青海西宁地区猪瘟感染情况调查

张成图,陈永忠,韩 乐,李启成,王淑琴

(青海省西宁市畜牧兽医站,青海西宁 810003)

猪瘟(CFS)是由黄病毒科瘟病毒属的猪瘟病毒(CFSV)引起的猪的一种高度接触性传染病。各个年龄段的猪群,不分品种对其均易感,病死率高,传播迅速,目前依然是危害我国养猪业主要传染病之一。根据世界动物卫生组织(OIE)制定的《陆生动物卫生法典》2005版,猪瘟被列为必须报告的传染病之一,近年来猪瘟的流行形式和发病特点都有所变化,主要表现为隐性感染、亚临床感染或非典型性,使得猪瘟成为现代养猪业的重大隐患,单凭临床诊断十分困难,必须以实验室检验技术。为了有效地控制猪瘟的发生,我们于2008年对西宁市郊生猪规模养殖场和调进生猪猪瘟流行情况,应用ELISA法进行了调查,调查结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 血液样品的采集 来自西宁市郊3个规模养殖场,分为5批调进生猪。

1.2 主要试剂 CFSV抗原、ELISA诊断试剂盒,美国IDEXX公司生产,批号为43220-RO11。

1.3 酶标仪 Labsystem Dragon Wellscan MK-3型。

1.4 操作方法 (1)加10倍的25μL样品稀释液和475μL被检血液到微量管中进行涡旋混合。(2)在室温下感作1 h,也可在温箱中涡旋相同时间,感作后可直接用于试验,即75μL血液到检测孔中,再加5×10μL样品稀释液(10×),稀释时用相等体积的蒸馏水,混合时用全盘/条震荡后按步骤进行。(3)步骤:每板每孔中用移液枪嘴加入稀释液 25 μL,加全血25μL;加猪瘟酶标二抗25μL;加诊断液25μL,振荡3 min后,室温孵化 1 h。

1.5 判定标准

1.5.1 计算样品和对照孔的吸收值(OD490)计算相对应的样品和对照的OD490值,样品合乎阳性对照的平均吸收值首先要成立,正确的OD490值应当是样品或阳性对照的OD490值减阴性对照的OD490值,正确OD490值=样品OD490值-阴性对照OD490值。

1.5.2 为了使试验数据真实可靠,阳性对照的OD490值必须大于0.50;阴性对照的OD490值应比阴性对照OD490值的20%还低,假如得不到该值,请检查所使用的仪器设备和操作步骤,检查后阴性对照的OD490值仍然很高的话,请求将样品重新10 000 r/min离心3～5 min,并重新检测。

2 结果判定

OD490值等于或大于0.30为阳性,OD490值等于或小于0.20为阴性,OD490值介于0.2～0.3之间为可疑。

2.1 调进生猪血清学检测结果 128份被检血清,检出阳性血清15份,阳性率为11.72%。其中一批检出阳性2份,阳性率为8.00%;二批检出阳性2份,阳性率为8.33%;三批检出阳性4份,阳性率为17.39%;四批检出阳性 1份,阳性率为 3.84%;五批检出阳性5份,阳性率为16.67%。结果见表1。

表1 调进生猪猪瘟检测结果

2.2 规模养殖场生猪血清学检测结果 108份被检血清,检出阳性血清8份,阳性率7.40%,其中一场检出阳性2份,阳性率为5.88%;二场检出阳性3份,阳性率为11.11%;三场检出阳性3份,阳性率为6.38%。本次检测结果为108份被检样品,阳性8份,阳性率7.40%。结果见表2。

表2 自繁自育猪瘟检测结果

3 讨论与小结

夹心ELISA是检测病毒抗原的常用方法,许多文献已报告了夹心ELISA方法的研究应用。Kosmidou等(1995)使用单克隆抗体技术建立了一种猪瘟病毒抗原的ELISA方法[1],在夹心ELISA方法的建立中,制备高效价、高生物活性的包被抗体和酶标抗体是本试验成功的关键所在。本试剂盒对全血、外周血液或细胞培养物敏感,夹心ELISA试剂具有较高的特异性和敏感性,可用于猪瘟的诊断[2],对检出的阳性病猪及时淘汰,从而有利于猪瘟的控制与净化。

目前,生猪规模养殖场非典型猪瘟的发病数有所上升,并已成为养殖场常见传染病之一,近几年我们通过针对性调查,证实目前猪瘟的流行病学临床症状、剖检病变等方面都发生了变化,临床检查很难判定原因,因而易被误诊而拖延最佳防治时机,必须结合实验室检验方法最终确诊。应用本方法可有助于对猪瘟的流行病学调查和诊断,从而快速扑灭疫点,控制疫情[3]。

从结果看,有23例阳性,已注射过猪瘟疫苗的猪仍呈阳性,笔者初步认为有两个可能原因:一是由于这几年规模化种猪场猪繁殖和呼吸道综合征及伪狂犬病等影响和破坏猪体免疫系统的新发传染病的出现,干扰了猪瘟抗体的产生和维持,导致疫苗免疫后仍出现猪瘟病猪;二是猪瘟疫苗毒株和流行毒株可能存在差异,进而导致免疫失败,鉴于此,我们必须一方面对猪瘟予以高度重视,增加对可疑样品的及时诊断和猪瘟疫情的动态监测,以保护养猪业的健康发展。

从调查结果来看,外省调进的生猪猪瘟阳性高于本地自繁自育猪场,因此我们应该加大对进入我市的生猪加强监管力度,仔猪调运严格实行报检制度,贩运仔猪到达后一律隔离观察,确认健康后方可进入流通环节,对防制和净化本病有重要作用。

目前疫苗注射仍然是防治本病的最重要的手段之一,因此,在生猪饲养的各个环节注重疫苗免疫注射,注意注射方法和注射剂量,确保免疫抗体达到保护水平,对控制和净化猪瘟具有决定性的意义。

[1] Kosmidou R,Ahi.H-J-Th,E weiland.Differentiation of classical swine fever virus(CSFV)strains using monoclonal antibodies against structu ral globulinproteins[J].Veterinary Microbiology,1995(4):111-118.

[2] 郑长生,万春云,王姣.ELISA和PT-PCR技术诊断猪瘟的研究进展[J].养殖与饲料,2009(3):48-51.

[3] 汤赛冬,周雪芳,周光胜,等.检测猪瘟抗原的夹心ELISA诊断试剂盒的制备标化和应用的研究[J].上海畜牧兽医通讯,2002,2:14-15.