系统性红斑狼疮相关自身抗体检测及临床意义

施新萍 浙江省立同德医院检验科 杭州310012

陈益明 杭州市余杭区妇幼保健院检验科

娄域峰 浙江大学附属第一医院检验科

系统性红斑狼疮相关自身抗体检测及临床意义

施新萍 浙江省立同德医院检验科 杭州310012

陈益明 杭州市余杭区妇幼保健院检验科

娄域峰 浙江大学附属第一医院检验科

目的:评价抗核抗体(ANA)、抗Sm抗体、抗dsDNA抗体、抗核小体抗体(AnuA)等相关自身抗体联合检测对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断价值。方法:采用间接免疫荧光法(IIF)、酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹法(LIA)测定1 409例SLE患者(SLE组)和1 058例其他结缔组织病患者(非SLE组)血清中ANA、抗dsDNA抗体、抗Sm抗体、AnuA等相关自身抗体含量。结果:除抗CENPB抗体、抗Jo-1抗体和抗Scl-70抗体在两组间差异无统计学意义(P＞0.05)外，其余自身抗体在两组间差异均有统计学意义(P＜0.05，P＜0.01);ANA阳性率79.1%，远高于非SLE组的34.7%(P＜0.01);SLE组患者除ANA抗体、抗SSA抗体和抗nRNP/Sm抗体性别间差异有统计学意义(P＜0.05)外，其它自身抗体在性别间差异无统计学意义(P＞0.05);SLE患者以女性发病最多，占90.8%(1 280/1 409)，发病年龄以20～39岁最高，占49.3%，其次为40～59岁，占37.0%。在ANA抗体阴性时，抗SSA抗体的阳性检出率较高。结论:SLE患者血清中可出现大量的自身抗体，联合检测灵敏度高、结果可靠、方法简便，对SLE的鉴别诊断和治疗有重要意义。

系统性红斑狼疮 自身抗体 检测 临床意义

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种自身免疫性结缔组织病，临床表现复杂，其发病机制主要为免疫平衡紊乱，自身抗体形成与免疫复合物的沉积导致组织损伤，近年研究表明，抗dsDNA抗体、抗Sm抗体和AnuA是诊断SLE较特异的自身抗体［1］，被认为是SLE的标记性抗体，但其敏感性各家报道不一。笔者应用IIF、ELISA和LIA检测1 409例SLE患者血清中的13种自身抗体，探讨特异性自身抗体联合检测在SLE诊断中的意义及临床应用价值。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2006年1月—2010年9月在浙江大学附属第一医院住院确诊的SLE患者1 409例，其中男129例，年龄11～77岁，平均(40.2± 15.3)岁;女1 280例，年龄8～82岁，平均(37.3± 13.2)岁。疾病对照组为结缔组织病(CTD)患者1 058例，其中类风湿关节炎552例，原发性干燥综合征155例，肌炎/皮肌炎138例，自身免疫性肝炎28例，ASD 8例，原发性胆汁性肝硬化17例，强直性脊柱炎52例，其它疾病108例。1 058例中，男248例，年龄6～87岁，平均(52.2±18.1)岁;女810例，年龄3～85岁，平均(50.4±14.2)岁。诊断均符合1997年美国风湿病协会修订的SLE分类标准［2］。另选60名体检正常者血清作为健康对照组，男8名，女52名，年龄23～48岁，平均(38.3±10.1)岁。

1.2 标本采集 抽取待检者清晨空腹静脉血3mL，离心分离血清，不能及时检测的标本吸取血清，分装保存-20℃冰箱，分批检测。

1.3 ANA检测 用德国欧蒙公司提供的ANA(马赛克)IIF试剂盒，在第一次温育时，固定在载片反应区上的生物薄片中的HEp-2细胞和灵长类肝脏冰冻组织切片与稀释后的血清反应。如果标本阳性，IgG(也包括IgA和IgM)类特异性抗体与相应抗原结合。在第二次温育时，结合的抗体与荧光素标记的抗人IgG反应，然后用荧光显微镜观察特异性的荧光模型，滴度≥1∶80判断为阳性。

1.4 ANA谱检测 采用德国欧蒙公司提供的LIA，检测项目含以下11种特异性抗体:抗nRNP/Sm、Sm、SS -A、SS-B、抗Scl-70、抗Jo-1、dsDNA、着丝点蛋白B抗体(CENP B)、AnuA、抗组蛋白抗体(AHA)、线粒体-M2抗体(AMA-M2)。该试剂盒实验膜条上平行包被有经亲和层析纯化的抗原。在第一次温育时，已稀释的待测标本与实验膜条反应。如果是阳性标本，特异性的IgG(也包括IgA和IgM)抗体与相应的抗原位点结合。清洗后再加入酶标抗人IgG(酶结合物)进行二次温育，清洗后加入底物液，产生可观察的颜色变化。结果判断:有质控线表明结果有效，相对应的抗原出阳性线表明相应的抗体阳性。

1.5 其他检测 采用ELISA检测抗心磷脂抗体(ACA)，以120、12、2RKU(相对单位)/L的3个标准血清作曲线，对结果进行定量分析，并以12RKU/L的吸光度(A)值为定性分析临界值。

1.6 统计学方法 用SPSS13.0统计软件进行统计学处理。组间自身抗体阳性率比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

健康对照组60名体检正常者血清，均未检出自身抗体。SLE组与非SLE组比较，除抗CENP B抗体、抗Jo-1抗体和抗Scl-70抗体在两组间差异无统计学意义(P＞0.05)外，其余10种自身抗体在两组间差异有统计学意义(P＜0.05)，两组血清自身抗体阳性检出率见表1。

表1 两组血清自身抗体阳性检出率情况 例(%)

SLE患者ANA抗体、抗SSA抗体和抗nRNP/Sm抗体性别间差异有统计学意义(P＜0.05)，抗dsDNA、Sm、SSB、ACA、AunA、AHA和AMA-M2抗体，在性别间差异无统计学意义(P＞0.05)。

1 280 例女性SLE患者以20～39岁比例最高，占49.3%，其次为40～59岁，占37.0%，＜20岁和≥60岁分别占8.2%和5.6%，见表2。

表2 1 280例女性SLE患者血清标本中自身抗体阳性检出率 例(%)

ANA阳性标本中除抗SSA抗体和抗SSB抗体 外，抗 dsDNA、nRNP/Sm、Sm、ACA、AunA、AHA和 AMA-M2抗体，均随ANA滴度的升高而阳性检出率逐步提高。在ANA抗体阴性时，抗SSA抗体的阳性检出率较高，见表3。

表3 1 409例SLE患者不同ANA滴度血清标本中自身抗体阳性检出率 例(%)

3 讨论

SLE是一种系统性的自身免疫性疾病，临床表现复杂多样，早期表现常不典型，其发病机理与自身免疫有关，血清学的特点是具有多种自身抗体，因此，血清中自身抗体的检测对SLE诊断有非常重要的意义。

本研究中，SLE患者ANA阳性率79.1%，远高于非SLE患者组的34.7%，差异有统计学意义(P＜0.01)，低于周仁芳等报道的94.0%［3］，高于任淑子等报道的76.9%［4］。ANA属非特异性自身抗体，敏感度高，但特异性差，可见于包括SLE在内的多种结缔组织病，被作为结缔组织病的筛选试验。

抗Sm抗体是SLE的血清标志性自身抗体，但敏感性低，其敏感性10.0%～40.0%，特异性97.0%～100.0%［5］。本研究显示，SLE组抗Sm抗体的阳性检出率25.5%，远高于非SLE组的2.3%，差异有统计学意义(P＜0.01)。抗Sm抗体对早期、不典型的SLE或经过治疗缓解后SLE回顾性诊断有很大帮助。

有研究表明［5-7］，抗dsDNA抗体和抗AnuA抗体是SLE的血清特异性自身抗体，其敏感性19.0%～82.0%，特异性 90.0%～95.0%，是目前公认的与SLE病情活动有关的抗体。本研究显示，SLE组抗dsDNA抗体和抗AnuA抗体的检出率分别为26.8%和22.4%，高于非SLE组的1.4%和3.0%，差异有统计学意义(P＜0.01)。Villalta等［8］认为，AnuA的敏感性高，特异性强，可能成为SLE诊断新的标记性抗体。

抗SSA抗体和抗SSB抗体为SLE的血清相关性自身抗体，此类自身抗体与某种自身免疫性疾病密切相关，但在其他疾病也可出现，且有一定的敏感性，如原发性干燥综合征(PSS)中的抗SSA抗体和抗SSB抗体，阳性率分别为70.0%和40.0%，对PSS诊断意义较大，但也常出现于SLE中，阳性率分别为50.0%和30.0%［9］。本组SLE患者中，抗SSA抗体和抗SSB抗体的检出率分别为68.1%和30.4%，高检出率可能与部分SLE患者出现继发性干燥综合征有关。本研究还显示，在ANA阳性标本中，抗SSA抗体和抗SSB抗体的阳性率是不随ANA滴度的升高而升高，有别于其它自身抗体，值得临床关注。

综上所述，对自身抗体的联合检测可提高SLE诊断的敏感性，更有利于全面分析病情所处的阶段，避免单项检测出现的漏诊情况，提高SLE的检出率，对SLE病情的诊断、分型、治疗、追踪和预后判定有重要的临床意义。

［1］Tikly M，Gould T，Wadee AA，et al.Clinical and serological correlates of antinucleosome antibodies in south africans with systemic lupus erythematosus［J］.Clin Rheumatol，2007，26(12):2121-2125.

［2］Hochberg MC.Updating the American College of Rheumatology revised criteria for the classification of systemic lupus erythematosus［J］.Arthritis Rheum，1997，40(9):1725.

［3］周仁芳，胡朝军，张蜀澜，等.临床标本抗核抗体102651例检测结果回顾性分析［J］.中华检验医学杂志，2009，32(12):1339-1343.

［4］任淑子，金春花，姜春善，等.延边地区SLE患者ANA及ENA多肽抗体谱析［J］.中华实验诊断学，2006，10(3): 284-285.

［5］刘燕鹰，刘霞，栗占国，等.自身抗体测定在风湿病诊断中的意义及研究进展［J］.现代实用医学，2008，20(10): 751-753.

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［8］Villalta D，Tozzoli R，Bizzaro N，et a1.The relevance of autoantigen source and cutoff definition in antichromatin(nucleosome)antibody immunoassays［J］.Ann N Y Acad Sei，2005，1050(1):176-184.

［9］李永哲.自身抗体检测技术临床推广应用和质量保证工作中应重视的问题［J］.中华检验医学杂志，2006(9)，29:769-772.

Detection and Diagnositc Value of Autoantibodies in Paitents with Systemic Lupus Erythematosus

SHI Xinping，CHEN Yiming，LOU Yufeng.Tongde Hospital of Zhejiang Province，Hangzhou(310012)，China

Objective:To evaluate the diagnostic value of autoantibodies in patients with systemic lupus erythematosus(SLE).MethodsThe serum content of autoantibodies in 1 409 SLE patients and 1 058 patients with other connective tissue disease(non-SLE group)were detected by using IIF，ELISA，and LIA methods.Comparison was carried out between the 2 groups.ResultsThe serum content of autoantibodies was significantly different between the 2 groups(P＜0.05 or P＜0.01)except for anti-CENP B antibody，anti-Jo-1 antibody，and anti-Scl-70 antibody(P＞0.05).The positive rate of ANA was markedly higher than that in the non-SLE group(79.1%vs 34.7，P＜0.01).In SLE patients，the content of autoantibodies did not differ between male and female patients except for ANA，anti-SSA antibody，and antinRNP/Sm antibody(P＜0.05);90.8%(1 280/1 409)of the SLE patients were female;49.3%of the patients aged from 20 to 39 years，followed by 37.0%of aging from 40 to 59 years.When ANA was negative，the positive rate of anti-SSA antibody was relatively high.ConclusionAutoantibodies can be detected in the sera of SLE patients.To detect the antibodies is easy and reliable to help diagnose SLE.

systemic lupus erythematosus antuantibody detection clinical value

浙江省中医药科技计划项目(No.2008CB033)

陈益明，E-mail:cxy40344@163.com

2010-11-22