RP-HPLC法测定中药挥发油微乳中甲基丁香酚的含量

杨蒙蒙，张婷婷，刘新友，覃 华，张 琰(第四军医大学唐都医院药学部，西安 710038)

甲基丁香酚存在于所有细辛属植物中，是中国细辛属植物挥发油的特征性成分［1］，可作为细辛挥发油的品质评价标准。中药挥发油微乳由肉桂、细辛等几种中药挥发油提取部位组成，用于治疗皮肤炎症、溃烂等，其中细辛挥发油为主要药物成分之一，本研究建立RP-HPLC法检测中药挥发油微乳中甲基丁香酚的含量，为其质量控制提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

可见紫外分光光度计(厂家:岛津，型号:UV-265);电子天平(厂家:岛津，型号:BL-620S);超声仪(厂家:北京医疗设备二厂，型号:CX-I);高效液相色谱仪(厂家:岛津，型号:SPD-10AVPSCL-10AVP/LC-10ATVP);保护柱 (厂家:大连依利特分析仪器有限公司，型号:C184.6 mm×10 mm);色谱柱(厂家:大连依利特分析仪器有限公司，型号:Hypersil ODS2 4.6 mm×250 m);

1.2 试药

中药挥发油微乳(第四军医大学唐都医院药剂科，批号:20090721、20090722、20090723);甲基丁香酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号:111642-200301);水为双蒸水;甲醇为色谱纯;容量瓶。

2 方法与结果

2.1 色谱条件［2］

色谱柱:Hypersil ODS2柱(4.6 mm×250 mm);流动相∶甲醇-水(80∶20);流速:1.0 mL·min-1，检测波长:275 nm，进样量:20 μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取甲基丁香酚对照品24.84 mg置10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1 mL相当于2.484 mg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

量取中药挥发油微乳适量，加甲醇溶解，超声20 min破乳，经0.45 μm滤膜过滤，收集续滤液作为供试品溶液。

2.4 线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液 125、250、500、1 000、1 500 μL置10 mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度。得到对照品标准溶液，分别精密吸取对照品溶液20 μL，注入高效液相色谱中进行测定，以峰面积为纵坐标，进样量(μg)为横坐标绘制标准曲线，得回归方程如下:Y=19 805X+7 004.7，r=0.999 1。测定结果表明甲基丁香酚在12.42～49.68 μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 阴性对照溶液的制备

按照处方比例，除去细辛，按制备工艺方法制得阴性对照样品。精密量取本品适量，加甲醇溶解，超声20 min破乳，经0.45 μm滤膜过滤，收集续滤液作为阴性对照溶液。结果在阴性对照样品的色谱图上，与甲基丁香酚相应位置无吸收峰，在供试品溶液色谱图上，甲基丁香酚与其他杂质峰达到基线分离，见图1。

图1 高效液相色谱图Fig 1 HPLC chromatogram

2.6 精密度试验

精密吸取甲基丁香酚对照品溶液20 μL，重复连续进样6次，依次测得峰面积为 492 785、491 515、488 368、487 628、486 640、499 524计算RSD=0.98%，表明仪器的精密度良好。

2.7 稳定性试验

取中药挥发油微乳供试品溶液 1 份，分别于 0、1、2、4、6、21 h进样，共 6次，每次进样 20 μL，峰面积的 RSD=3.7%(n=6)。

2.8 加样回收率试验

精密量取已知含量的中药挥发油微乳适量共6份，分别精密加入甲基丁香酚对照品适量，按“2.3”项下操作制备供试品溶液，过滤后按“2.1”项下色谱条件检测，进样量为 20 μL，计算回收率，平均回收率为98.51%，RSD为1.22%，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果(n=6)Tab 1 Results of recovery test(n=6)

2.9 样品含量测定

按“2.3”项下方法制备3份供试品溶液，分别精密吸取各20 μL进样，按色谱条件测定峰面积，以外标一点法计算甲基丁香酚含量，每份样品测定3次，结果见表2。

表2 样品中甲基丁香酚含量测定结果(n=3)Tab 2 Determination results of methyleugenol in sample(n=3)

3 讨论

中药挥发油微乳是一种水包油型微乳制剂，该微乳系统包括中药挥发油、油相、表面活性剂、助表面活性剂和水，如不对制剂进行前处理，则会导致油脂成分在色谱柱中残留，对柱子造成损害。对微乳的前处理主要是进行破乳，常用的破乳方法分为物理和化学法2种［3］，由于色谱流动相中含有甲醇且甲基丁香酚易溶于甲醇，因此选择甲醇为溶剂通过超声法进行破乳。甲基丁香酚文献报道的检测方法多采用气相色谱［4，5］，笔者采用RP-HPLC方法对中药挥发油微乳中的甲基丁香酚进行检测，在本研究的色谱条件下，中药挥发油微乳得到很好的分离且峰形佳、保留时间适中，同时系统具有很好的重现性和稳定性。本法简便、准确、可靠，灵敏度高，可用于中药挥发油微乳的质量控制。

［1］黄保希.细辛的化学成分研究述评［C］.中华中医药学会中药基础理论分会第二届临床中药学学术研讨会论文集，2009:407.

［2］吴振刚，王庆伟，刘雪英，等.反相高效液相色潽法测定细辛挥发油中甲基丁香酚及黄樟醚含量［J］.第四军医大学学报，2008，29(13):1175.

［3］李 萌，王杏林，葛志强，等.HPLC法测定依托泊苷亚微乳中的药物含量［J］.中国新药杂志，2007，16(17):1390.

［4］袁尚仪，魏俊德，林 洪.宜昌细辛挥发油化学成分的GC-MS测定分析［J］.中国中药杂志，2004，29(3):280.

［5］杨厚玲，邱 琴，陈婷婷，等.不同方法提取的北细辛挥发油的气质联用成分分析［J］.中国药学杂志，2007，42(13):1031.