人生长激素对人胃、结肠癌细胞株细胞周期的影响

黄世华 陈嘉勇 曾德妙

重组人生长激素(rhGH)对消化道恶性肿瘤患者术后进行代谢调理治疗，明显促进了肿瘤患者的康复，已经在外科领域广泛应用。但人生长激素(hGH)作为一种生长因子，肿瘤患者术后能否使用rhGH存在争议。本研究从细胞周期角度探讨rhGH对人胃、结肠癌细胞株MKN45和Colo320增殖的影响，为临床胃、结肠癌术后患者能否应用rhGH提供一定的实验参考依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂及仪器 人胃癌细胞株MKN45、人结肠癌细胞株Colo320(中科院上海细胞生物所细胞库);重组人生长激素(SAIZEN，瑞士Sernono公司);奥沙利铂(L-OHP，江苏恒瑞医药股份有限公司);RPMI1640(美国GIBCO公司)。小牛血清(浙江省杭州四季青生物工程材料有限公司);流式细胞仪(美国COULTER公司，EPICXU型)。

1.2 实验分组 对照组(RPMI1640)、抗肿瘤药物组(LOHP)、rhGH组及L-OHP+rhGH组，后两组又分为4个亚组，表1。

1.3 细胞培养及样品制备 MKN45、Colo320细胞在含10%小牛血清的RPMI1640完全培养液中、37℃、5%CO2的培养箱中培养。取对数生长期的细胞用0.25%胰蛋白酶消化，4 g/L台盼蓝染色后计算细胞活率(Via=99%)，并细胞计数，调整细胞悬液密度为1×105/ml备用。将细胞悬液接种于6孔板中，2 ml/孔，每组设3个复孔，4 h细胞完全贴壁后加入药物。培养48 h后收集细胞，PBS液洗涤，70%乙醇固定，4℃保存24 h。加入荧光素(碘化丙啶)染色，激发波长488nm进行细胞周期分析。

表1 实验分组及药物浓度

2 结果

2.1 细胞周期 L-OHP组和L-OHP+rhGH组细胞周期发生明显变化。G0～G1期:L-OHP组和L-OHP+rhGH组比对照组或rhGH组显著增加，且L-OHP+rhGH与对应的rhGH组配对比较也显著增加(P＜0.01)，其他各组间没有显著差异(P＞0.05)。S期:L-OHP组和L-OHP+rhGH组比对照组和rhGH组降低(P＜0.01)，且L-OHP+rhGH与对应的rhGH组比较S期细胞减少(P＜0.01);同时，L-OHP+rhGH组间随着rhGH剂量的增加没有明显的变化规律。rhGH组和对照组比较虽无统计学意义(P＞0.05)，但有升高趋势。G2～M期:LOHP组和L-OHP+rhGH组比对照组和rhGH组降低(P＜0.05)，rhGH组与对照组比较无统计学意义(P＞0.05);同时，L-OHP+rhGH组与对应的rhGH组及对照组比较，G2～M 期细胞也减少(P＜0.05)，但胃癌细胞无统计学意义，见表2。

表2 药物作用后MKN45和Colo320细胞株各组的增殖周期百分数(±s)

表2 药物作用后MKN45和Colo320细胞株各组的增殖周期百分数(±s)

注:与对照组和rhGH各亚组比较，*P＜0.01

?

2.2 细胞增殖指数(PI)

L-OHP组和L-OHP+rhGH组的PI较对照组明显降低(P＜0.01)，L-OHP+rhGH组与对应的rhGH组配对比较其PI显著降低(P＜0.01);同时，rhGH组与对照组、L-OHP+rhGH组与L-OHP组比较PI均无统计学意义(P＞0.05)，见表3。

表3 药物作用后MKN45和Colo320细胞株各组细胞增殖指数(x±s)

3 讨论

hGH用于肿瘤患者术后代谢调理至今存在争论，因为有不少学者认为hGH存在潜在影响肿瘤生长的促有丝分裂效应。本研究结果提示用hGH单独处理两株细胞，细胞周期、PI及DNA抑制率均未发生明显改变。此结果与Harrison等人发现给皮下接种了胰腺癌细胞的Athymic小鼠体内注射hGH的实验相符，15 d后检测发现，hGH体内应用仅提高了血浆IGF-1水平和肝内蛋白合成速率，没有促进肿瘤生长，也未改变细胞周期动力学和肿瘤组织的蛋白合成速率［1］。

大量文献报道，hGH能调节免疫功能，改善患者细胞和体液性的全身宿主防御，尤其是双向调控NK细胞，促进创伤患者的正氮平衡、加速伤口愈合、减少并发症有重要意义。有学者经动物实验证实，hGH和IGF-1能增强TPN应用过程中的免疫反应，促进TPN的蛋白合成作用，改善瘦体组织群，提高宿主的免疫功能，减少感染风险，但并不促进肿瘤生长。有文献报道rhGH用于术后恶性肿瘤患者的代谢调理［2，3］，对促进患者正氮平衡起到了积极的作用。有的学者认为rhGH不会促进肿瘤细胞的增殖分裂，吴力群等［4］研究表明hGH对大鼠移植性肝肿瘤的生长无促进作用，与生长抑素合用可抑制肝肿瘤的生长。Harrison等［1］报道在他们治疗的一组消化道肿瘤患者术后应用rhGH的随访病例中未发现其对肿瘤的复发，转移有促进作用;Jurgen等［5］对75例胃肠道肿瘤患者术后短期应用rhGH发现rhGH不会促进肿瘤的复发。Fiebig等［6］在体外用7种不同的人肿瘤细胞(结肠癌、胃癌、肺癌、乳腺癌、黑色素瘤、卵巢癌和前列腺癌)培养实验中证实rhGH不会促进肿瘤细胞的增殖。

就体外实验的结果分析，MKN45和Colo320细胞都是恶性程度高的细胞株，本研究结果提示rhGH在体外总的趋势是对人胃、结肠癌细胞增殖分裂无明显促进作用。rhGH组与对照组、L-OHP+rhGH组与L-OHP组比较在细胞周期中各期细胞数量和PI均无显著差异(P＞0.05)，表明rhGH对体外培养的胃、结肠癌细胞无促进增殖的作用。在rhGH与LOHP合用与对照组和rhGH组比较，S期及G2～M期的细胞及PI明显减少(P＜0.01;胃癌细胞G2～M期P＞0.05)。为临床胃肠道肿瘤患者术后应用rhGH进行代谢调理提供一定参考。由于本实验未对细胞进行同步化处理，所以不能对胃、结肠癌细胞两株细胞株进行比较。

综上所述，本实验提示rhGH在体外不促进人胃、结肠癌细胞的增殖分裂，与以往文献报道结果相似［7-9］。

［1］Harrison LE，Blumberg D，Berman R，et al.Effect of human growth hormone on human pancreatic carcinoma growth，protein and cell cycle kinetic.J Surg Res，1996，61(2):317-22.

［2］陈嘉勇，张捷，谭晶，等.胃、结癌患者术后生长激素应用的价值评估.中国普外基础与临床杂志，1999，6(6):365-367.

［3］Vara-Thorbeck TR，Ruiz-Requena E，Guerrero JA.Effects of human growth hormone on the catabolic state after surgical trauma.Horm Res，1994，45(6):55-60.

［4］吴力群，杨猛，卢云，等.生长抑素及生长激素瘤内注射治疗大鼠移植性肝肿瘤的研究.中华临床医药杂志，2003，4(6):22-24.

［5］Juergen Tacke，Ulrich Bolder，Armin Herrmann，et al.Long-term risk of gastrointestinal tumor recurrence after postoperative treatment with recombinant human growth hormone.JPEN，2000，24(3):140-144.

［6］Fiebig HH，Dengler W，Hendriks HR.No evidence of tumor growth stimulation in human tumors in vitro following treatment with recombinant human growth hormone.Anticancer Drugs，2000，11(8):659-664.

［7］郭爱平，李苏宜.重组人生长激素在体外对人胃癌细胞作用的研究.东南大学学报:医学版，2007，26(3):206-209.

［8］Jiayong Chen，Daoming Liang，Ping Gan，et al.In vitro effects of recombinant human growth hormone on growth of human gastric cancer cell line BGC823 cells.World Journal of Gastroenterology，2004，10(8);1132-1136.

［9］魏寿江，王崇树，王严庆，等.重组人生长激素对体外人结肠癌COLO-320细胞生长的影响.中国普外基础与临床杂志，2003，10(6):572-575.