2，3-吲哚醌在大鼠体内的药代动力学研究*

2011-01-23侯江涛张婷婷毛小红牟群芳张继国

山东第一医科大学(山东省医学科学院)学报 2011年2期

侯江涛张婷婷毛小红牟群芳张继国岳旺

(1青岛大学，山东青岛 266021；2泰山医学院，山东泰安 271016)

2,3-吲哚醌(2,3-indolinedione)，是一种存在于海洋和动物体内的内源性活性因子[1]，具有抗癌[2]，抗病毒[3]，抗衰老等多种生物活性。但其体内来源及药物生化代谢尚未报道，本文考察单次静脉注射和口服给予大鼠2,3-吲哚醌后的药代动力学,为深入该药的新药研发提供依据。

1 实验材料与设备

1.1药品与试剂

2,3-吲哚醌对照品：上海新生源生物医药有限公司；

内标物奎硫平：美迪西普亚医药科技(上海)有限公司；

甲醇(Burdick & Jackson，HPLC grade)；

甲酸(ACROS ORGANICS，HPLC grade)；

水为超纯水。

1.2仪器设备

液相色谱仪(Agilent 1200)，质谱仪(6410B，Agilent公司)，电喷雾离子源(ESI)，串联四极杆质量分析器。数据处理系统为MassHunter软件(Agilent公司)。涡旋振荡器(Vortex-Genie 2，Scientific Industries，Inc)；小型台式高速冷冻离心机(5417R，Eppendorf)；微量分析天平(XP26，梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司)；超纯水机(Millipore)。色谱柱为Venusil XBP PH，5 μm，100×2.0 mm。

1.3实验动物

SD大鼠，购于上海西普尔-必凯实验动物有限公司，雄性，体重：200～330 g。动物饲养：实验动物按照动物房标准操作规程饲养。食物和水食物由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供，动物除在特定给药期间，可以自由饮食及饮水。动物房环境温度20-25 ℃ ，相对湿度30%～70%，12小时光照。实验动物在实验前适应1～7天。实验动物必须健康并适应环境，口服给药前禁食10～14小时。给药后4小时后恢复饲料。

2 实验方法

2.1受试物配制

静脉给药溶液的配制：称取适量受试物，溶于5%二甲基亚砜, 40% PEG400 and 55%盐水中，得到浓度为2 mg/ml的澄清溶液，用于静脉注射给药。

口服给药溶液的配制：称取适量受试物，溶于1.25%西黄耆胶水溶液中，得到浓度为5 mg/ml的混悬液，用于口服给药。

2.2动物分组与给药

6只SD大鼠随机分为2组，每组3只。第一组：通过尾静脉注射给予动物受试物溶液，剂量为2 mg/kg体重；第二组：通过口服灌胃给予动物受试物溶液，剂量为5 mg/kg体重。

2.3血液样本采集与预处理

经眼眶静脉(异氟烷麻醉后)或其他合适的静脉采大约0.25 ml血液，置于含K2EDTA的一次性真空采血管内。采集时间点为：给予受试物前(0hr)和给予受试物后 5 min，15 min，30 min，1 h，2 h，4 h，6 h，8 h和24 h。血液样本采集后置于冰上，并立即取出50 μl全血加入已混有内标(50 ng/ml 奎硫平)的250 ml甲醇溶液中涡旋1分钟后，离心分离上清液(离心条件：15000转/分钟，5分钟，2～8 ℃)，收集的100 μl上清液分析前存放于-80 ℃。

2.4标准曲线和质控样品的配制

取适量2,3-吲哚醌储备液，用甲醇：水混合溶液(1∶1，v/v)逐级稀释，配制成浓度为100，40，20，4，2和1 μg/ml的标准溶液，取标准溶液各5 μl平行加入到195 μl 大鼠空白全血或空白尿液中，制得浓度为 2500，1000，500，100，50和25 ng/ml的标准曲线样品。

取适量2,3-吲哚醌储备液，用甲醇：水混合溶液(1∶1，v/v)逐级稀释，配制成浓度为100，80，和8 μg/ml的质控溶液，取质控溶液各5 μl平行加入到195 μl大鼠空白全血中，制得浓度为2000，200和40 ng/mL的质控样品。

2.5样本分析

采用液相色谱串联质谱联用对处理好的样品进行测定。测定条件如下：

色谱条件：

流动相：甲醇-5mM甲酸/氨水(65:35, v/v)；

流速：0.3 ml/min；

柱温：35 ℃；

进样量：5 μl。

质谱条件

采用电喷雾离子化源(ESI)，正离子模式，喷雾电压4500 V，雾化气为氮气，雾化压力为50 psi；去溶剂气为氮气，温度350 ℃，流速为9 L/min；采用多反应监测(MRM)模式对药物离子浓度进行测定，淫羊藿苷及内标的最优MRM参数见表1。