疏肝导浊方对脂肪肝家兔的AST、ALT、ALP、NO、SOD 和 MDA 的 影 响*

王 威，江海涛，史 红，刘友刚，王 超，田 维，胡利民

（天津中医药大学，教育部方剂学重点实验室,天津市药理学重点实验室,天津 300193）

近年来，随着人们的生活水平的提高，饮食结构和体力劳动的变化，脂肪肝的发病率逐年上升。预防和治疗脂肪肝已经成为中西医临床和基础研究的重要课题。总结张伯礼教授多年的临床实践经验，疏肝导浊法治疗脂肪肝具有很好的疗效。本实验采用高脂饮食建造高脂血症型脂肪肝动物模型，以疏肝导浊方药进行治疗，观察肝组织转氨酶、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）等含量的变化，从整体动物水平上探讨疏肝导浊方药的抗氧化作用。

1 材料

1.1 动物 健康大耳白家兔60只，体质量（2.3±

0.3 ）kg，雄性，由天津中医药大学实验动物中心代理购进，饲养于天津中医药大学实验动物中心，环境设施符合《中华人民共和国卫生部实验动物环境设施标准》二级标准，单笼饲养，饲喂高脂饲料（除空白对照组外），自由饮水。

1.2 药物 疏肝导浊方药由柴胡、泽泻、荷叶、丹参等中药组成，具有清热化湿、疏肝利胆的功效。干粉出膏率为20%,实验前用蒸馏水配成1.6×103g/L、0.8×103g/L、0.4×103g/L 的溶液。阳性对照药东宝肝泰，实验前用蒸馏水配成36.4 g/L的溶液。

1.3 试剂 转氨酶试剂盒由北控生物科技股份有限公司购入；超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒由北控生物科技股份有限公司购入；丙二醛(MDA)试剂盒由北控生物科技股份有限公司购入；其他药品由天津市化学试剂公司购进。

1.4 仪器 半自动生化仪（荷兰威图公司300型），自动平衡离心机（北京离心机厂LDZ5-2），数显电子恒温水浴（江苏金华市医疗仪器厂），可调微量加样器（Ependaff）。

2 方法

2.1 模型建立及分组 60只大耳白家兔普通饲料适应性喂养7 d，耳缘静脉取血，测定甘油三酯（TG）的含量，根据血清中TG值将家兔随机分为2组：空白对照组10只、高脂高糖造模组50只。空白对照组继续饲以普通饲料，高脂高糖造模组则给予高脂高糖饲料喂养，高脂高糖饲料配方为猪油10%、胆固醇1%、蔗糖15%、74%基础饲料及少量谷类组成。高脂高糖饲料饲养6周后，耳缘静脉取血检测血清TG的含量。根据TG值，将其随机分为5组：模型组、导浊方生药8 g/kg组、导浊方生药4 g/kg组、导浊方生药2 g/kg组、工具对照药物——东宝肝泰组。给药组按分组原则灌胃给药5周，空白对照组和模型对照组给等体积的蒸馏水。

2.2 分组给药 模型成功后，按疏肝导浊方药高剂量组8 g/（kg·d），疏肝导浊方药中剂量组4 g/（kg·d），疏肝导浊方药低剂量组2 g/(kg·d)，东宝肝泰组0.18 k/（kg·d），灌胃给药1次/d。模型组和空白对照组给等体积的蒸馏水，连续5周，自由饮食。彩超监测脂肪肝情况直到实验结束，麻醉取血，剖腹取肝组织测定各项指标。饲养和给药过程中各组均有死亡，结果统计 n＝8。

2.3 观察指标及测定方法 称体质量，25%乌拉坦1 mL/kg腹腔注射麻醉，打开腹腔，立即观察肝脏色泽；腹主动脉取血。3000 r/min离心，取血清检测各项指标。

生化检测:采用试剂盒检测天冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、碱性磷酸酶（ALP）、一氧化氮（NO）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）。

2.4 统计方法 采用SPSS 11.5软件进行统计学处理，数据用均数±标准差（±s）表示，计量资料采用单因素方差分析。

3 结果

3.1 动物表现 空白对照组：兔毛光泽，体态活泼，反应敏捷，食量粪便均正常。高脂造模组：造模开始时，兔毛光泽，体态活泼，反应敏捷，食量粪便均正常。造模3周以后，出现兔毛凌乱，耳朵下垂，食量减少，精神不振，时有稀便。治疗组：高脂造模家兔给予药物治疗后，食量有所增加，粪便逐渐出现正常，但总排便量增加。

3.2 肝脏形态 空白对照组家兔肝脏色泽暗红，形态无明显异常。模型组家兔肝脏包膜紧张，边缘圆钝，色泽橙黄，质软；切面油腻，呈豆腐渣样改变，甚者呈奶黄色，见典型肝脂变。各治疗组家兔肝脏色泽、质地、外观基本介于空白对照组与模型对照组之间。

3.3 血清转氨酶的变化 给药组的AST和ALT与模型组相比并没有显著性差异。而模型组的ALP含量高于空白对照组，模型组与低剂量组相比有显著性差异（P<0.05）。

表1 各组家兔血清转氨酶的变化(±sTab.1 The change of AST、ALT、ALP of each group(±sU/L

表1 各组家兔血清转氨酶的变化(±sTab.1 The change of AST、ALT、ALP of each group(±sU/L

注：与模型组比较，△P<0.05。

组别空白对照组模型组东宝肝泰组疏肝导浊方药组疏肝导浊方药组疏肝导浊方药组剂量g/（kg·d）--0.18842 n888888 AST 65.89±17.3469.70±13.1866.70±20.5169.10±23.2463.40±17.4367.00±22.46 ALT 52.20±21.2560.80±12.5756.70±12.3460.90±14.9353.60±13.8759.50±16.53 ALP 66.20±16.5571.80±17.0356.00±14.4463.40±19.0663.20±19.1050.40±15.03△

3.4 对家兔血清NO、SOD、MDA的影响 模型组与空白对照组相比，高脂饮食并没有引起家兔血清中NO的增加，给药组和模型组之间的NO水平并没有显著差异。而模型组的SOD水平下降（P<0.05），给予方药治疗后，中剂量及低剂量与模型组相比SOD水平都有不同程度的提高（P<0.01）。模型组MDA的含量明显高于空白对照组（P<0.01），高剂量组与模型组比较MDA含量显著降低（P<0.01）。见表2。

表2 各组家兔血清NO、SOD、MDA的变化(±sTab.2 The changer of NO,SOD and MDA of each group(±s

表2 各组家兔血清NO、SOD、MDA的变化(±sTab.2 The changer of NO,SOD and MDA of each group(±s

注：与空白对照组比较，**P<0.01，*P<0.05；与模型组比较，△P<0.05,△△P<0.01。

剂量g/（kg·d）组别空白对照组模型组东宝肝泰组疏肝导浊方药组疏肝导浊方药组疏肝导浊方药组--0.18842 n888888 NO(μmol/L)73.00±21.7280.25±16.8187.50±21.7065.75±6.7878.75±7.0976.75±15.05 SOD(kU/L)208.83±24.46156.15±36.13*184.37±26.12184.37±34.35228.59±46.94△△259.63±53.80△△MDA(mmol/L)1.69±0.909.53±1.81**8.45±1.914.69±0.82△10.30±2.9810.34±1.37

4 讨论

脂肪性肝病(FLD)简称脂肪肝，是由多种疾病和病因引起的肝脏脂肪性改变。轻度的肝细胞脂肪变性在大体上可无明显变化，但当半数以上肝细胞有脂滴蓄积，或者肝内蓄积脂肪含量超过肝湿质量的5%，即形成脂肪肝。脂肪肝依据临床表现可与中医“痰浊”、“湿阻”、“胀满”、“积证”、“胁痛”属范畴。多数医家认为，脂肪肝是由于饮食失节，情志不畅，肝胆疏泄失常，脾失健运不能升清降浊、输布精微，致使痰湿淤阻，浊积于肝而成为脂肪肝。

实验结果显示，疏肝导浊方药低剂量组与模型组比较ALP水平有所降低。碱性磷酸酶（ALP）是细胞膜结合酶，在某些化学物质的诱导下，可使肝脏ALP合成增加。高脂血症时，脂肪酸合成增加，导致肝脏中乙酰CoA积累，继而产生酰基胆碱等，从而诱导ALP合成增加。疏肝导浊方药低剂量组ALP水平降低，可能是因为疏肝导浊方药可以降低血液中游离脂肪酸（FFA），导致肝脏中乙酰CoA积累减少，继而使酰基胆碱产生减少，诱导减弱，ALP合成减少。提示：疏肝导浊方药可以降低脂肪肝患者的ALP水平或许具有修复、保护肝细胞脂膜的作用。实验结果还显示：各给药组、模型组与空白对照组比较AST、ALT水平没有明显变化。提示：疏肝导浊方药和高脂造模饮食对家兔肝功能无损伤。

SOD、MDA含量的高低直接反应体内脂质过氧化的强度和速率，一直作为自由基产生和脂质过氧化损伤程度的重要指标。抗氧化实验结果显示：血清中SOD的活性模型组明显低于空白对照组（P<0.05），这表明脂肪肝疾患使SOD活性降低。而疏肝导浊方药中、低剂量组与模型组相比能显著提高SOD活性。提示：疏肝导浊方药能提高SOD活性，利于清除体内脂质过氧化产物；血清中MDA的含量模型组明显高于空白对照组（P<0.01），表明模型组脂质氧化损伤严重。疏肝导浊方药高剂量与模型组比较能显著降低MDA含量。提示：疏肝导浊方药可抑制家兔肝细胞膜及内膜系统中，多种自由基所致的脂质过氧化损伤。降低MDA的含量可以抑制肝脏胶原纤维的增生[1]。这可能是其抗脂肪肝氧化损伤的机制之一。

NO模型组与空白对照组相比，高脂饮食并没有引起家兔血清中NO的增加，给药组和模型组之间的NO水平并没有显著差异。但各给药组与模型组相比有降低的趋势。

脂肪肝的病变为可逆性病变，在早期诊断和合理治疗下可康复。但是如果不及时治疗，部分脂肪肝患者可能发展为肝纤维化，甚至肝硬化[2]。西药降脂虽有一定效果，但长期服用有不良反应[3]，且停药后血脂容易迅速回升。故迫切需要研发毒副作用小的抗脂肪肝天然药物。本实验研究为研制安全、有效的抗脂肪肝的中药做了一些基础工作。

[1]刘永刚，陈厚昌，蒋毅萍.姜黄素抗肝纤维化的实验研究[J].时珍国医国药，2002，13(5)：273-275.

[2]Farrell GC，I arter CA.Nonalcoholic fatty liver disease：from steatosis to cirrhosis[J].Hepatology，2006，43(Suppl 1)：899-8112.

[3]Portincasa P，Orattagliano I，Palmieri V 0，et a1.Currentpharmacological treatment of nonalcoholic fatty liver[J].Curr Med Chem，2006，13(24)：2889-2900.