柴辛鼻敏康颗粒的质量标准研究

王晓飞，葛海生，于玲，柴江平

（1.中国人民武装警察部队药品仪器检验所，北京市 102613；2.中国中医科学院广安门医院，北京市 100053）

柴辛鼻敏康颗粒的质量标准研究

王晓飞1＊，葛海生1，于玲1，柴江平2

（1.中国人民武装警察部队药品仪器检验所，北京市 102613；2.中国中医科学院广安门医院，北京市 100053）

目的：建立柴辛鼻敏康颗粒的质量标准。方法：采用薄层色谱（TLC）法对方中柴胡、细辛进行定性鉴别；采用高效液相色谱法对芍药苷进行含量测定。结果：TLC斑点清晰、易于识别、重复性好；芍药苷进样量在0.512～15.360μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝0.9998），平均回收率为99.87%，RSD＝0.97%（n＝6）。结论：该质量控制方法简单、准确度高、专属性强，可有效控制柴辛鼻敏康颗粒的质量。

柴辛鼻敏康颗粒；质量标准；薄层色谱法；高效液相色谱法；芍药苷

柴辛鼻敏颗粒是由细辛、枳壳、川芎、赤芍等多味中药加工而成的中药颗粒制剂，临床用于治疗过敏性鼻炎，疗效显著。为保证和控制该制剂的质量，本试验建立了方中柴胡、细辛的薄层色谱（TLC）定性鉴别方法，采用高效液相色谱（HPLC）法测定制剂中芍药苷的含量，方法简单、准确度高、专属性强、重复性好，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

HP1050HPLC仪及其色谱工作站（美国惠普公司）；TLC半自动点样仪（瑞士Camag公司）。

柴胡皂苷a、芍药苷对照品和柴胡、细辛对照药材（中国药品生物制品检定所，批号分别为110777-200507、110736-200703、120992-200504、121204-200803）；硅胶G薄层板（青岛海洋化工厂，批号：20100108）；柴辛鼻敏康颗粒（批号：20100513、20100711、20100609）及其相应阴性样品均由中国人民武装警察部队药品仪器检验所自制；乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯；。

2 定性鉴别[1]

2.1 柴胡的TLC鉴别

取本品约5g，加乙醇30mL，超声处理20min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20mL使溶解，用水饱和正丁醇振摇提取2次，每次20mL，合并提取液，用氨试液洗涤2次，每次20mL，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取柴胡对照药材1.5g，加水30mL，加热回流1h，放冷，滤过，自“用水饱和正丁醇”起，照上述方法制成对照药材溶液；另取柴胡皂苷a对照品适量，加甲醇制成浓度为1mg·mL-1的柴胡皂苷a对照品溶液；取不含柴胡药材的阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液。吸取上述4种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水（65∶35∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液，105℃加热数分钟，置紫外光灯（365nm）下检视。结果，供试品色谱中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；阴性对照无干扰。柴胡的TLC见图1。

2.2 细辛的TLC鉴别

取本品10g，加甲醇50mL，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1mL使溶解，作为供试品溶液；另取细辛对照药材0.5g，加甲醇10mL，同法制成对照药材溶液；取不含细辛药材的阴性样品，同法制成阴性对照溶液。吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（3∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点显色清晰。结果，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点；阴性对照无干扰。细辛的TLC见图2。

图1 柴胡的TLC1.阴性对照；2.柴胡皂苷a对照品；3.柴胡对照药材；4~6.供试品Fig1 TLC of Bupleuri Radix1.negative control；2.saikosaponin A control；3.Bupleuri Radix reference substance；4-6.samples

图2 细辛的TLC1.阴性对照；2.细辛对照药材；3～5.供试品Fig2 TLC of Asari Radix Et Rhizoma1.negative control；2.Radix Et Rhizoma Asarireference substance；3-5.test samples

3 芍药苷含量测定

3.1 色谱条件

色谱柱：SHISEIDO ODS C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80）；检测波长：230nm；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃。

3.2 溶液的制备

3.2.1 对照品溶液 精密称取60℃减压干燥5h的芍药苷对照品约12.5mg，置于25mL棕色量瓶中，加甲醇适量，超声使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，得浓度约为0.5mg·mL-1的对照品溶液。

3.2.2 供试品溶液 精密称取本品约2g，置于50mL锥形瓶中，精密加甲醇25mL，称重，80℃加热回流1h，放冷，称重，用甲醇补足失重，滤过，续滤液再用滤膜（0.45μm）滤过，即得。

3.2.3 阴性对照溶液 取不含赤芍的阴性样品，按“3.2.2”项下方法操作，即得。

3.3 专属性考察

精密吸取阴性对照溶液、对照品溶液、供试品溶液各10μL，注入HPLC仪，按“3.1”项下色谱条件测定，记录色谱图。结果，供试品在与芍药苷对照品色谱相同保留时间处有相同的色谱峰，保留时间分别为16.26、16.38min；阴性对照溶液在相应位置处无干扰峰，方法专属性良好。色谱见图3。

3.4 线性关系考察

精密量取对照品溶液（0.512mg·mL-1）1、5、10、15、20、25、30μL，注入HPLC仪，按“3.1”项下色谱条件测定，记录芍药苷峰面积。以峰面积积分值（Y）为纵坐标，芍药苷的进样量（X，μg）为横坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝1132.5X+611.21（r＝0.9998）。结果表明，芍药苷进样量在0.512～15.360μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

3.5 精密度试验

精密量取对照品溶液（0.512mg·mL-1）适量，按“3.1”项下色谱条件连续进样6次，进样量为10μL，记录芍药苷峰面积。结果，RSD＝0.61%（n＝6），表明仪器精密度良好。

3.6 重复性试验

精密称取同一批（批号：20100711）样品适量，共6份，分别按“3.2.2”项下方法制成供试品溶液，精密量取10μL，注入HPLC仪，照“3.1”项下色谱条件测定，按芍药苷含量计算。结果，RSD＝1.17%（n＝6），表明方法重复性良好。

3.7 稳定性试验

精密称取同一批（批号：20100711）样品适量，按“3.2.2”项下方法制成供试品溶液，于室温放置0、2、4、6、8、10、12h 后分别进样10μL，照“3.1”项下色谱条件测定，以芍药苷峰面积积分值计算。结果，RSD＝0.57%（n＝7），表明供试品溶液在12h内稳定。

3.8 加样回收率试验

精密称取已知含量的样品（批号：20100711，含量：9.66mg·g-1）约1g，共6份，精密称定，分别置于50mL锥形瓶中，精密加入芍药苷对照品溶液（6.22mg·mL-1）各1mL，再精密加入甲醇25mL，按“3.2.2”项下方法制成供试品溶液。分别吸取该供试品溶液10μL，注入HPLC仪，测定芍药苷含量，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab1 Results of recovery tests（n＝6）

3.9 样品含量测定

取3批样品，分别按“3.2.2”项下方法制备供试品溶液，照“3.1”项下色谱条件测定，以外标法计算芍药苷的含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（n＝3）Tab2 Contents determination results of samples（n＝3）

4 讨论

本试验对方中主要成分细辛、柴胡采用TLC法进行定性鉴别，色谱斑点明显、丰富，分离效果较好，专属性强，可用于该制剂的定性鉴别。

试验中，取相同批号的样品，分别用甲醇、乙醇、70%甲醇、70%乙醇为溶剂考察了加热回流1h、超声处理1h等提取方法。结果，由于样品含糖量较高，用70%甲醇、70%乙醇为提取溶剂时，样品难以过滤，故不作选择。以测得芍药苷的含量为指标比较，采用以甲醇加热回流1h的方法，提取充分，效果最佳。

在色谱条件的选择中，对不同流动相[2～5]和2005年版《中国药典》收载的“赤芍”[1]项下芍药苷含量测定流动相，以及不同的柱温条件进行了筛选，结果以流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液（20∶80）、柱温为30℃时，芍药苷与杂质峰的分离效果较理想，理论板数以芍药苷峰计算不低于3000，且方法简单、易操作，可有效控制柴辛鼻敏康颗粒的质量。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：附录31、109.

[2] 岳 敏，毛彦杰，谷学新.高效液相色谱法测定千金止带丸中芍药苷的含量[J].分析科学学报，2005，21（2）：167.

[3] 毛晓敏，张小波，陈小清，等.HPLC同时测定十二乌鸡白凤丸中芍药苷、阿魏酸和丹皮酚含量[J].中成药，2008，30（5）：678.

[4] 李福如，缪 婧，顾海琳，等.清脑宁颗粒质量标准研究[J].中国药业，2010，19（9）：27.

[5] 朱 伟，王学美.黄芪剂量对补阳还五汤中芍药苷、阿魏酸含量的影响.[J].中国实验方剂学杂志，2006，12（3）：11.

Quality Standard of Chaixin Biminkang Granules

WANG Xiao-fei，GE Hai-sheng，YU Ling
（Institute for Drug Control，Chinese People’s Armed Police Forces，Beijing 102613，China）
CHAI Jiang-ping
（Guang’anmen Hospital，China Academy of Chinese Medical Sciences，Beijing 100053，China）

OBJECTIVE：To establish the quality standards of Chaixin biminkang granules.METHODS：TLC was adopted to identify Bupleuri Radix and Radix Et Rhizoma.HPLC method was used to test the content of paeoniflorin.RESULTS：TLC spots were clear，distinguished and reproducible.The linear range of paeoniflorin was 0.512～15.360μg（r＝0.9998）with an average recovery of 99.87%（RSD＝0.97%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，precise and specific and has good effect on quality control of Chaixin biminkang granules.

Chaixin biminkang granule；Quality standard；TLC；HPLC；Paeoniflorin

R284.2；R283.627

A

1001-0408（2011）19-1800-03

＊主管药师，硕士。研究方向：药物分析。电话：010-61226666-78412。E-mail：wangxiaofei1317@163.com

book=1802,ebook=435

2010-09-03

2010-11-12）