肾透明细胞癌中MMP-10的表达及临床意义

韩保健，赵海军，张元霞

青岛市第八人民医院泌尿外科，山东青岛 266100

肾细胞癌（RCC）是一种肾脏最常见的恶性肿瘤，以高发局部侵袭和远端转移为特点[1]。对于晚期和转移的RCC，几乎没有有效的或治愈性的疗法。因此，对RCC进展机制的研究对于制订其治疗方案是非常重要的。虽然不同的因素与恶性侵袭性有关，但细胞外基质（ECM）的降解是许多癌的关键和早期的步骤之一。基质金属蛋白酶（MMPs）会分解ECM成分，在癌细胞侵入和转移中具有重要作用[2-3]。

在不同的MMPs中，MMP-2和MMP-9是最多被研究和最重要的因子，它们影响不同癌的恶性程度和生存率[4]。在RCC，有研究者发现MMP-2和MMP-9的过度表达与高侵袭性和预后不良有关[5-6]。除了这两种，MMP-1、-3、-7、-11、-12 和-14也在RCC中过度表达[7-8]。MMP-10也称作基质降解酶-2，降解ECM的多种成分或间质结缔组织和胶原Ⅲ和Ⅳ[9]。有研究者报道在不同的癌MMP-10的过度表达并影响它们的恶性侵袭性[10-11]。然而，目前还没有人RCC组织MMP-10表达的报道。肾透明细胞癌（CCRCC）是肾细胞癌的主要类型（60%～85%），因此，我们将对CCRCC患者进行单变量和多变量分析，来阐明MMP-10表达的临床病理的意义和它在肿瘤进展中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1995年 1月～2010年 12月，对我院收治的 112例CCRCC患者进行回顾性分析研究，排除手术前已经进行治疗的患者。pT分期和分级通过组织病理学验证。分期和分级基于2002肿瘤-淋巴结-转移（TNM）分级，核分级基于Fuhrman等[12]标准。统计分析中，肿瘤基于T期分为2组：低期（T1和T2）和高期（T3和 T4），此外，核分级分为 2 组 1～2级为低级，3～4级为高级。复发或远处转移通过临床和X射线照相来评定。单独一个病理学医生完成所有病理组织学检查。

1.2 免疫组织化学分析

标本石蜡包埋，5 μm切片，脱蜡入水，抗原热修复，采用SABC 法染色。 一抗：MMP-10（兔多克隆抗体 1∶500；RnD)，4℃孵育过夜，依次用生物素化二抗，辣根过氧化物-卵白素-生物素复合物孵育，DAB显色，用磷酸盐缓冲液替代一抗作为阴性对照。判断标准：所有免疫组化染色分析基于肿瘤区域光镜结果，半定量MMP-10免疫染色评定，染色强度分为（-、+、++、+++、++++），癌细胞免疫染色（+++）、（++++）为阳性染色细胞，癌细胞超过50%为阳性，则认为MMP-10表达阳性。每张切片取血管密度最高的5个视野进行测定，所有半定量分析由2位不知临床特点和生存率数据的研究者在不同时间评估2次。

1.3 统计学方法

采用SPSS 13.0统计软件分析，χ2检验用于评价MMP-10表达与临床病理学参数间的关系。单变量分析用Kaplan-Meier方法，统计学显著性用log-rank检验。多变量分析采用Cox比例风险模型，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

MMP-10主要表达在细胞浆（图1、2），在分析112例免疫染色的CCRCC标本后发现：53例（47.3%）阳性，59例（52.7%）阴性，统计学分析显示，MMP-10表达与pT分期（P=0.004 1）和核分级（P＜0.001）相关，笔者未发现MMP-10的表达与转移（P=0.215 9）有关（表1）。多变量分析显示MMP-10表达在高pT分期是一个重要和独立的因素。多变量分析应用Cox比例风险模型（包括分期、核分级、年龄和MMP-10表达）显示MMP-10表达在CCRCC患者高pT期是一个重要和独立的因素（表2）。

3 讨论

在本研究中，笔者用免疫组织化学的方法检测了MMP-10在CCRCC中的表达，发现MMP-10阳性与pT分期、核分级相关，与转移无关。许多有关MMP-10表达在不同的恶性肿瘤如食管癌[10]、肺癌[13]和前列腺癌[11]的研究显示与恶性程度和肿瘤的进展有关。虽然表达在人肺癌细胞MMP-10蛋白显著高于正常肺组织，但其与肿瘤的进展包括肿瘤分期和转移无关[14]。此外，Kerkela等[15]报道在皮肤癌MMP-10表达与恶性侵占性包括侵袭和转移无关。因此，在实验中，笔者采用多变量分析研究了MMP-10在RCC高pT期的独立的作用。分析显示MMP-10表达在肿瘤侵袭中，是一个重要和独立的因素。另外，我们也推测MMP-10在人CCRCC细胞侵袭中起重要作用。

本研究显示MMP-10的表达与转移无关，在多变量分析中不能作为一个独立的因素。转移的过程非常复杂，除了与癌细胞侵袭性有关外，多种因素参与其中[16]。由于本研究的样本量相对较少，其确切机制需进一步探究。以MMPs为靶点的抗癌药物的研制已经开始，也得到了一些临床实验数据。然而，关于它们抗癌作用的结果、生存率的延长、副作用等还不尽如人意[17]。这种结果令人失望的一个原因是药物对分期和/或癌症类型的广谱性。近年来，在恶性肿瘤的防治上，许多研究者把焦点投向副作用少的特异性的MMP抑制剂[18-19]。基于本研究结果，笔者认为MMP-10抑制剂可能会在CCRCC方面有潜在的作用。

表1 MMP-10表达和临床病理特征之间的相互关系（例）

表2 CCRCC患者原因特异性Cox比例风险分析结果（n=112）

总之，笔者研究了CCRCC的MMP-10的表达，通过单变量和多量的分析，发现MMP-10表达与pT分期和核分级密切相关。尽管MMP-10在CCRCC中的生物学作用有待于进一步揭示，笔者的结果提供了有关MMP-10在CCRCC中的新的资料。

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