慢性肺源性心脏病患者血小板糖蛋白CD61、CD62p表达及应用丹红的影响

高鹏 张丽娜 吴爱军

慢性肺源性心脏病患者血小板糖蛋白CD61、CD62p表达及应用丹红的影响

高鹏 张丽娜 吴爱军

目的 通过检测慢性肺源性心脏病(简称肺心病)患者在使用丹红治疗前、后血小板CD61、CD62p表达水平变化,探讨丹红注射液在肺心病治疗中的作用。方法 将入选的肺心病患者分为治疗组和对照组,治疗前、后采静脉血,在流式细胞仪下,检测 CD61、CD62p阳性血小板百分率,对比两组患者治疗前、后血小板CD61、CD62p表达和血小板活化状态变化。结果 肺心病患者治疗组治疗前CD61、CD62p阳性血小板百分率分别为(85.23±4.51)%,(46.73±6.68)%,丹红治疗7 d后,阳性血小板百分率分别为(79.65±6.74)%,(41.69±7.86)%,肺心病患者对照组治疗前阳性血小板百分率分别为(83.79±4.92)%,(48.25±4.84)%,对照组治疗7 d后,阳性血小板百分率分别为(82.93± 5.02)%,(47.41±5.37)%,两组患者治疗前CD61、CD62p阳性血小板百分率无统计学差异,丹红治疗前、差异有统计学意义。结论 丹红注射液可抑制肺心病患者外周血小板表面 CD61、CD62p表达,血小板活性下降。

肺心病;CD61;CD62p;血小板活化;丹红注射液

有资料显示,在肺心病死亡患者的尸检中约有 89.8%的病例存在着肺细小动脉原位血栓形成[1]。表明肺心病患者易致血栓形成。进一步研究发现肺心病患者血小板表面CD61、CD 62p表达增强,体内存在血小板活化,这可能是导致血栓形成的一个主要原因,故肺心病患者在治疗过程中,抑制血小板表面CD 61、CD62p表达对防止肺血栓形成,有重要意义。本研究比较肺心病患者在使用丹红治疗前、后血小板CD61、CD 62p表达水平变化,探讨丹红注射液在肺心病治疗中的作用。

1 材料与方法

1.1 病例资料 2009年 10月至 2010年 2月间于长春市中心医院呼吸科住院的肺心病急性发作患者 60例,男 46例,女14例,年龄 52～71岁,平均 61.5岁。共分两组,治疗组 30例和对照组 30例。对照组在入院时及治疗后 7 d采血,本组患者治疗方案为抗炎、化痰、平喘、改善通气、保护胃黏膜治疗。治疗组加用丹红注射液(济南步长制药有限公司)治疗,其余采血时间、治疗方案与对照组相同。临床诊断符合 1977年全国第二次肺心病专业会议制定的诊断标准。所有观察者均无慢性肝肾疾病、糖尿病、心脑血管及血液系统疾病,未使用阿司匹林、潘生丁、肝素等影响血小板功能的药物。

1.2 试剂与仪器 ①Beckman-Coulter公司生产的EPICS ELITE型流式细胞仪;②北京离心机厂生产LDZ-5-2型自动平衡离心机;③日本三洋MPR-510型试剂冷藏柜;④异硫氢酸荧光素(FITC)标记的抗CD 61(Beckman-Coulter公司)单克隆抗体(Beckman-Cou lter公司),藻红蛋白(PE)标记的抗CD 62p单克隆抗体(Beckman-Coulter公司);⑤PBS缓冲液(本室自配)。

1.3 检测步骤 ①取EDTA-K 2抗凝血5μl分别加入对照管和检测管管底,再加入100μl PBS;②取同型阴性对照 10μl加入对照管,取CD 61-FITC和CD 62p-PE各10μl加入到检测管,轻轻混匀,室温避光孵育15 min;③加入2～3 ml PBS (1.0%PFA)终止反应;④24 h内上机分析。

1.4 分析方法 ①统计学比较治疗组与对照组治疗前CD61、CD 62p阳性血小板百分率;②统计学比较治疗组治疗前、后CD 61、CD 62p阳性血小板百分率;③统计学比较对照组治疗前、后CD 61、CD 62p阳性血小板百分率;④CD61,CD62p阳性血小板百分率用均值 ±标准差（±s)表示,统计学比较采用 t检验。

2 结果

表1 两组治疗前后CD61,CD 62p阳性血小板百分率比较

2.1 CD61的表达

2.1.1 治疗组治疗前CD61阳性血小板百分率(85.23± 4.51)%,对照组治疗前(83.79±4.92)%,t=1.18,组间比较P＞0.05。

2.1.2 治疗组治疗前CD61阳性血小板百分率(85.23± 4.51)%,治疗组治疗后(79.65±6.74)%,t=3.77,组间比较P＜0.05。

2.1.3 对照组治疗前CD61阳性血小板百分率(83.79± 4.92)%:对照组治疗后(82.93±5.02)%,t=0.67,组间比较P＞0.05。

2.2 CD62p的表达

2.2.1 治疗组治疗前CD62p阳性血小板百分率(46.73± 6.68)%,对照组治疗前(48.25±4.84)%,t=1.01,组间比较P＞0.05。

2.2.2 治疗组治疗前CD62p阳性血小板百分率(46.73± 6.68)%,治疗组治疗后(41.69±7.86)%,t=2.67,组间比较P＜0.05。

2.2.3 对照组治疗前CD62p阳性血小板百分率(48.25± 4.84)%,对照组治疗后(47.41±5.37)%,t=0.63,组间比较P＞0.05。

3 讨论

血小板活化表达出多种分子标志物,CD 61、CD 62p是最具特异的血小板活化分子标志物。CD61介导细胞与细胞、细胞与基质相互作用的表面糖蛋白,静息及活化血小板表面均有大量GPⅡb/Ⅲa分子表达,当强烈的激活剂刺激血小板活化时,以隐蔽状态分布的 GPⅡb/Ⅲa也表达在血小板表面[2]。CD 62p是血管黏附分子家族中的一员,主要储存在血小板α颗粒及中等以上大血管内皮细胞的Weiber-Palade小体内,当血小板和血管内皮细胞受到凝血酶、组胺、TNF-α、缺氧、氧自由基等刺激后,α颗粒和Weiber-Palade小体质膜迅速与细胞膜融合,几秒至几分钟内 CD 62p在细胞表面表达到高峰[3-5]。CD 62p是血小板活化最特异的分子标志,其表达强度在活化和非活化血小板之间差别最明显[6],因此是目前最常用的血小板活化标志物。有研究报道,肺心病患者由于感染、缺氧、氧自由基、组胺等作用,CD 61、CD 62p表达增加,血小板存在明显活化,并参与、促进肺心病患者微小血栓形成,加重肺动脉高压。

丹红注射液的君药丹参,臣药红花,其活性成分可扩血管,抑制血小板,增加纤维蛋白的溶解活性,抑制血栓形成[7],丹红亦可有效保护细胞免受由缺血引发的氧化损伤及内皮屏障完整性。本实验中观察了应用丹红治疗肺心病患者前、后血小板表面CD 61、CD62p表达变化,结果显示血小板表面CD61、CD 62p表达下降,较对照组差异有统计学意义,提示在肺心病患者治疗过程中,可以应用丹红改善微循环、抑制血小板聚集、缓解肺动脉高压、减轻心功能不全,达到改善预后,缩短治疗疗程的作用。

[1] 王辰,杜敏捷.慢性肺源性心脏病急性发作期肺细小动脉血栓形成的病理观察.中华医学会杂志,1997,02:44-46.

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[7] 陈克永.丹红注射液对血液流变学影响的临床观察.中国现代医生,2008,04:97.

130051长春市中心医院干部一疗区(高鹏),消化内科(张丽娜)