HPLC法测定橘红枇杷颗粒中柚皮苷的含量

蔡晔芬

（广州医学院附属肿瘤医院药剂科，广州市 510095）

HPLC法测定橘红枇杷颗粒中柚皮苷的含量

蔡晔芬＊

（广州医学院附属肿瘤医院药剂科，广州市 510095）

目的：建立测定橘红枇杷颗粒中柚皮苷含量的方法。方法：采用高效液相色谱法。色谱柱为Nucltosil C18（250mm×4.6mm，10µm），流动相为甲醇-冰醋酸-水（35∶4∶60），检测波长为283nm，流速为1.0mL·min-1。结果：柚皮苷进样量在0.6～1.4μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝0.9998）；平均回收率为97.36%，RSD＝1.37%（n＝6）。结论：本方法简便、准确度高、重复性好，可用于测定橘红枇杷颗粒中柚皮苷的含量。

橘红枇杷颗粒；柚皮苷；高效液相色谱法；含量测定

橘红枇杷颗粒是我院自主研制的止咳中药复方制剂，处方由化橘红、陈皮、枇杷叶、桔梗、紫苏子、甘草共6味药材组成。其中，化橘红功能散寒、燥湿、利气、消痰，用于治疗风寒咳嗽、喉痒痰多[1]，为方中君药。本试验结合文献报道[2～4]，采用高效液相色谱（HPLC）法测定方中化橘红主要成分柚皮苷的含量，以为橘红枇杷颗粒的质量控制提供试验依据。

1 仪器与试药

HPLC仪，包括510型高压泵、486型检测器、进样阀、810型液相色谱工作站（美国Waters公司）。

柚皮苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110722-200309）；甲醇为色谱纯，其他试剂均为分析纯；橘红枇杷颗粒（笔者自制，批号：20090601、20090617、20091201、20100416、20100423）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Nucltosil C18（250mm×4.6mm，10µm）；流动相：甲醇-冰醋酸-水（35∶4∶60）；检测波长：283nm；柱温：28℃；流速：1.0mL·min-1。理论板数以柚皮苷峰计算应＞2500，分离度＞3.5，拖尾因子为1.05。在此色谱条件下，柚皮苷与其他组分均能达到较好的分离。色谱见图1。

2.2 检测波长的确定

取对照品溶液，测定其紫外-可见吸收光谱。结果表明，对照品溶液在283nm波长处有最大吸收，故选择283nm为检测波长。

2.3 对照品溶液的制备

精密称取柚皮苷对照品10.05mg，置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每1mL含柚皮苷0.1mg）。

2.4 供试品溶液的制备

取本品10g，研碎，精密称取0.60g，加入甲醇30mL，加热回流2h，放冷，滤过，取滤液，置50mL量瓶中，用少量的甲醇分次洗涤容器和残渣，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液作为供试品溶液，即得。

2.5 线性关系考察

分别精密量取对照品溶液6、8、10、12、14μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定峰面积。以峰面积分值（X）为横坐标，对照品进样量（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得回归方程为Y＝1.5369×105X+0.0071（r＝0.9998）。结果表明，柚皮苷进样量在0.6～1.4μg范围内与峰面积积分值呈良好的线性关系。

2.6 精密度试验

精密吸取对照品溶液10μL，按“2.1”项下色谱条件进样测定，连续6次。结果，RSD＝0.38%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验

取同一批样品颗粒适量，共6份，分别按“2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定。结果，RSD＝2.23%（n＝6），表明方法重复性良好。

2.8 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于制备后0、1、2、4、8h进样测定。结果，RSD＝1.61%（n＝5），表明供试品溶液在8h内稳定性良好。

2.9 加样回收率试验

准确称定已知柚皮苷含量的样品颗粒（批号：20090601）适量，共6份，精密加入柚皮苷对照品溶液，按“2.4”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算加样回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab1 Results of recovery tests（n＝6）

2.10 样品含量测定

取5批样品，分别按“2.4”项下方法制成供试品溶液。精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL进样，以外标一点法测定样品中柚皮苷的含量。结果，柚皮苷的平均含量为0.3378mg·g-1。

3 讨论

橘红枇杷颗粒是中药复方制剂，化学成分复杂，其他成分易对柚皮苷的含量测定带来干扰。笔者综合考虑了文献以及2005年版《中国药典》的方法，最后确定流动相为甲醇-冰醋酸-水（35∶4∶60），在柱温28℃、流速1.0mL·min-1条件下，柚皮苷与其他成分峰可达基线分离，且峰形对称。

本方法操作简单、精密度高、重复性好，可作为橘红枇杷颗粒中柚皮苷的含量测定方法，并可为其质量控制提供参考。

由于本品含有6味中药，除柚皮苷外，其他成分也可能起到重要的药效作用，故下一步将建立橘红枇杷颗粒的指纹图谱，以更好地控制成品质量。

[1] 韦 敏，杨中林，吴建民.大孔吸附树脂法分离纯化化橘红中柚皮苷的研究[J].中成药，2007，29（3）：352.

[2] 李玉仿，林月英.高效液相色谱法测定骨仙片中柚皮苷含量[J].中草药，2007，38（7）：1019.

[3] 赵 清，解世权，贾天柱.高效液相色谱法测定伤痛舒片中柚皮苷的含量[J].辽宁中医学院学报，2006，8（2）：108.

[4] 周 骏，刘美辉，金顺福，等.高效液相色谱法测定枳术颗粒中柚皮苷的含量[J].中国药房，2006，17（14）：1103.

Content Determination of Naringin in Juhong Pipa Granules by HPLC

CAI Ye-fen
（Dept.of Pharmacy，Cancer Hospital of Guangzhou Medical College，Guangzhou 510095，China）

OBJECTIVE：To establish a method for the content determination of naringin in Juhong pipa granules.METHODS：HPLC method was adopted.The determination was performed on Nucltosil C18（250mm×4.6mm，10µm）column with mobile phase consisted of methanol-acetic acid-water（35∶4∶60）at the flow rate of 1.0mL·min-1.The detection wavelength was set at 283nm.RESULTS：It showed a good linear relation between naringin content and peak area at a range of 0.6～1.4μg（r＝0.9998）with an average recovery of 97.36%（RSD＝1.37%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，accurate and reproducible for the content determination of naringin in Juhong pipa granules.

Juhong pipa granules；Naringin；HPLC；Content determination

R283.627；R927.2

A

1001-0408（2011）19-1798-02

＊主管药师。研究方向：医院药学。E-mail：cai-yf@163.com

2010-10-13

2011-03-29）