SUFU在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

王云锋 满晓华 高军 杜奕奇 龚燕芳 李兆申 金晶 吴红玉

·论著·

SUFU在胰腺癌组织中的表达及其临床意义

王云锋 满晓华 高军 杜奕奇 龚燕芳 李兆申 金晶 吴红玉

目的探讨SUFU蛋白在胰腺癌组织中的表达及其与临床病理特征之间的关系。方法应用免疫组化法检测SUFU蛋白在28例胰腺癌手术切除标本、20例癌旁胰腺组织及4例正常胰腺组织中的表达，分析其与胰腺癌临床病理特征间的关系。结果SUFU蛋白阳性表达于胰腺导管癌细胞的胞质和胞核，阳性表达率为78.6%(22/28)，其中+ 6例，++ 13例，+++ 3例。癌旁胰腺组织及正常胰腺组织中导管、腺泡和胰岛均未见SUFU蛋白表达，与胰腺癌组织比较，相差显著(P<0.05)。胰腺癌组织SUFU蛋白高表达与患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、淋巴转移和肝转移无关，而与肿瘤的临床分期之间呈正相关(P<0.05)。结论SUFU蛋白在胰腺癌组织中高表达，对胰腺癌发病具有一定作用。

胰腺肿瘤； 免疫组织化学； Hedgehog通路； SUFU

胰腺癌是一种恶性程度极高的肿瘤，在美国恶性肿瘤病死原因中居第4位，消化道肿瘤中病死率仅次于结肠癌，美国每年新病例约37 680例，病死约34 290例，平均5年生存率仅5%[1]。Hedgehog通路异常激活与胰腺癌发生、发展密切相关，SUFU(suppressor of fused)是Hedgehog通路核心成员之一。近期文献报道，与果蝇属不同，在哺乳动物中SUFU是Hedgehog通路的主要负性调节因子[2]。本实验检测SUFU在胰腺癌及相应癌旁胰腺组织中的表达，分析其与胰腺癌临床病理特征的关系，探讨其在胰腺癌发病中的作用。

材料与方法

一、标本来源

收集2007年3月至2008年3月在长海医院接受手术治疗的28例胰腺癌患者，其中男21例，女7例，年龄33～82岁，平均59岁。获得胰腺癌组织28例，均经病理证实；获得相应癌旁组织20例，病理检查未见癌细胞。按2002年UICC(国际抗癌联盟)制定的TNM分期，Ⅰ、Ⅱ期10例，Ⅲ、Ⅳ18例。4例正常胰腺组织标本为长海医院消化内科实验室保存。

二、SUFU 蛋白检测

手术切除标本固定、石蜡包埋、连续切片，采用免疫组化EnVision染色法检测SUFU蛋白表达。兔抗SUFU单克隆抗体(Novus Biologicals)1∶300稀释。SUFU定位于细胞膜和细胞质，阳性染色为棕黄色或棕褐色。免疫组化结果判断根据阳性细胞在全部组织细胞中所占比例以及阳性细胞染色强度判定。按阳性细胞数：≤5%为10分,>5%～≤25%为1分，>25%～≤50%为2分，>50%为3分；按细胞显色深浅：无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。将两分值相乘， 0分为-，1～2分为+，3～4分为++，6～9分为+++。

三、统计学处理

采用SPSS13.0软件进行统计分析，采用χ2检测及Fisher精确概率法分析，以P<0.05为差异有统计学差异显著标准。

结 果

一、胰腺癌组织SUFU蛋白表达

SUFU蛋白阳性表达于胰腺导管癌细胞的胞质和胞核(图1)，阳性表达率为78.6%(22/28)，其中+ 6例；++ 13例；+++ 3例。癌旁胰腺组织及正常胰腺组织中导管、腺泡和胰岛均未见SUFU蛋白表达。胰腺癌和癌旁胰腺组织中SUFU蛋白的表达存在显著差异(P<0.05)。

图1 SUFU蛋白在胰腺癌组织(a)、癌旁胰腺组织(b)和正常胰腺组织(c)中的表达(免疫组化 ×100)

二、胰腺癌组织的SUFU表达与临床病理特征的关系

胰腺癌组织SUFU蛋白表达与肿瘤的临床分期呈正相关(P<0.05)，而与患者的年龄、性别、肿瘤部位、肿瘤大小、淋巴转移和远处(肝)转移均无关(表1)。

表1胰腺癌组织SUFU蛋白表达与临床病理特征之间的关系

临床参数例数SUFU表达阳性例数阴性例数阳性率(%)P年龄(岁) ≤601613381.3>0.05 >60129375.0性别 男2117481.0>0.05 女75271.4肿瘤部位 胰头部1814477.8>0.05 体尾部108280.0肿瘤直径 ≤4cm1814477.8>0.05 >4cm108280.0TNM分期 Ⅰ～Ⅱ105550.0<0.05 Ⅲ～Ⅳ1817194.4淋巴结转移 有1311284.6>0.05 无1511473.3远处转移 有550100.0>0.05 无2317673.9

讨 论

Hedgehog信号通路是胚胎发育过程中一个重要的信号转导系统。胚胎形成后，Hedgehog活性消失。若成体组织中其异常激活或成员突变可导致肿瘤的发生。Hedgehog信号通路异常活化可由部分成员的突变或配体依赖性成员高表达所致。目前研究证实，Hedgehog通路异常激活与肺癌、消化道肿瘤和前列腺癌的发生有关。在消化道肿瘤发生中，Hedgehog信号通路主要以配体依赖性成员高表达发挥作用；而成员突变主要参与皮肤、小脑和骨骼肌等处肿瘤的发生[2]。Hedgehog信号通路由Hedgehog配体、两个跨膜蛋白受体Ptch和Smo、SUFU、COS2、下游转录因子GLI蛋白等组成。在哺乳动物中存在3种Hedgehog配体，即Sonic Hedgehog(Shh)、Indian Hedgehog(Ihh)及Desert Hedgehog(Dhh)，均为分泌性蛋白。Ptch和Smo是位于细胞膜上的跨膜蛋白，其中Ptch为Hedgehog的受体，能与三种Hedgehog蛋白(Shh、Ihh和Dhh)结合。当Hedgehog蛋白缺乏时，Ptch抑制Smo的活性，进而抑制下游基因的转录表达。当Hedgehog蛋白与Ptch结合时，对Smo的抑制效应被解除，激活下游的转录调节因子GLI，即可诱导目标基因的表达。SUFU位于胞质或细胞核内，不通过PTCH和Smo而直接作用于GLI，调节Hedgehog活性。Varjosalo等[3]采用RNA干扰技术沉默SUFU后可充分激活GLI介导的Hedgehog信号通路。Thayer等[4]报道，26株胰腺癌细胞系均表达GLI1，但只有部分胰腺癌细胞株对环杷明敏感，还有部分细胞株不敏感，这提示对环杷明不敏感的胰腺癌细胞可能是因Smo下游通路某成员异常表达导致胰腺癌的发生。

关于SUFU调节GLI的机制尚有争议，目前文献报道，其可能通过两种方式调控GLI： (1)SUFU与GLI在细胞质中结合，从而抑制GLI进入细胞核内发挥其转录活性；(2)SUFU在细胞核内与其他蛋白共同作用发挥GLI的辅阻遏物作用。它在不同组织中的作用机制可能不同。Humke等[5]研究显示，SUFU主要功能区域在胞质，在Kif3a协助下调控GLI3，从而调控Hedgehog信号通路，且SUFU-GLI3是Hedgehog通路的主要调控靶点。本实验结果显示，SUFU蛋白在胰腺癌组织细胞的胞质和胞核均阳性表达；而癌旁胰腺组织及正常胰腺组织中导管、腺泡和胰岛均未见SUFU蛋白表达，与Humke等的研究结果一致。本结果还显示，SUFU蛋白表达与胰腺癌患者临床分期有关，与患者的年龄、性别和肿瘤的部位、大小无关，提示其在胰腺癌组织中高表达为恶性表型之一。

[1] Jemal A,Siegel R,Ward E,et al.Cancer Statistics,2008.CA Cancer J Clin,2008.58:71-96.

[2] Cheng SY,Yue S.Role and regulation of human tumor suppressor SUFU in Hedgehog signaling.Adv Cancer Res,2008,101:29-43.

[3] Varjosalo M,Li SP,Taipale J,et al.Divergence of hedgehog signal transduction mechanism between Drosophila and mammals. Dev Cell,2006,10:177-186.

[4] Thayer SP,di Magliano MP,Heiser PW,et al.Hedgehog is an early and late mediator of pancreatic cancer tumorigenesis.Nature, 2003,425:851-856.

[5] Humke EW,Dorn KV,Milenkovic L,et al.The output of Hedgehog signaling is controlled by the dynamic association between Suppressor of Fused and the Gli proteins.Genes Dev,2010,24:670-682.

2009-04-10)

(本文编辑：屠振兴)

ExpressionandsignificanceofSUFUinpancreaticcarcinoma

WANGYun-feng,MANXiao-hua,GAOJun,DUYi-qi,GONGYan-fang,LIZhao-shen,JINJing,WUHong-yu.

DepartmentofGastroenterology,ChanghaiHospital,SecondMilitaryMedicalUniversity,Shanghai200433,China

LIZhao-shen,Email:lizhaoshen111@yahoo.com.cn

ObjectiveTo investigate the expression of SUFU protein in human pancreatic carcinoma tissues and to explore the relationship between the expression of SUFU protein and the clinicopathologic parameters.MethodsThe expression of SUFU protein in 28 samples of pancreatic cancer tissues and 20 adjacent normal pancreatic tissues and 4 normal pancreatic tissues was detected by immunohistochemical method. And the relationship between the expression of SUFU protein and the clinicopathologic parameters were determined.ResultsSUFU protein was positively expressed in cytoplasm and nucleus of pancreatic carcinoma cells, while it was not expressed in the duct, acinar and islet of tumor-adjacent tissues and normal pancreatic tissues, and difference was statistically significant (P<0.05). The high SUFU protein expression was related to the clinical stage (P<0.05), but not the age, gender, tumor location ,tumor size, lymph node metastasis and liver metastasis.ConclusionsSUFU protein was highly expressed in pancreatic cancer, and SUFU may play certain role in the pathogenesis of pancreatic cancer.

Pancreatic neoplasm; Immunohistochemistry; Hedgehog signal pathway; Suppressor of fused

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.06.013

国家科技支撑计划(2006BAI02A12)

200433 上海，第二军医大学长海医院消化内科

李兆申，Email:lizhaoshen111@yahoo.com.cn