竹叶提取物抑菌效果研究

贾桂云，邹润英，郭飞燕

（海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158）

竹叶提取物抑菌效果研究

贾桂云，邹润英，郭飞燕

（海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158）

研究了金镶玉竹叶的提取物的抑菌作用.结果表明：金镶玉竹叶的乙醇冰醋酸提取物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度是3.8%，对根霉最小抑菌浓度7.5%.提取物的pH值影响抑菌效果，在酸性、中性条件下抑菌作用比碱性条件强.各提取物对曲霉菌无抑菌作用.

竹叶;提取物;抑菌效果

竹子是禾本科（Poaceae）竹亚科（Bambusoideae）多年生常绿植物.竹子中含有多种有益的成分，对这些成分的提取、分离和开发利用日益受到人们的重视.一些研究表明，竹叶中含黄酮及其苷类、酚类、醛类、氨基酸、多糖、天然色素、蛋白质、茶多酚类化合物[1].它们具有优良的抗自由基、抗氧化、阻断亚硝化反应、抗菌抑菌、抗衰老、调血脂增强免疫力的作用[2].本文对竹叶不同溶剂的提取物抑菌性能进行研究，为竹叶提取物作为天然防腐剂替代化学防腐剂，用于食品添加剂提供参考.

1 材料与方法

1.1 材料、仪器与试剂

金镶玉竹叶（Phyllostachys aureosulcata f.spect⁃abilis）在海南师范大学校园内采摘，晾干、粉碎.

DRP—9052型电热恒温培养箱（上海森信实验仪器有限公司）；SYQ.DSX—280型电热手提压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）；RE—52A旋转蒸发器（上海青浦沪西仪器厂）；DK—S28型电热恒温水浴锅（上海森信实验仪器有限公司）；SHB—Ⅲ循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）；HDM—250调温电热套（金坛市雷华仪器有限公司）.

无水乙醇，冰醋酸，正己烷等均为国产分析纯试剂.

大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、根霉（Rhizop usoryzae）、曲霉（Aspergillus ni⁃ger）均为海南师范大学生命科学院微生物实验室提供.

1.2 竹叶提取物的制备

取室温晾干，粉碎好的金镶玉竹叶60克，共称3组，分别置于500 mL烧杯中.A组：加入50 mL无水乙醇、30 mL冰醋酸，B组：加入50 mL无水乙醇；C组：加入50 mL正己烷.分别补充蒸馏水至200 mL，80℃水浴回流16 h，溶液颜色变成黄棕色或棕色后过滤，取滤液进行减压蒸馏.A组：蒸出乙醇和部分冰醋酸后定容到25 mL.提取液的质量分数为72%，调节pH值到6.5，得提取液A；B组：蒸出乙醇后定容到25 mL，提取液的浓度为72%，调节pH值到6.5，得提取液B[3]；C组：蒸出正己烷后定容25 mL，提取液的浓度为72%，调节pH值到6.5，得提取液C.

1.3 培养基的制备

细菌用培养基按照文献[4]牛肉膏蛋白胨培养基配方制备；霉菌用培养基按照文献[4]高盐察氏培养基配方制备.

1.4 菌悬液的制备

实验用菌从4℃冰箱中取出，画线法接种在新鲜斜面培养基上，细菌经37℃/24 h，霉菌经28℃/48 h恒温培养，菌种即被活化.

用无菌生理盐水洗下斜面培养基的细菌，吸取1.00 mL菌原液加入9.00 mL无菌生理盐水中，得稀释10倍的菌悬液，依次进行梯度稀释.将不同稀释度的菌悬液各吸取0.20 mL分别加入到已灭菌冷却的各自适宜的平板培养基表面，涂布均匀.按细菌经37℃/24 h、霉菌经28℃/48 h恒温培养.根据观察结果，选取各自适宜的菌液浓度，要求在该浓度下，菌能长满整个培养皿且分布均匀.

1.5 滤纸片的制备

滤纸用打孔器打成6.00 mm圆片，放入洁净的试管内，经0.1 MPa，121℃灭菌20 min，备用.

1.6 抑菌实验方法

用无菌镊子取灭菌后的滤纸片，浸泡在提取液中，备用.

用无菌吸管吸取各自适宜浓度的的菌悬液0.2 mL滴加在已倒好的平板培养基表面，用涂布器涂布均匀.用无菌镊子夹取滤纸片，沥干，贴在含菌平板上，每皿3片，每种提取液做3次重复.细菌经37℃/24 h；霉菌28℃/48 h恒温培养后，测量其抑菌圈直径，比较抑菌效果.

1.7 最小抑菌浓度（MIC）的测定

用2倍稀释法，将竹叶提取液（浓度72.0%）用无菌蒸馏水稀释，得到质量分数为36.0%、18.0%、9.0%、4.5%及2.3%待试样品，在各平皿内分别加入2.0 mL不同浓度的提取液，每个浓度作3次重复，然后每皿倒入20 mL已灭菌的培养基，充分混合，待冷却凝固后，每皿加入0.2 mL菌悬液，涂布均匀，按1.4方法培养，以不长菌的最低浓度为最小抑菌浓度（MIC）[5].

1.8 pH对抑菌效果的影响

用HCl或NaOH溶液调节A、B、C提取液的pH值，考察pH=5、pH=7、pH=8时的抑菌效果，按照1.6方法进行抑菌试验，每种提取液的不同PH作3个重复试验，比较抑菌效果.

2 结果与讨论

2.1 竹叶提取液抑菌效果

A、B、C三种提取液抑菌效果见表1.

表1 竹叶提取液抑菌效果Tab.1 Antimicrobial effects by extract of bamboo leaves

从表1可见，竹叶的A、B、C三组提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢菌有一定的抑菌作用，对根霉抑制作用较弱，对曲霉菌的抑制效果不明显.

A、B、C提取液抑菌作用强弱顺序：（乙醇+冰醋酸）提取液＞乙醇提取液＞正己烷提取液

2.2 pH对抑菌效果的影响

A、B、C提取液pH=5、pH=7、pH=8时的抑菌效果，结果见表2.

由表2可知，在酸性及中性条件下，金镶玉竹叶提取物的抑菌效果明显优于碱性条件，在选定的三个pH条件下，pH=5抑菌效果最好.

2.3 最小抑菌浓度（MIC）的测定

A、B、C三组提取液中，A提取液的抑菌效果较好，A提取液对大肠杆菌、枯草芽抱菌、金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度均为3.8%，对根霉的最小抑菌浓度7.5%.竹叶提取液最小抑菌浓度实验结果见表3.

3 结论

金镶玉竹叶的A、B、C三组提取液对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢菌和根霉有良好的抑菌作用，对曲霉菌的抑制效果不明显.

表2 竹叶提取液的pH对抑菌效果影响Tab.2 Influence of pH on antimicrobial effects of extract of bamboo leaves

表3 竹叶提取液最小抑菌浓度(MIC)Tab.3 The minimal inhibitory concentration(MIC)of extract of bamboo leaves

A提取液（乙醇+冰醋酸提取）的抑菌效果好于B（乙醇）提取液和C（正己烷）提取液.

pH值对竹叶提取物的抑菌效果有明显的影响.酸性或中性条件下对细菌的抑菌效果好，碱性条件下抑菌效果较差.

竹叶的A提取液（乙醇+冰醋酸提取）适合添加到主要由细菌引起变质的食品中.

本研究为竹叶的开发利用提供实验数据，我国竹叶资源丰富，若能大规模开发利用，将会带来巨大经济效益和社会效益.

[1]郭雪峰,孟志芬.竹子天然产物的种类及其加工利用的研究[J].世界竹藤通讯,2006,4(2):1-4.

[2]张英.天然功能性竹纤维提取物—竹叶黄酮[J].中国食品添加剂,2002(3):54-58.

[3]许钢,张虹,俞国科.竹叶提取物抑菌效果探讨[J].食品科学,2000,01,20:21-23.

[4]沈萍,范秀容,李广武.微生物学实验[M].北京:高等教育出版社,1999:50-57.

[5]吕翠玲,巫中德,戴欣,等.常用防腐剂抗菌作用研究[J].微生物学通报,1994,22(1):38.

Study on Antimicrobial Effects by Extract of Bamboo Leaves

JIA Guiyun，ZOU Runying，GUO Feiyan
（College of Chemistry and Chemical Engineering,Hainan Normal University,Haikou571158，China）

Antimicrobial effects of extract from Phyllostachys aureosulcata f.spectabilis were investigated.The results showed that the minimal inhibitory concentration(MIC)of extracts of the mixture of ethyl alcohol and glacial acetic acid for Escherichia coli,Staphylococcus arueus,Bacillus subfilis was 3.8%and for Rhizop usoryzae was 7.5%.The PH value of extracts have influence on antimicrobial effects.In the acid or neutral condition antimicrobial effects were better than in the basic condition.All extract of bamboo leaves have no antimicrobial effects for Aspergillus niger.

bamboo leaves;extracts;antimicrobial effect

Q 388

A

1674-4942（2010）04-0420-03

2010-09-05

毕和平