经颅及颈动脉制作神经源性高血压模型的比较研究

刘佳，夏大胜

（天津医科大学一中心临床学院心内科，天津300192）

高血压是目前威胁人类健康的最重要疾病之一，愈来愈受到人类的重视，针对高血压的基础与临床研究也多种多样，其中实验动物高血压造模是施行研究的基础。本实验旨在针对神经源性高血压造模，检测经颈动脉制作神经源性高血压的效果。

1 材料与方法

1.1 实验材料 有创血压监测仪（Philips公司生产），YH24型生理压力传感器（北京航天生物医学工程研究所出品）。3%戊巴比妥钠（Sigma公司生产），速眠新（长春军事医学科学院），外科手术基本器械（直剪、弯剪、眼科剪、止血钳、皮镊等）。

1.2 实验动物 选取24只杂种犬，雌雄不限，体重15～20kg，随机分为经颅造模组与经颈动脉造模组，每组各12只。

1.3 方法

1.3.1 高血压模型制作

1.3.1.1 经颅高血压造模过程：采用3%戊巴比妥钠和速眠新联合肌肉麻醉；气管插管后行右侧股动脉穿刺，进行动脉血压监测；手术开始后每间隔30～ 60min静脉内推注芬太尼0.5～1.0mL。将实验犬侧卧，向非手术侧旋30°～45°，沿犬后正中旁开1cm作直切口长约5cm，上达枕肌中央，下至C2水平，暴露枕骨嵴，用磨钻磨除部分乳突和枕骨，形成直径l cm的骨窗；显微镜下暴露后组颅神经，小心辨认迷走神经、舌咽神经及副神经，将临近的小脑前下动脉或小脑后下动脉髓外侧至小脑背外侧段小心分离，游离近段约l～1.5cm后将其贴附在延髓左侧舌咽、迷走神经出脑干段，对其形成直接压迫；为防止血管移位，将硅胶或乳胶球囊置于血管的外侧支撑血管，使血管压向迷走、舌咽神经。

1.3.1.2 经颈动脉高血压造模过程：采用3%戊巴比妥钠和速眠新联合肌肉麻醉，手术组取颈部竖直切口，逐层分离皮肤、肌肉、结缔组织等，暴露颈部左侧颈总动脉及迷走神经主干，分离迷走神经主干，先将1～2mm长的5-0铬制肠线轻置于迷走神经周围，然后将迷走神经与颈部结缔组织固定，使其与颈总动脉形成交叉压迫，造成颈总动脉对迷走神经的长期搏动性压迫，逐层缝合切口。术后给予肌注抗生素抗感染3d。

1.3.2 血压测定 实验犬行有创血压监测保证血压数值的准确性和稳定性，于股动脉穿刺留置鞘管，连接血压换能器及有创血压检测仪，检测完毕拔出鞘管，局部按压止血，术后给予肌注庆大霉素抗感染3d。

1.3.3 血清学检查 实验动物在术前及术后均取静脉血，离心后留取血清，每1mL上清液中加入酶抑制剂PMSF（含Na-EDTA.82羟基喹啉和22巯基丙醇）20μL，于-80℃储存待用。应用放射免疫法测定血管紧张素II（AngII）的浓度，应用酶联免疫吸附法测定肾素活性（PRA）及醛固酮（Ald）的浓度（中国同位素公司北方免疫试剂研究所）。

1.3.4 术中失血的收集 采用称量血纱布重量的方法。术前应电子称称量术中要使用的纱布，术中将被血浸透的血纱布集中，助手及时将血纱布钳夹到电子秤上称重，并记录所称重量的结果，计算后的累积量即为实验犬术中纱布蘸血的出血量。

1.4 统计学处理 应用SPSS16.0统计软件，对各实验造模前后血压比较采用配对t检验进行统计学处理，对两实验组间术中出血量及造模后血压的比较应用两组独立样本的t检验进行统计学处理。用The Kaplan-Meier followed by Log rank对两实验组间犬的死亡率进行分析。统计结果以P<0.05为有显著差异。确认造模血压升高值有统计学意义，模型制作成功。

2 结果

2.1 血压变化 两造模组血压均有明显的升高，经颅高血压造模与经颈动脉高血压造模其收缩压（SBP）及舒张压（DBP）在术后均有显著升高（P<0.05），且随时间的延长血压日趋稳定。两组之间造模后各时间点收缩压和舒张压差异无统计学意义（P<0.05），见表1。

表1 实验犬股动脉有创血压测量值（±s,mmHg）Tab 1 Measurement of intrusive femoral blood pressure in dogs

表1 实验犬股动脉有创血压测量值（±s,mmHg）Tab 1 Measurement of intrusive femoral blood pressure in dogs

*P<0.05

12周* 163±14.8108±7.8164±13.6110±5.7指标经颈SBP经颈DBP经颅SBP经颅DBP基础值137±13.688±13.1135±11.384±10.91周* 148±18.996±13.3155±14.798±12.32周* 156±11.1104±8.2158±12.6103±8.54周* 163±14.4110±7.8162±16.2110±7.58周* 159±16.1109±8.9163±11.3111±6.6

2.2 神经内分泌指标 为观察经颈动脉高血压造模方法对交感神经系统的影响，分别于术前、造模后4周、8周、12周检测PRA、AngII及Ald的水平，结果显示：经颈动脉高血压造模后，PRA、AngII及Ald水平随时间的推移均明显升高，差异有显著性（P<0.05），两组间各指标未见明显差异（P>0.05），见表2。

表2 经颈动脉造模的神经内分泌指标监测结果（±s）Tab 2 Measurement of neuroendocrine index in transcarotid modeling dogs

表2 经颈动脉造模的神经内分泌指标监测结果（±s）Tab 2 Measurement of neuroendocrine index in transcarotid modeling dogs

*P<0.05

造模后12周* 2.2±1.44120±25.27.5±1.731.8±0.96117±19.97.7±2.21指标经颈PRA（ng/mL）经颈AngII(pg/mL)经颈Ald(ng/dL)经颅PRA（ng/mL）经颅AngII(pg/mL)经颅Ald(ng/dL)基础0.26±0.0976.9±14.31.8±1.270.32±0.0480.3±9.21.5±1.11造模4周* 0.49±0.3586.5±13.74.6±2.590.42±0.1289.9±10.74.9±1.98造模后8周* 0.71±0.5797.1±21.96.6±3.340.93±0.35104.7±13.36.3±4.17

2.3 死亡率分析 经颅造模组与经颈动脉造模组犬均有一定的死亡率，其中经颅造模组实验犬死亡率明显高于经颈动脉造模组实验犬,差异有统计学意义（P<0.05），见表3。

表3 两造模组死亡个数及死亡率比较Tab 3 Comparison of mortality between two groups

2.4 术中失血量分析 经颅动脉造模术中平均失血量为（55.7±6.4）mL，明显高于经颈造模术中平均失血量（7.5±1.8）mL，差异有统计学意义（P<0.05）。

3 讨论

随着高血压患病率的逐年上升，制备稳定可靠的高血压模型对于探索高血压患病机制、了解高血压对其他脏器的影响有着重要意义。目前根据模型制作方法的不同，高血压实验动物模型主要包括3类：自发性高血压、诱发性高血压和基因工程高血压动物模型[1]，其中神经源性高血压模型因可高度模拟人高血压的形成过程，且适用于降压药物的筛选[2]，一直是众多学者关注的热点方向[3-4]，本实验旨在探索目前两种神经源性高血压模型的制作效果。

神经源性高血压模型[5]机制主要通过延髓左侧第Ⅸ、X颅神经入脑干区受搏动性血管压迫导致减压反射的传入冲动减少以及延髓头端腹外侧神经元受刺激，通过交感神经节支配肾上腺髓质、心脏和血管来调节心血管活动，控制外周阻力，最终导致血压增高[6]。本实验结果显示，两组造模方法造模后收缩压及舒张压水平均显著升高，考虑搏动性压迫对神经纤维或细胞体产生的影响远大于持续性压迫，这种搏动性压迫干扰了压力感受器在每个心动周期中的搏动性冲动传入，迷走神经冲动传入减弱，迷走神经的抑制功能减弱，交感活动加强，表现为肾素-血管紧张素-醛固酮系统的激活及儿茶酚胺分泌增加，最终导致血压升高[7]。此前已有研究结果表明，经颅高血压造模可影响PRA、AngII及Ald等其他指标的水平[8-10]，本实验中颈动脉高血压造模方法中上述指标的变化趋势亦与上述研究相吻合。

结合本实验死亡率结果，考虑由于经颅造模过程需行开颅手术，实验操作过程复杂，技术难度较大，动物术中死亡率较高，器械要求高，且由于显微操作的限制不适宜于小动物造模，易受人为因素影响；此外经颅造模法因动物头皮及肌肉内血供丰富，手术过程需离断颈部肌肉，出血量明显增多；还可能造成脑组织损伤，且术后脑脊液漏、颅内感染等并发症多，不宜做大样本研究推广，然而其造模原理与人类原发性高血压形成的机制基本一致。经颈动脉鞘内血管搏动性压迫脱髓鞘的迷走神经而制作成神经源性高血压的动物模型，该实验过程仅取颈部切口，只需打开颈动脉鞘，操作非常简便，实验动物出血量少、死亡率低，且术后并发症较少，造模效果亦显著，可供大量造模研究使用。

本实验中两种神经源性高血压造模方法各具优缺点，其中经颈动脉造模由于其低死亡率、简便易行、适宜大样本制作更具优势，然而实验亦存在一定的不足之处，如血管压迫神经结扎松紧程度、术者操作熟练程度及对于颈动脉及术中对迷走神经的损伤都对高血压造模效果有不同程度的影响，在实际工作中应根据具体实验条件选择适宜的操作方法，从而获得科学可靠的实验结果。

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