落葵果实中总黄酮提取条件的研究

赵建芬，董 基，严子军，林奕云

（肇庆学院 化学化工学院，广东 肇庆 526061）

黄酮类化合物是广泛存在于自然界的一大类化合物,其在植物体内大部分与糖结合,一部分以游离形式存在.黄酮类成分具有抗氧化、增强免疫力、降血脂[1]、血糖等功效[2],它已成为近年来的研究热点[3－4].

落葵为落葵科落葵属植物（Basella rubra L.），又名胭脂菜.其成熟果实为紫黑色浆果，含有黄酮类化合物.目前，尚未见到采用超声提取的方法从落葵果实中提取黄酮类化合物的研究报道.本文采用超声提取法，通过正交实验对影响落葵果实总黄酮提取效率的乙醇浓度、料液比、提取时间三因素进行考察，选择最佳提取条件,并且采用比色法以芦丁为对照品对落葵果实中总黄酮的含量进行测定.目的在于寻找较为简单、快速和有效的提取方法，为以后落葵中黄酮类天然物质的研究和开发提供借鉴参考.

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

实验所用材料、试剂及仪器如下：红花落葵成熟果实（采自高要市莲塘镇农家菜园）；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用）、体积分数为95%的乙醇、亚硝酸钠，硝酸铝、氢氧化钠等（均为A.R.级）；SB25－12D台式超声波清洗器（宁波新芝生物科技股份有限公司）；UV/VIS916型紫外－可见分光光度计（澳大利亚，GBC公司）；S22/S22PC可见分光光度计（上海棱光技术有限公司）；SHZ－D循环水式真空泵等.

1.2 标准溶液与样品液的制备

精确称取芦丁对照品0.005 2 g，用体积分数为70%的乙醇溶解并定量转移至25 mL的容量瓶中定容至刻度，即得浓度为0.208 0 g/L的芦丁标准品溶液.

称取新鲜落葵果实适量，破皮，置于100 mL带塞锥形瓶中.按实验设计条件进行超声提取，提取液减压抽滤，取其滤液.将滤液定量转移至50mL的容量瓶中，用相同浓度的乙醇溶液定容至刻度，即得样品液.

1.3 实验方法

1.3.1 芦丁标准曲线的绘制[5]

精密量取芦丁标准溶液1.50 mL，置于10 mL的容量瓶中，加入体积分数为70%的乙醇3.5 mL.加质量浓度为5%的亚硝酸钠溶液0.30 mL，摇匀，放置6 min；再加入质量浓度为10%的硝酸铝溶液0.30 mL，摇匀，放置6 min；加入1.0 mol/L的氢氧化钠溶液4.00 mL，加水至刻度，摇匀，放置15 min.以试剂空白为参比，在400～600 nm波长范围内对显色液进行扫描.结果显示芦丁标准品在510 nm处有最大吸收，故选择510 nm为检测波长.

取系列体积的芦丁标准溶液，按上述显色反应体系配制成系列浓度的芦丁显色液，以试剂空白为参比，在波长510 nm处测定各溶液的吸光度，以芦丁浓度C(g/L)为横坐标，吸光度A为纵坐标，绘制标准曲线.结果表明：在0.008 32～0.049 9 g/L范围内，回归方程为A＝12.878C－0.001 9，相关系数γ＝0.998 5，线性关系良好.

1.3.2 落葵总黄酮提取工艺条件的选择

落葵总黄酮提取工艺流程如下：落葵果实→破皮→乙醇超声提取→减压过滤→取滤液→比色法测定总黄酮的含量.

分别对提取剂浓度、料液比和提取时间进行单因素实验.根据实验结果，设计了L9(33)正交实验，对提取剂浓度、料液比和提取时间3个因子在3个不同水平进行优选（见表1）.

表1 正交实验因素和水平

2 结果与讨论

2.1 检测方法精密度的测定

取适当浓度的芦丁显色液，在已建立的检测方法下重复测定6次，结果如表2所示.

由表2数据分析可知RSD小于0.2%，说明该方法具有良好的精密度，可将其用于测定同一匀质样品.

2.2 正交实验确定落葵总黄酮的提取工艺条件

分别取样品液2.00 mL，按所建立的比色法测其吸光度A值，分别计算落葵果实中总黄酮的含量，结果如表3所示.

表2 精密度的实验结果（n＝6）

表3 正交实验结果

由表3正交实验结果可知，影响落葵总黄酮提取因子的主次顺序为B＞A＞C，即料液比是落葵总黄酮提取的主要影响因素，其次是乙醇浓度和提取时间.综合分析正交实验结果，发现总黄酮超声提取条件最佳组合为A2B1C3，即以体积分数为70%的乙醇为提取剂，料液比为1∶20，提取时间为35 min.

2.3 提取工艺的验证实验分析

为进一步考察最佳提取条件的稳定性和合理性，称取适量的落葵果实，在最佳工艺条件下进行3次平行实验，用所建立的比色法分别测定落葵果实总黄酮的含量.结果如表4所示.

表4 最佳工艺的验证实验（n＝3）

由表4数据分析可知，在优化条件下，提取的落葵总黄酮量均高于上面正交实验的9个实验点，所以最佳提取条件A2B1C3是合理的而且该工艺稳定可行，从而证明了优选结果的科学性.

3 结论

通过正交实验，确定了乙醇超声提取落葵果实总黄酮含量的最佳工艺条件为A2B1C3，即以体积分数为70%的乙醇为提取剂、物料比为1∶20、提取时间为35min，在此条件下提取出的总黄酮含量为5.3mg/g.总的来说，超声波提取法简单、易操作，在优化条件下落葵果实总黄酮提取率高，实验的重复性好，具有一定的实用价值.

[1] 唐浩国.黄酮类化合物研究[M].北京:科学出版社,2009.

[2]郭长江.食物类黄酮物质有营养学意义[J].中国食物与营养,2004(5):38-40.

[3] 汪远红,汪洪武,郑俊辉.分光光度法测定玉兰总黄酮的含量[J].西北药学杂志,2008,23(6):357.

[4] 张泽英.大蒜总黄酮提取工艺研究[J].安徽农业科学,2009,37(22):10 673-10 674.

[5] 闫克玉,于静.超声波强化提取怀菊中总黄酮的试验研究[J].科技信息,2007,34:363-364.

[6] 耿敬章.香樟叶中黄酮类化合物的提取工艺[J].西北农业学报,2009,18(1):267-270.