脑卒中后抑郁症患者载脂蛋白 E水平检测*

李 静,宋景贵#,穆俊林,张朝辉,李文强

1)新乡医学院第二附属医院神经内科新乡 453002 2)河南省生物精神医学重点实验室新乡 453002 3)新乡医学院第二附属医院心身二科新乡 453002

#通讯作者,男,1962年10月生,博士,教授,研究方向:脑器质性精神障碍,E-mail:songjg62@126.com

脑卒中后抑郁症(post-stroke depression,PSD)是脑卒中后常见的并发症之一,是脑卒中后情绪障碍的主要表现形式[1],是以情绪低落、自罪自责和睡眠紊乱等为主要表现的情感障碍性疾病。最新研究[2-4]表明载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)与心脑血管性疾病相关,是动脉粥样硬化和脑卒中的危险因素,同时ApoE基因与血管性疾病患者的抑郁情绪有关,许多血管性疾病患者均伴发有抑郁情绪[5],因此推测ApoE影响PSD的发生。该研究旨在了解PSD患者ApoE水平,从而为PSD的临床治疗提供新的客观依据。

1 对象与方法

1.1 研究对象 所有病例均为 2009年1月至 10月在新乡医学院第二附属医院神经内科住院的患者,共 67例,脑卒中诊断均符合文献[6]诊断标准,均行头颅CT或MRI检查证实,抑郁症的诊断均符合第3版中国精神疾病分类方案与诊断标准(CCMD-3)[7]。PSD组:共32例,1例标本发生溶血,实际入组 31例;男 18例,女 13例;年龄 43～76 (64.2±8.7)岁;病程3.0～50.0(18.6±10.2)d;文化程度:大学 7例,中学 13例,小学 11例。脑卒中非抑郁组:共 35例,2例标本发生溶血,实际入组33例;男19例,女14例;年龄43～78(64.5±11.6)岁;病程2.0～52.0(19.1±11.4)d;文化程度:大学 6例,中学 15例,小学 12例。

1.2 ApoE mRNA的测定 采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-real time PCR)检测ApoEmRNA表达量。采用Primer 5.0软件设计人ApoE引物,由大连宝生物工程有限公司合成。序列如下:上游为5'-GGGTCGCTTTTGGGATTACCTG-3',下游为5'-CAACTCCTTCATGGTCTCGTCC-3';GAPDH作为内参照,上游为5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3',下游为5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'。按RNA提取试剂盒说明书中的操作步骤提取总RNA后逆转录为cDNA。逆转录反应体系为:莫洛尼鼠白血病病毒缓冲液5μL,普通型dNTP 1.25μL,核酸酶-游离水1.75μL。实时荧光定量PCR反应体系25μL:核酸染料(SYBRII)12.5μL,上、下游引物各1μL,cDNA溶液6μL,去离子双蒸水4.5μL。反应条件:95℃预变性3min;95℃变性25 s,60℃退火30 s,72℃延伸1min,共40个循环。取目的基因阈值循环数(Ct值)倒数与内参Ct值倒数之比作为目的基因相对表达量。

1.3 血清ApoE蛋白水平测定 仪器采用上海枫岭生物技术有限公司FTC-2000荧光定量基因扩增仪和芬兰雷勃MK3全自动酶标仪;试剂盒为武汉中美科技有限公司产人ApoE试剂盒(产品编号: E0704h)。采用酶联免疫吸附法检测血清ApoE水平。将血清标本按ApoE酶联免疫分析试剂盒说明书操作步骤测定,应用酶联仪在450 nm波长处进行测量。

1.4 统计学处理 采用SPSS 13.0进行分析,数据均进行正态性检验和方差齐性检验,各组数据均符合正态分布且方差齐,2组间ApoEmRNA和蛋白水平的比较采用两独立样本的 t检验,检验水准 α= 0.05。

2 结果

PSD组ApoEmRNA表达量低于脑卒中非抑郁组,而PSD组血清ApoE水平则高于脑卒中非抑郁组,见表1。

表1 2组患者ApoE mRNA表达量及血清ApoE水平比较

3 讨论

目前对脑血管疾病的发病因素研究成为热点之一[8]。而 PSD作为脑卒中后常见的精神障碍疾病,不仅给患者带来了躯体和精神上的痛苦,而且增加了家庭和社会的负担,增加病死率和卒中复发风险,降低患者回归社会的比例[9]。因此,关于 PSD的相关研究越来越受到人们关注。

ApoE相对分子量约为34 000,是一个含有299个氨基酸、结合有磷脂的糖蛋白,正常人血浆ApoE水平为0.03～0.05 g/L。同时它是脑组织中最重要的载脂蛋白,由星形细胞和少突胶质细胞合成,存在于脑脊液的高密度脂蛋白样脂蛋白残粒中,参与脑组织中脂质/胆固醇的运输与清除,在细胞膜及神经元网络的维持、神经组织细胞再生、轴突及突触修复或重建等方面起着重要作用[10]。有研究[11-12]表明ApoE不仅与血脂代谢及心脑血管疾病有关,而且与躯体疾病伴发的抑郁情绪有关,很多躯体疾病都伴发有不同程度的焦虑抑郁情绪,如ApoEε4等位基因在冠心病患者抑郁情绪的发生中起着不可忽视的作用。

该研究结果显示:PSD患者外周血清ApoE水平高于脑卒中非抑郁组,而PSD患者ApoE mRNA相对表达量低于脑卒中非抑郁组。证实了 PSD患者ApoE水平存在异常,即外周血清ApoE水平增高,ApoEmRNA表达量降低。可能原因为:当PSD患者外周血清ApoE水平增时,高水平的ApoE可引起机体反射性调节,从而使机体单核细胞中ApoE mRNA表达量降低,进一步证实了ApoE与躯体疾病及其伴发的抑郁情绪有关。

总之,作者认为外周血清ApoE水平增高可为PSD的临床诊治提供参考。关于ApoE如何具体影响PSD的发生机制有待进一步研究探讨。

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