地榆、地榆片、地榆炭的质量标准研究

陈新玉 ，李健和 ，黎银波 ，易利丹

1.郴州市第三人民医院药剂科，湖南郴州 423000；2.中南大学湘雅二医院药学部，湖南长沙 410011；3.湖南省药品检验所，湖南长沙 410001

地榆为蔷薇科植物地榆Sanguisorba officinalis L.或长叶地榆Sanguisorba officinalis L.var.longifolia(Bert.)Yü et Li的干燥根[1]。其性微寒、苦、涩、酸，归肝、大肠经，具有凉血止血，解毒敛疮之功效，临床主要用于便血、痔血，血痢、崩漏，水火烫伤，痈肿疮毒等症。收载于《中国药典》2005年版一部。地榆中含有多种化学成分，茎含槲皮素、山柰素、熊果酸、维生素C；花含矢车菊苷、矢车双菊苷；根含鞣质和三萜皂苷，此外，还有黄酮、蒽醌、甾体类等多种化学成分[2-3]。为有效控制其质量,在原标准的基础上，参考相关文献[4]，对鞣质含量测定法进行了改进，并研究建立了没食子酸的高效液相含量测定方法。现将研究结果报道如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器

北京普析通用TU-1901紫外分光光度计；日本岛津LC-2010A高效液相色谱仪。

1.2 试药

甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯；水为重蒸水；没食子酸对照品（由中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用，批号为 110831-200302）。

2 方法与结果

2.1 鞣质的含量测定

2.1.1 干酪素干扰试验 按 《中国药典》2005年版一部附录X B鞣质含量测定方法，测定了地榆中鞣质的含量，在测定中发现，试验所用的吸附剂干酪素，干扰测定结果，这与文献报道一致[5-6]。为此，对国药集团化学试剂有限公司的干酪素（化学纯，批号：H20060330、20080516）进行了空白干扰试验，方法：称取上述两批干酪素0.60 g，各5份，分别置100 ml锥形瓶中，精密加水25 ml，密塞，其余操作按《中国药典》2005年版一部附录X B鞣质含量测定方法，测定“不被吸附多酚”含量，以水为空白，测定干酪素的吸收值，测定结果见表1。

表1 干酪素的空白干扰试验结果

2.1.2 测定方法 取本品粉末（过四号筛）约0.4 g，精密称定，照鞣质含量测定法（《中国药典》2005年版一部附录 X B），以相应的试剂为空白，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》2005年版一部附录ⅤA）,在760 nm的波长处测定吸光度，在“不被吸附的多酚”测定中，同时作空白试验校正，计算即得。测定结果见表2。

表2 十批地榆、地榆片、地榆炭鞣质含量测定结果

2.2 没食子酸的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：依利特Hypersil C18（200 mm×4.6 mm，10 μm）；柱温：30℃；以甲醇-0.05% 磷酸溶液（1.5∶98.5）为流动相；流速：1.0 ml/min；检测波长：272 nm。理论板数按没食子酸峰计算应不低于2 000。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品适量，加水制成每1 ml约含30 μg的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品粉末（过四号筛）约0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，加10%盐酸溶液10 ml，置沸水浴中加热回流3 h，取出，放冷，滤过，滤液置100 ml量瓶中，用水适量洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.4 测定法 分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪，测定，即得。空白溶剂、对照品、供试品色谱图分别见图1。

2.2.5 线性关系考察 分别精密吸取浓度为0.036 2 mg/ml的没食子酸对照品溶液 1、3、5、7、9、15 μl，测定其峰面积，以对照品溶液浓度(C)为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为：A=2 576 229.30C+325.25，r＝1.000 0。 结果表明：没食子酸在0.036 2～0.543 μg浓度范围内线性关系良好。

2.2.6 精密度试验 分别精密吸取同一份供试品溶液（批号：20100120）10 μl， 重复进样 5 次， 测定其峰面积，RSD 为0.19%。结果表明：本方法精密度良好。

2.2.7 稳定性试验 分别精密吸取同一份供试品溶液（批号：20100120）10 μl，于 0、2、4、8、12 h 进样，测定其峰面积，RSD为0.38%，结果表明：供试品溶液在12 h内峰面积值基本稳定。

2.2.8 重复性试验 取同一批样品（批号：20100120），按含量测定项下方法，测定6次（n=2），RSD为0.70%，结果表明：本方法重复性良好。

2.2.9 回收率试验 精密称取已知含量为1.52%的样品约0.1 g，共5份，分别精密加入没食子酸对照品溶液（0.531 6 mg/ml）3.0 ml，即1.594 8 mg，按含量测定项下方法测定，计算回收率，结果见表3。结果表明：本方法加样回收率良好。

表3 回收率试验测定结果

2.2.10 耐用性试验 按拟定的方法，采用不同的液相色谱仪（LC-2010A；Agilent 1100），使用不同品牌的色谱柱(大连依利特公司Hypersil C18柱；菲罗门公司Phenomenex C18柱）对同一样品进行测定，结果RSD为0.9%。结果表明：本方法耐受性良好。

2.2.11 检测限考察 精密称取对照品10.96 mg，置100 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取1 ml，置250 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取1 ml，置25 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，按上述选定的色谱条件，取10 μl，注入液相色谱仪中，测定，其信噪比约为3∶1，故确定其检测限为0.175 ng。

2.2.12 定量限考察 精密称取对照品10.96 mg，置100 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取1 ml，置250 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取1 ml，置10 ml容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，按上述选定的色谱条件，取10 μl，注入液相色谱仪中，测定，其信噪比约为10∶1，故确定其定量限为0.44 ng。

2.2.13 地榆、地榆片、地榆炭中没食子酸含量测定 取本品粉末（过四号筛）约0.2 g，精密称定，置锥形瓶中，加10%盐酸溶液10 ml，置沸水浴中加热回流3 h，取出，放冷，滤过，滤液置100 ml量瓶中，用水适量洗涤容器和残渣，洗液滤入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。另精密称取没食子酸对照品适量，加水制成每1 ml约含30 μg的溶液，即得对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液与供试品溶液各10 μl，注入液相色谱仪测定，计算即得。十批地榆、地榆片、地榆炭的测定结果见表4。

表4 十批地榆没食子酸含量测定结果

3 讨论

3.1 干酪素干扰试验

干酪素的空白吸收值较大，相同生产厂家不同生产批号的产品其吸收值的差异较大，而《中国药典》2005年版一部附录X B鞣质含量测定方法中“不被吸附多酚”的测定中，未规定干酪素的空白试验，因此，对“不被吸附多酚”的含量测定结果影响较大，导致样品中鞣质含量测定结果偏低，不能准确反映鞣质的实际含量。建议对《中国药典》2005年版一部附录X B鞣质含量测定中的“不被吸附多酚”项下，明确规定干酪素的空白试验。

3.2 最大吸收波长选择

精密称取没食子酸对照品10.28 mg，置100 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密量取1 ml，置25 ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试溶液，以流动相为空白，按紫外分光光度法在220～400 nm波长范围内扫描（仪器：TU-1901，狭缝：1.0；中速扫描），结果在271.5 nm波长处有最大吸收，这与文献报道一致[5-6]。参照《中国药典》2005年版一部品种五倍子的没食子酸含量测定项下的检测波长，并结合本试验紫外扫描结果，选择测定波长为272 nm。

3.3 提取溶剂及提取方法的研究

为了纯化供试品溶液，保护色谱柱，减少杂质对测定结果的干扰，我们对样品的预处理进行了研究，分别对不同溶剂(甲醇、水、5%盐酸溶液、10%盐酸溶液、15%盐酸溶液)，不同提取方法（加热回流法、超声提取法）进行了比较试验，发现以水为提取溶剂，加热回流提取，供试品溶液黏稠，滤过速度慢，且测定的成分是游离的没食子酸，含量约为0.22%，故不宜采用此提取方法。以甲醇为提取溶剂，超声提取，因样品中大多数没食子酸是以可水解鞣质的形式存在，测定的是少量游离没食子酸的含量，结果为0.17%，故也不宜采用此提取方法。以10%盐酸溶液提取，再用乙醚萃取，因操作繁琐，所测成分损失较大，含量结果为1.56%，故也不宜采用此提取方法。以5%盐酸为提取溶剂，加热回流提取，其操作简便，HPLC色谱图中杂质峰相对较多，供试品溶液色泽较深，样品中的没食子酸含量测定结果偏低，含量结果为1.18%，故也不宜采用此提取方法。以10%盐酸为提取溶剂，加热回流提取，其操作简便，供试品溶液色泽清亮，HPLC色谱图中杂质峰少，无干扰，且样品中的没食子酸含量测定结果较高，含量结果为1.80%，因此，选择10%的盐酸为提取溶剂。以15%盐酸为提取溶剂，加热回流提取，其操作简便，HPLC色谱图中杂质峰少，无干扰，且样品中的没食子酸含量测定结果较高，含量结果为1.70%，经与10%盐酸提取液相比较，差别不大。以10%盐酸为提取溶剂，超声提取，其操作简便，HPLC色谱图中杂质峰少，无干扰，但样品中的没食子酸含量测定结果偏低，含量结果为0.14%。因超声提取未达到水解的效果，不宜采用。

3.4 提取时间的选择

取本品粉末（过4号筛）约0.2 g，共3份，精密称定，分别置锥形瓶中，加10%盐酸15 ml，置沸水浴中加热回流，提取时间分别为 2、3、5 h，取出，放冷，滤过，滤液置 100 ml量瓶中，用水分数次洗涤容器，洗涤液滤入同一量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。按上述选定的色谱条件测定，结果表明样品经加热回流提取3 h后，没食子酸含量几乎不再增加，表明没食子酸已基本提取完全，因此，确定最佳提取时间为3 h。

总之，在地榆、地榆片、地榆炭的质量标准研究中分别采用UV法测定鞣质的含量和HPLC法测定没食子酸的含量，两种测定方法均灵敏、准确，重现性好，可作为地榆、地榆片、地榆炭的质量控制方法。

[1]国家药典委员会.中国药典 [M].一部.北京：化学工业出版社出版,2005：83.

[2]袁振海,孙立立.地榆现代研究进展[J].中国中医药信息杂志,2007,14(3)：91-92.

[3]曹爱民,张东方.地榆中皂苷类化合物分离、鉴定及其含量测定[J].中草药,2003,34(5)：397-399.

[4]谢道刚,宋光志,刘静.鞣质含量测定法（中国药典2005年版一部附录XB）方法学验证[J].世界科学技术—中医药现代化,2006 8(6)：50-53.

[5]孙立立,江波,袁振海,等.HPLC测定地榆饮片中没食子酸的含量[J].中成药,2006,28(8)：1144-1146.

[6]张秀杰,潘明宽.地榆中游离及水解没食子酸含量测定[J].山东医药工业,2002,21(5)：15-17.