HPLC法测定复方益肾胶囊中淫羊藿苷的含量

肖佳尚

广州市黄埔区食品药品检验所，广东广州 510700

复方益肾胶囊由淫羊藿、五味子、地骨皮、熟地黄、黄芪等多味中药为原料制成的中药复方制剂。具有补虚损，益房劳，防早衰作用。用于房劳、阳痿、性欲低下、早泄。淫羊藿是复方益肾胶囊的君药，其药用有效成分主要是淫羊藿苷（I-cariin）。本品为复方中药制剂，为了有效地控制和提高本制剂的质量，质量标准中以其主要成分淫羊藿苷作为含测指标，采用高效液相色谱法进行测定[1-6]。本文建立的高效液相色谱法分离测定了复方益肾胶囊中淫羊藿苷成分的含量，获得很好效果，为中药复方益肾胶囊的质量标准研究提供了依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪：Waters 2695 separation module，Waters 2424 ELS detector；Waters Empower 2色谱工作站（美国沃特斯仪器有限公司）；XS205（十万分之一）天平（瑞士梅特勒-托利多衡具有限公司）；Millipore超纯水系统（美国密理博仪器有限公司）。

1.2 试药

淫羊藿苷（中检所提供，含测用，批号：0737-200111）；乙腈（色谱纯，Tedia Company，USA）；复方益肾胶囊规格：0.4 g/粒。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择

Diamonsil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）色谱柱（迪马公司产），乙腈-0.1%磷酸（25∶75）为流动相，柱温 35℃，流速0.9 ml/min，检测波长为270 nm。在此色谱条件下，淫羊藿苷与样品中其他组分分离良好，理论板数按淫羊藿苷峰计＞3 000。 见图 1、2。

2.2 供试品溶液的制备

取本品装量差异项下内容物0.5 g，精密称定，置于100 ml具塞锥形瓶中，精密加甲醇40 ml，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

2.3 对照品溶液的制备及线性关系考察

精密称取淫羊藿苷对照品9.99 mg，置于25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度[7]，摇匀，精密吸取1 ml，置于10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；分别精密吸取上述对照品溶液各 5、10、15、20、30 μl，分别注入液相色谱仪，照上述色谱条件测定淫羊藿苷峰面积，以对照品进样量 X（g）为横座标、峰面积值 Y（mV·s）为纵座标，绘制标准曲线，得回归方程为：Y=1 923 806X-24 140（r=0.999 6）；线性范围为 0.203 6～1.221 6 μg。

2.4 精密度试验

精密吸取上述对照品溶液10 μl,重复进样5次,测定淫羊藿苷峰面积值，求得淫羊藿苷峰面积值平均值为745 950，RSD为0.7%，结果表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

精密称取本品0.5 g，照上述供试品溶液制备方法制备供试品溶液，精密吸取10 μl，照上述条件，每隔一定时间进样，测定淫羊藿苷峰面积值，求得淫羊藿苷峰面积值平均值为1 253 261，RSD为2.5%，测定结果表明样品在24 h内基本稳定。

2.6 重复性试验

精密称取本品5份，每份0.5 g，照上述供试品溶液制备方法制备，精密吸取供试品溶液10 μl，进样，测定，计算含量，求得淫羊藿苷含量平均值为2.06 mg/粒，RSD为2.2%。结果表明本法测定的重复性较好，见表1。

表1 重复性试验

2.7 准确度试验

采用加样回收法，取已知含量样品（淫羊藿苷含量为：2.06 mg/粒）6份，精密称取各0.25 g，分别精密加入淫羊藿苷对照品，照供试品溶液制备方法制备，按正文色谱条件进样，测定，计算，求得淫羊藿苷平均回收率为98.7%，RSD为1.9%。结果说明本法回收良好，见表2。

表2 回收率试验结果

2.8 阴性对照溶液的制备及试验

取缺淫羊藿的群药按处方比例，混合均匀并研细，精密称取1.0 g精密称定，置于200 ml具塞锥形瓶中，精密加甲醇80 ml，称定重量，超声处理20 min，放冷，再称重，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，作为不含淫羊藿的阴性对照溶液。照样品测定项下的方法测定，结果表明在淫羊藿苷对照品吸收峰位置处无干扰。见图3。

2.9 样品的测定

照上述方法，对本制剂三批样品进行淫羊藿苷的含量测定。见表3。

表3 含量测定结果

3 讨论

3.1 供试品溶液的制备

由于淫羊藿苷类成分在甲醇中的溶解度比较大，所以笔者在提取时选用甲醇为溶剂进行超声提取，经回收试验证明此方法可行。

3.2 检测波长的选择

对样品与对照品的淫羊藿苷的进行UV扫描和HPLC检测[8]，淫羊藿苷在270 nm处有最大吸收，在该波长处测定，各组分分离良好，其他杂质的干扰很少，几乎无干扰，满足含量测定要求。

3.3 流动相的选择

HPLC测定选择了乙腈-0.2%磷酸（20∶80），乙腈-0.2%磷酸（25∶75），乙腈-0.1%磷酸（40∶60）,乙腈-0.1%磷酸（25∶75）等几种流动相体系，通过比较分离情况，确定了乙腈-0.1%磷酸（25∶75）为最佳流动相，再加上制剂成分复杂，为获得满意分析时间的要求，故采用酸性洗脱剂，使各成分得到了良好的分离效果，符合含量测定要求。

本研究建立的HPLC法，可以测定复方益肾胶囊中主要成分淫羊藿苷的含量。本研究采用的HPLC法，具有操作方法简单便捷，分析条件容易准确控制，使待测成分易于分离等优点，此方法精密度高，分离度良好，重现性和回收率好，为复方益肾胶囊的质量标准的提高提供了科学依据。

[1]黄璐敏.HPLC法测定补肾强身胶囊中淫羊藿苷的含量[J].中国药事,2005,19(7)：429.

[2]李社花,何继祥,李应芬,等.益肾健骨片中淫羊藿苷的含量测定[J].中成药,2005,27(8)：附 2.

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[7]张林松.HPLC法测定复方益肾颗粒中淫羊藿苷的含量[J].中草药,2005,36(2)：221.

[8]国家食品药品监督管理局.中华人民共和国药典(2010年版)一部[S].2010：附录 30-31,36-38.