5±0.8 1.3

表2 Cys C浓度与其他临床指标之间的单变量相关性分析[γ(p)]

图1 以肾小球率过滤和白介素6的对数值作为共变量，用协方差方法分析实验组与对照组中Cys C浓度，结果如上。F(1.191)=9.50，P≤ 0.01。

表3 全部受试人群(n=95)中的逐步多元回归分析

表4 肾小球滤过率评估肾功能损害情况(n、%)

图2 外周动脉粥状硬化患者和各级别范围的肾小球清除率患者Cys C浓度的相关性。以年龄、白介素6的对数值作为共变量，对Cys C浓度进行协方差分析。结果如上。竖线表示0.95的置信区间。

3 讨论

由于血清中Cys C浓度易于快速、准确测定，所以在临床上被推荐为监测肾功能滤过率的一个可靠指标[4]。然而，最近的研究发现血清中Cys C的浓度可能会被其他一些与肾功能无关的因素所影响，如年龄、性别、体重、体内炎症情况和心血管疾病等[5]。动脉粥样硬化是一种较为常见的心血管疾病，同时其发生的机理也和炎症反应有关，所以其可能会影响血清中Cys C的浓度，从而干扰对肾功能的评估。但国内外关于外周动脉粥样硬化和血清中Cys C浓度之间关系的报道并不多，而且其结论也不是十分明确[6]。我们通过对100例外周动脉粥样硬化病例的研究分析，发现和健康对照组相比，实验组中血液Cys C的浓度存在着显著的升高；然而肾小球滤过率或肌酐清除率在实验组和对照组中并没有明显的差异。这可能是由于和肌酐相比，Cys C用以评价肾小球滤过率无论是敏感度还是特异性都很高。我们将肾小球滤过率或肌酐清除率作为一个共变量，对Cys C浓度进行协方差分析后，实验组中血清Cys C浓度仍然比健康对照组有显著提高。因此，在外周动脉粥样硬化患者人群中，血清Cys C浓度的升高不仅仅与肾功能的下降有关，并且可以将其作为判断外周动脉硬化的重要指标。

动脉粥状硬化通常被视为与炎症反应相关的心血管系统疾病，其病理机制为：血管内毒素物质的沉积对血管造成伤害，引起体内炎症反应，使免疫系统的淋巴细胞、T细胞在受损部位集结，同时引起相应部位的血管平滑肌增生；如果这种伤害因素一直存在，就会使体内的炎症反应持续激活，随着时间的推进，就会在血管的相应部位出现斑块、结缔组织等异常的组织形态，最终导致血管的硬化。IL-6和hs-CRP作为诱导炎症反应的重要分子，其水平的变化通常在临床上用于检测体内炎症反应的情况，所以也被作为一类重要的血清标记物来判断动脉粥样硬化。本文研究发现，将IL-6或hs-CRP的水平作为共变量加入进行多变量分析，实验组中血清Cys C浓度仍然显著高于健康对照组，此结果表明Cys C可能可以作为一个独立的血清标志物用于检测动脉粥样硬化。同时，在动脉粥样硬化患者中Cys C浓度的异常升高，可能反映了体内组织蛋白酶和其抑制分子Cys C表达水平之间失衡，成为动脉粥样硬化另一主要诱因。

通过对血清中Cys C浓度和外周动脉粥样硬化的研究，初步阐明了其相互之间存在一定的相关性；结合肾小球滤过率、IL-6和hs-CRP等指标的测定，Cys C对于诊断外周动脉粥样硬化具有潜在的价值，并且可以用于衡量患者不同的动脉粥状硬化程度。但由于我们在选择样本时规定了年龄、性别等因素，所以对于Cys C水平的上升和动脉粥样硬化的发生之间是否存在着一定的因果关系，或Cys C水平的上升是否可以用作动脉粥样硬化的风险评估指标等问题有待进一步研究。

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