瞬时受体电位通道C3/6与大电导钙激活钾通道在肾小球足细胞表面转运中的作用

由Slo 1基因编码的大电导钙激活钾通道（BKCa）与各种瞬时受体电位通道C（TRPCs）在许多细胞系上共表达，其中包括肾小球的足细胞（脏层上皮细胞）。在本实验中，通过免疫共沉淀和谷胱甘肽S-转移酶（GST）pull-down方法证实在分化的足细胞系上的BKCa通道与内源性的TRPC3/6通道相联系。2种TRPC通道在足细胞上与Slo1共定位，并且在人胚肾(HEK)293T细胞上TRPC通道蛋白与Slo1瞬时共表达。在HEK293T细胞上，经细胞表面生物素化方法以及共聚焦显微镜测定，TRPC6的表达可增加Slo1亚基的剪切变体(Slo1 VE⁃DEC)。经膜片钳全细胞以及膜内面向外记录显示，BKCa通道电流会随TRPC6的共表达而增大。相反，TRPC3无论对HEK293T细胞上BKCa的表达还是对电流峰值均无影响。在足细胞，经小干扰RNA（siRNA）敲除内源性TRPC6，使内源性Slo1通道细胞表达下降，但是敲除TRPC3却没有影响。同时，敲除TRPC6也会降低足细胞BKCa通道的电压激活外向电流，TRPC3则无此作用。这些资料表明TRPC3/6通道蛋白能与Slo1相结合，并且这种共定位可能成为BKCa通道激活的Ca2+库。TRPC6通道在足细胞上BKCa通道亚基的表达调控中起重要作用。由Slo1基因编码（也被称为KCNMA1）的大电导钙激活钾离子通道（BKCa）在大量可兴奋或不可兴奋组织上均有表达并调控许多生理进程。钙离子通过结合到BKCa通道C末端的复合位点，将其电压激活的依赖性转换为生理水平下的膜电位。BKCa通道通常表现出对钙离子相对较低的亲和力，并且只在钙离子浓度高于胞浆钙离子浓度时才会簇状激活。胞质钙离子缓冲实验操作提示BKCa通道的激活至少需要质膜上的钙离子通道的部分共定位。与此相一致的是，在大脑中表达的BKCa通道显示能结合在不同类型电压激活钙通道的亚基上，从而形成通道复合体，这种排列提供了一种快速负反馈的结构基础，因为BKCa通道的钙依赖激活会导致神经元的复极化，电压激活钙离子通道的失活以及钙离子内流的终止。