正交试验优选延胡索微波炮制工艺

容穗华，高妮

（1.广东省中医院药学部，广州市 510120；2.广州市医药职业学校，广州市 510430）

正交试验优选延胡索微波炮制工艺

容穗华1＊，高妮2

（1.广东省中医院药学部，广州市 510120；2.广州市医药职业学校，广州市 510430）

目的：优选醋制延胡索的微波炮制工艺。方法：以原阿片碱、延胡索乙素和总生物碱的含量为评价指标，以醋用量、闷润时间、微波热力、炮制时间为考察因素，采用正交试验优选最佳的炮制工艺。结果：最佳炮制工艺为醋的用量30kg，闷润2h，微波热力60%，炮制时间5min。结论：该方法简单、可行，易于控制，可作为延胡索的新型炮制方法。

延胡索；醋制；微波炮制；原阿片碱；延胡索乙素；总生物碱；正交设计

延胡索为罂粟科植物延胡索Corydalis yanhusuoW.T.Wang的干燥块茎，味辛、苦，性温，归心、肝、脾经，具有活血化瘀、行气止痛功效[1]。临床常用生延胡索、醋制延胡索、酒延胡索，生品具活血、行气、止痛功效；醋制后增强行气止痛作用；酒制后偏于活血化瘀[2]。2010年版《中国药典》收载延胡索炮制方法为净制法、醋炙法和醋煮法[1，3]。延胡索含有生物碱类成分，其中延胡索乙素和原阿片碱等成分具有明显镇痛作用。文献报道表明，延胡索经醋制后有效成分的水提液溶出率增加，疗效增强[4，5]。笔者首次采用微波炮制法来优化醋制延胡索的炮制工艺，试验以延胡索乙素和原阿片碱以及总生物碱的含量为评价指标，采用正交设计法优选微波炮制的最佳工艺，并且与传统的醋制法进行比较，力求寻找出醋制延胡索的新方法。

1 仪器与试药

1100 高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；WD800B型格兰仕微波炉（广东格兰仕集团有限公司）；KQ-300VDB型数控超声波清洗器（昆山超声仪器有限公司）；pHS-3C精密pH计（上海嘉鹏科技有限公司）；BS210S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）。

延胡索乙素、原阿片碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号分别为110725-200605、120592-200608）；延胡索药材采集于浙江东阳，经广州中医药大学中药鉴定教研室黄海波副教授鉴定为真品；乙腈为色谱纯，水为纯净水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 传统醋炙法

取大小均匀延胡索片500g，加入100g米醋搅拌，闷润2h，待醋液被吸尽后置于炒制容器内，用文火加热炒干，取出晾凉，备用。

2.2 微波炮制工艺研究

选择对延胡索炮制品质量可能有影响的4个因素：闷润时间（A）、醋的用量（B）、微波热力（C）、炮制时间（D）作为考察因素，每个因素取3个水平。试验取延胡索饮片500g，加入适量醋水，闷润，待辅料被吸尽后按因素水平表（表1）安排试验。

表1 因素水平Tab1 Factor and levels

试验以原阿片碱和延胡索乙素以及总生物碱的含量为指标，采用综合加权评分法来确定延胡索的最佳炮制工艺。试验对各指标进行“隶属度”的计算，以每个试验所得含量为指标值：指标隶属度＝（指标值－指标最小值）/（指标最大值－指标最小值）。可见，指标最大值的隶属度为1，而最小值隶属度为0，所以0≤指标隶属度≤1。其具体的权重为原阿片碱含量占30%，延胡索乙素含量占30%，总生物碱含量占40%。综合评分＝原阿片碱含量的隶属度×30%＋延胡索乙素含量的隶属度×30%+总生物碱含量的隶属度×40%，满分为1.00。正交试验结果见表2；方差分析结果见表3。

2.3 原阿片碱和延胡索乙素的含量测定

2.3.1 色谱条件 色谱柱：迪马 kromasil C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈（A）-0.2%冰乙酸（B，三乙胺调pH6.0），梯度洗脱（0～50min，B为15%～50%；50～70min，B为50%～80%；70～75min，B为80%）；流速：1.0mL·min-1；柱温：30℃；检测波长：280nm。色谱见图1。

2.3.2 混合对照品溶液的制备 取原阿片碱对照品约3.52mg、延胡索乙素对照品约6.02mg，精密称定，置于25mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得混合对照品溶液。

2.3.3 供试品溶液的制备 取样品药粉1.0g（过三号筛），精密称定，置于锥形瓶中，加入20mL蒸馏水，超声提取30min，重复提取2次，滤过，合并滤液，减压浓缩约为10mL，转移至分液漏斗中，加氨水5mL，静置，用乙醚萃取3次，每次20mL，合并乙醚液，蒸干，加甲醇5mL溶解，滤过（0.45μm滤膜），取续滤液，即得。

2.3.4 标准曲线的制备 分别精密吸取混合对照品溶液1、2、4、6、8、10µL，注入液相色谱仪中。以对照品进样量（X）为横坐标，峰面积积分值（Y）为纵坐标，制备标准曲线，得原阿片碱、延胡索乙素的回归方程分别为Y＝8.2874X－1.3325（r＝0.9998）、Y＝6.1913X－3.0412（r＝0.9999）。结果表明，原阿片碱、延胡索乙素的进样量分别在0.1408～1.4080、0.2408～2.4080μg范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系。

2.3.5 含量测定 按上述色谱条件，对延胡索及其炮制品中的原阿片碱和延胡索乙素进行含量测定，结果见表2。

2.4 总生物碱的含量测定

2.4.1 供试品溶液的制备 取延胡索粉末（过三号筛）10.0g，精密称定，置于索氏提取器中，加入10%氨试液5mL湿润，闷润20min，加入氯仿80mL回流提取至无生物碱反应为止，提取液加入无水硫酸钠3g，回收氯仿至小体积，转入50mL容量瓶中，加氯仿至刻度，备用。

2.4.2 含量测定 精密吸取“2.4.1”项下供试品溶液5mL，置于干燥烧杯中，低温水浴加热蒸干，室温下放冷，精确加入0.02mol·L-1硫酸滴定液20mL，摇匀，使其充分溶解，插入笔式pH计，用0.02mol·L-1氢氧化钠滴定液进行滴定，pH 5.1为滴定终点。

2.4.3 计算方法 总生物碱含量以延胡索乙素计算，每1mL 0.02mol·L-1硫酸滴定液相当于7.1084mg延胡索乙素（C21H25NO4）。总生物碱含量测定结果见表2。

由表2、表3可知，各因素的影响程度依次为C（微波热力）＞D（炮制时间）＞B（醋的用量）＞A（闷润时间），C因素对炮制工艺有显著性影响（P＜0.05），因素A、B、D均无明显的差异，最佳的炮制工艺为A2B2C2D3，即每100kg药材加30kg醋，闷润2h，60%微波热力，炮制5min。

2.5 工艺验证

用传统醋炙法、上述最佳炮制工艺分别对延胡索进行炮制，并按“2.3”、“2.4”项下方法测定生品、传统醋炙品和微波炮制品中原阿片碱、延胡索乙素、总生物碱的含量。结果表明，延胡索经传统醋炙和微波炮制后，原阿片碱和延胡索乙素含量均有不同程度升高，总生物碱含量则略有下降。微波炮制品与传统醋炙炮制品比较，两者中原阿片碱和延胡索乙素的含量无显著的差异，以微波炮制品的含量略高，详见表4。

表2 正交试验结果Tab2 Results of orthogonal tests

表3 方差分析结果Tab3 Results of variance analysis

表4 延胡索生品及其炮制品的含量测定结果Tab4 Results of content determination of and processed

3 讨论

本文所得延胡索最佳的炮制工艺简单、可控，所得炮制品外观完整，焦化、糊化现象较少，符合延胡索炮制品的要求。

与生品比较，微波炮制品中原阿片碱和延胡索乙素的含量大大增加，可能是两方面的原因：醋制后可使生物碱生成盐，在水中的溶解度增加，含量升高；延胡索经微波炮制后，质地变得酥松，有利于药材有效成分溶出。

试验比较了醋制延胡索传统炮制法和微波炮制法。结果表明，两者中原阿片碱、延胡索乙素和总生物碱的含量均无明显的差异，炮制的饮片均达到要求。验证试验还表明，微波炮制法工艺稳定、可行，因此微波炮制法可作为代替传统醋炙法的新方法。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：130-131.

[2] 龚千锋主编.中药炮制学[M].北京：中国中医药出版社，2007：189-190.

[3] 窦志英，孙 巍，田丽莉，等.HPLC法比较延胡索生品与不同炮制品中3种有效成分的含量[J].中药材，2007，30（4）：3991.

[4] 窦志英，孙 巍.不同炮制方法对延胡索中延胡索乙素含量的影响[J].天津中医药大学学报，2006，25（3）：186.

[5] 曹 柳，窦志英，王 萍，等.不同炮制方法对延胡索中有效成分含量的影响[J].中国中医药信息杂志，2009，16（16）：42.

Microwave Processing Technology ofCorydalis yanhusuoby Orthogonal Test

RONG Sui-hua
（Dept.of Pharmacy，Guangdong Provincial Hospital of TCM，Guangzhou 510120，China）
GAO Ni
（Guangzhou Pharmaceutical Higher Vocational School，Guangzhou 510430，China）

OBJECTIVE：To optimize the microwave processing technology ofCorydalis yanhusuo.METHODS：The microwave processing technology ofC.yanhusuowas optimized by orthogonal test using the content of protopine，tetrahydropalmatine and total alkaloids as index and the amount of vinegar，moistening time，microwave heating and process time as factors.RESULTS：Optimized processing technology ofC.yanhusuowas follows：the amount of vinegar of 30kg，moistening times of 2h，microwave heating of 60%，process time of 5min.CONCLUSION：This method is simple，practical and easy to control，could be used as a new processing method ofC.yanhusuo.

Corydalis yanhusuo；Vinegar-processed；Microwave processed；Protopine；Tetrahydropalmatine；Total alkaloids；Orthogonal design

R284.2；R283.1

A

1001-0408（2011）19-1769-03

＊主管药师。研究方向：中药分析。电话：020-81887233-32004。E-mail：13688879998@163.com

2010-10-17

2011-02-06）