HPLC-ELSD法测定复方芪丹胶囊中黄芪甲苷的含量

何艳清 李赐恩 张俊红

HPLC-ELSD法测定复方芪丹胶囊中黄芪甲苷的含量

何艳清 李赐恩 张俊红

目的建立复方芪丹胶囊中黄芪甲苷的含量测定方法。方法以乙腈∶水(30∶70)为流动相，Agilent Hypersil ODSC18柱 (4.0 mm 125 mm，5μm)为固定相，流速为1.0 ml/min;漂移管温度:45℃，氮气流速:1.5L/min。结果黄芪甲苷在1.832～18.32μg范围内呈良好的线性关系，平均回收率为96.45%，RSD为1.16%。结论该方法准确、重现性好、灵敏度高，可用于复方芪丹胶囊中黄芪甲苷的含量测定。

黄芪甲苷;高效液相色谱法;含量测定

复方芪丹胶囊主要由黄芪、丹参等多味药物组成，具有益气养阴，活血祛瘀的作用。制剂中成分较复杂，黄芪为方中君药，本文采用高效液相色谱法对该制剂中黄芪的有效成分黄芪甲苷进行含量测定，探讨该方的质量控制方法。

1 仪器与试药

Agilent1200高效液相色谱仪(美国);Alltech 3300蒸发光散射检测器(美国Grace);Mettler-Toledo XS205 dU电子分析天平(瑞士);Agilent Hypersil ODSC18(4.0 125 mm，5μm)色谱柱。乙腈为色谱纯试剂(Merck)，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。黄芪甲苷对照品购于中国食品药品检定研究院，批号:110781-200613，复方芪丹胶囊及其空白制剂为本单位自制，批号:100701，100702，100703。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent Hypersil ODSC18柱(4.0 mm×125 mm，5 μm);流动相:乙腈-水(30∶70);流速:1.0 ml/min;柱温:35℃;漂移管温度:45℃;氮气流速:1.5 L/min。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24 h的黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每1 ml含黄芪甲苷分别为 0.1832，0.3664，0.5496，0.9160，1.2824，1.8320 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 胶囊内容物研细，取约5 g，精密称定，置索氏提取器中，加甲醇40 ml，冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4 h，提取液回收溶剂并浓缩至干，残渣加水10 ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 ml，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 ml使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5 cm.柱高为12 cm)，以水50 m l洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 ml洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至 5 m l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得［1，2］。

2.4 线性范围的考察 分别精密吸取不同浓度黄芪甲苷对照品溶液(每1 ml中含黄芪甲苷分别为0.1832，0.3664，0.5496，0.9160，1.2824，1.8320 mg)10 μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积(Y)的自然对数为纵坐标，以黄芪甲苷含量(X)的自然对数为横坐标进行线性回归，得标准曲线lnY=1.57437nX+4.8125，r=0.99992。表明黄芪甲苷在1.832～18.32μg范围内呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 精密吸取对照品溶液(0.9160 mg/ml)10 μL分别进样6次，测得峰面积积分值RSD为0.47%(n=6)，表明方法的精密度良好。

2.6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号:100701)10 μL 分别于0，1，2，4，6，8 h 进样，测定峰面积，结果 RSD 为1.19%(n=6)，表明供试品在8 h内稳定。

2.7 重复性试验 取同一供试品(批号:100701)6份，分别精密称定，按上述供试品溶液制备方法和色谱条件测定，计算含量，RSD为1.26%，表明方法的重复性良好。

2.8 加样回收率试验 精密称取已知含量的样品，分别精密加入一定量的黄芪甲苷对照品，按供试品溶液制备方法和色谱条件测定，测得平均回收率为96.45%，RSD为1.16%(n=6)。结果见表1。

2.9 空白干扰试验 取空白制剂按供试品溶液制备方法制备阴性对照溶液。分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL进样，记录色谱图。从图中可见，黄芪甲苷色谱峰峰形对称，供试品色谱图中黄芪甲苷峰能与其他成分很好地分离，阴性对照溶液在黄芪甲苷峰处基本无干扰。结果见图1。

表1 黄芪甲苷回收率测定结果

图1 黄芪甲苷色谱图

2.10 供试品含量测定 分别对3批供试品按上述含量测定方法进行测定，分别精密吸取对照品溶液10μl、20μl供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对数方程计算，即得。结果其黄芪甲苷含量分别为 1.24，1.20，1.19 mg/g。

3 小结

3.1 本研究以黄芪甲苷含量为指标，对供试品溶液的制备方法进行了对比研究。比较直接提取和浸泡过夜提取，结果浸泡过夜可使提取率提高2～3倍;采用水饱和的正丁醇萃取和氨试液洗涤的方法可以减少杂质干扰［3，4］，但过D101型大孔吸附树脂柱后杂质明显减少，提高了黄芪甲苷的检出准确率。

3.2 本制剂成分较为复杂，黄芪为方中君药。有文献报道［5］黄芪中的主要化学成分为黄芪甲苷。因此，本文采用高效液相色谱法对制剂中黄芪甲苷的含量进行测定，结果表明方法简单、重现性好、灵敏度高、结果准确，可用于复方芪丹胶囊的质量控制。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部).中国医药科技出版社，2010:283．

［2］李文韬，史国兵，何静，等.HPLC-ELSD法测定参芪五味咀嚼片黄芪甲苷的含量.山西医药杂志，2010，39(10):902-903．

［3］宋平顺，卫玉玲，赵建邦，等.HPLC-ELSD测定黄参胶囊中黄芪甲苷的含量.中成药，2008，30(4):49．

［4］武捷，火红晔.RP-HPLC法测定消栓口服液中黄芪甲苷的含量.黑龙江医药，2007，20(5):431．

［5］余灏，杨胜华.黄芪皂甙分析方法研究近况.华西药学杂志，1993，8(3):163．

Determ ination of the content of astragalosideⅣin Fufangqidan Capsules by HPLC-ELSD

ObjectiveTo determine the content of AstragalosideⅣ in Fufangqidan capsules by HPLC-ELSD.MethodsAgilent Hypersil ODSC18column was used with acetonitrile-water(30:70)solution as themobile phase，the flow rate was1.0 ml/min;drift tube temperaturewas45℃，nitrogen flow rate was1.5L/min.ResultsThe calibration curves were linear within1.832～18.32μg for AstragalosideⅣ.The average recovery was 96.45%with RSD 1.16%respectively.ConclusionThe experimental result shows that the method was simple，sensitive and reliable，and could be used as the quality determination of Astragaloside Ⅳ．

AstragalosideⅣ;HPLC;Quality determination

510405广州中医药大学第一附属医院