VEGF 、MMP-7在子宫内膜异位症中的表达及意义*

赵 莉 王 震 王言奎

(1.青岛大学医学院，山东 青岛 266003； 2.泰山医学院附属泰山医院， 山东 泰安 271000)

子宫内膜异位症，即有功能的子宫内膜腺体和基质在子宫以外的部位生长，最常见的部位是腹腔，其发病机制仍存在争议。Sampson的经血逆流学说，即假设脱落的子宫内膜组织通过输卵管逆流入腹腔而种植于腹膜表面，仍是最为广泛被接受。而种植过程就是一个侵袭周围组织，引起细胞外基质崩溃和重建的过程，需要蛋白水解酶的参与。种植成功后必须要有新生血管提供血液才能进一步发展。在这些过程中基质金属蛋白酶(MMPs)和血管内皮生长因子(VEGF)起了重要作用。我们拟通过免疫组化检测VEGF、MMP-7在子宫内膜异位症中的表达情况及相关性，探讨其在发病机制中可能的作用。

1 资料与方法

1.1临床资料

实验组：选择腹腔镜手术的内异症患者，年龄27-40岁(34.4±3.73)，术后病理检查证实均为子宫内膜异位症。获得内异症患者在位内膜40及异位内膜39份 ，异位内膜均从卵巢子宫内膜异位囊肿取得。按1985年美国生育学会修订的内异症分期标准(r-AFS)，全部为Ⅱ-Ⅲ期病例。对照组:取同期因肌间型子宫肌瘤行子宫切除患者32 例(4017 ±215) 年,均无月经性状的改变。患者术前3 个月内无激素及抗EM 药物治疗史。

1.2检测方法

1.2.1取材 术中取卵巢异位囊肿组织和其在位子宫内膜和同期因肌间型子宫肌瘤行全子宫切除术的患者的在位内膜,置10 %甲醛液固定,石蜡包埋,4μm 连续切片,HE 染色后镜下观察到典型子宫内膜组织为入选标本,分别为研究组的异位内膜、在位内膜和对照组的在位内膜。

1.2.2MMP7、VEGF 测定: 采用免疫组化SP法检测MMP7、VEGF ,试剂一抗(即用型兔抗MMP7、VEGF 单克隆抗体) 由北京博奥森生物技术有限公司生产,SP 免疫组化试剂盒及DAB显色剂购自北京中衫金桥生物技术有限公司。操作按说明书进行。用已知的标本片做为阳性对照,PBS 代替一抗做为阴性对照。

1.3结果判定 以黄色和棕黄色为阳性信号。根据染色强度和显色细胞比例的综合评分将染色结果分为(-)、(+)、(++)3级。①按内膜组织的显色有无及深浅评分:无显色为0分,浅黄色或黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分;②按内膜组织的显色比例评分: <5%为0分, 5% -25%为1分, 25% -50%为2分, >50%为3分。每例标本的积分为[①+②]/2,按积分高低分为: 0 -0. 5分为阴性(-)、0. 5-1. 5分为阳性(+)、1. 5-3分为阳性(++)。

1.4统计学方法 采用SPSS10. 0统计软件处理,计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验,检验水准均为0. 05。

2 结 果

2.1MMP-7在组织中的表达

结果表明, MMP-7在子宫内膜中主要分布于腺上皮细胞,阳性信号定位于细胞浆内,部分定位于胞膜,间质细胞中无表达(见图1、2)。MMP-7在研究组异位内膜中的表达率及表达强度均低于在位内膜,两者比较,差异无统计学意义(P>0. 05)。研究组异位内膜中的表达率与对照组比较,无明显差异;但表达强度明显高于对照组,两者比较,差异有统计学意义(P<0. 05)。见表1。

2.2VEGF在组织中的表达

VEGF阳性表达主要见于子宫内膜间质血管内皮细胞和腺上皮细胞的胞浆(见图3、4)。卵巢异位内膜VEGF表达与同期在位内膜相比，表达增高，差异有显著性(P<0.05)，且明显高于正常内膜(P<0.005)；c、在位内膜与正常子宫内膜相比，VEGF表达差异无显著性(P>0.05)。见表2。

表1 MMP-7在研究组在位、异位内膜组织及对照组组织中表达情况

组别 MMP-7-+++合计正常内膜154120在位内膜*1791440异位内膜*1981239合计51212799

图1 MMP-7 在在位子宫内膜的表达.图2 MMP-7 在异位子宫内膜的表达

图3 VEGF 在异位子宫内膜的表达图4 VEGF 在在位子宫内膜的表达

表2 VEGF在研究组在位、异位内膜组织及对照组组织中表达情况

组别 VEGF-+++合计正常内膜136120在位内膜*19111040异位内膜*1281939合计44253099

3 讨 论

3.1MMP-7在子宫内膜异位症发生发展中的作用

基质金属蛋白酶(MMPs)是一组几乎能降解细胞外基质所有成分(如胶原、纤维连接蛋白、蛋白多糖等)的蛋白酶,目前,至少发现23种MMPs[1],按其作用的特异性底物不同可分为四大类:胶原酶(MMP-1、8、13等)、明胶酶(MMP-2、9)、基质溶解酶(MMP-3、7、10、11、12)和型金属蛋白酶类(MMP-14、15、16、17等)。属于其中基质溶素类的MMP-7于1995年首先从人类直肠癌细胞中分离出来[2],基因位于11q21～q22,由于缺乏与血红素结构蛋白同源序列而成为MMPs家族中最小成员,但可降解弹性蛋白、层粘连蛋白、纤粘连蛋白、Ⅳ型胶原等多种重要成分。MMP-7目前在肿瘤研究较多,已经发现是参与癌变细胞转移、侵蚀的重要因子[3],由于EMs的生物学行为具有类似恶性肿瘤的周围浸润、远处转移和种植的恶性特征,因此MMP-7近年来也成为研究EMs病因学的靶基因。Parsons等[4]研究发现激活后的MMP-7具有广泛的蛋白水解活性且能活化其他MMPs成员MMP-2、MMP-9及灭活serpins(丝氨酸蛋白酶抑制剂)。Shan K等[5]提出MMP-7基因启动子区181A/G多态与子宫内膜异位症发病存在关联。本研究结果亦提示异位内膜组织中MMP-7的过度表达可以使子宫内膜的侵袭性增强。

3.2VEGF在子宫内膜异位症发生发展中的作用

VEGF是1989年Ferrara等在牛垂体滤泡星状细胞体外培养液中首先纯化出来的糖类蛋白质，是一高度特异的血管内皮细胞有丝分裂素。Takahashi等[6]认为，内膜中被VEGF-A或者其他炎症因子激活的髓系内皮先祖细胞与新血管的形成有关。异位内膜在发生侵袭种植过程中，必须形成新的血管网络。VEGF的含量增高,在自分泌和旁分泌的共同作用下,刺激毛细血管增生,为异位生长的腺上皮细胞提供赖以生存的物质基础;促进异位内膜增殖和浸润入盆腔和腹膜内组织,形成腹腔的异位灶[7]。本研究表明:在异位内膜组织中VEGF的阳性表达率明显高于正常内膜组P<0.01。提示异位内膜组织中血管形成活跃,易于异位内膜的种植。

3.3MMP与VEGF在子宫内膜异位症的发生发展中有协同作用

异位内膜在发生侵袭种植过程中，必须形成新的血管网络，血管生成过程中的内皮细胞循环及血管结构形成均需要ECM的降解和重建，MMPs能够降解基底膜糖蛋白及细胞外基质成分，因此在血管生成中起重要作用。在多种肿瘤中，VEGF的表达与MMPs的表达密切相关，如乳腺癌、非小细胞肺癌、卵巢浆液性囊腺癌等[8,9]。虽然子宫内膜异位症的发病机理众说纷纭，但MMPs及VEGF在EMs异位病灶的侵袭、转移与血管形成过程中无疑有着重要的作用，探讨两者的表达情况有助于阐明EMs的发病机制，随着新药如MMPs抑制剂和VEGF抑制剂的问世以及在恶性肿瘤中的应用，针对MMPs、VEGF的分子靶向治疗策略也将有可能成为EMs有效的治疗或辅助治疗方法。

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