复方头孢噻呋对鸡大肠杆菌病的处方优化试验

2010-11-22王金莉

中国兽医杂志 2010年11期

王金莉,李丽

(辽宁医学院畜牧兽医学院,辽宁锦州121001)

鸡大肠杆菌病是由致病性大肠杆菌所致的细菌性传染病。由于其抗原性复杂,血清型多样,给免疫防制带来困难。目前对本病的防治主要以应用抗菌药物为主,但耐药菌株不断出现,导致对该病的防治越来越困难。为了更有效地治疗鸡的大肠杆菌病,合理的联合应用抗菌药物成为解决问题的一条有效途径。头孢噻呋(Ceftiofur)是第一个专门用于动物的第3代头孢类抗生素,其抗菌谱广、抗菌活性强,给药以后吸收迅速,生物利用度高,半衰期长,药效持久。也是用于鸡大肠杆菌病疗效较好的抗菌药物,但由于在兽医临床上的不断应用,产生耐药性的报道不断出现,为了延长头孢噻呋在兽医临床的使用时间,增强药效,降低用药成本,本院动物药学实验室研制了复方头孢噻呋,旨在选择出和头孢噻呋协同作用好的复方并确定最佳联合应用比例,为头孢噻呋对鸡大肠杆菌病的临床用药提供理论依据。

1 试验材料

1.1 原料药头孢噻呋、卡那霉素、庆大霉素、新霉素、大观霉素、安普霉素、丁胺卡那霉素、磺胺脒(SG)、甲氧苄氨嘧啶(TMP)。以上供试药品均由天津市生机生物技术有限公司提供,含量均98%以上。

1.2 菌种 O1、O2、O78型及本地分离株7株,共 10株鸡大肠杆菌菌株,由辽宁凯为生物技术有限公司提供。

2 试验方法

2.1 药液和菌液的配制按常规方法[1]配制营养肉汤培养基和普通琼脂培养基。分别将8种药物配制成1 280μg/mL的原药液,置于4℃冰箱中保存备用,1周内用完。

2.2 药物最小抑菌浓度(MIC)的测定采用试管两倍稀释法[1]做MIC的测定试验,相同过程重复3次,求平均值。接种菌量为9×105CFU/mL,记录每种药物单独使用时的最小抑菌浓度值。

2.3 药物协同指数(FIC)的测定

2.3.1 肉汤稀释棋盘法采用肉汤稀释棋盘法[2]测定协同指数值。根据各药最小抑菌浓度结果确定药物稀释度,一般为8个稀释度,药物最高浓度为其MIC值的8倍,依次按照各药MIC值的 8倍、4倍、2倍、1倍、1/2倍、1/4倍的倍比稀释浓度分别进行联合。两种药物的稀释分别在方阵的纵列和横列进行,即沿横轴稀释的药物,在纵列上各管的药物浓度相同;反之沿纵列稀释的另一药物,其在横轴上各管的药物浓度一致。头孢噻呋分别与其他7种抗菌药物联合,对每个标准菌株O1、O2、O78分别测定,并重复棋盘试验3次。

2.3.2 FIC指数的计算试验结果以部分抑菌浓度作为联合药敏试验的判断依据,按照公式FIC指数 =MICA联/MICA单+MICB联/MICB单计算。其中：MICA联-A药联合使用时的MIC;MICA单-A药单独使用时的 MIC;MICB联-B药联合使用时的MIC;MICB单-B药单独使用时的MIC。

判定标准：FIC＜0.5为协同作用;FIC=0.5～1为相加作用;FIC=1～2为无关作用;FIC＞2为颉颃作用。

2.4 纸片扩散法药敏试验采用药敏纸片琼脂扩散法,判定标准为：抑菌圈直径d≥20 mm为高度敏感;16≤d＜20 mm为中度敏感;10≤d＜16 mm为低度敏感;d＜10 mm为耐药[3]。

3 结果

3.1 药物最小抑菌浓度(MIC)测定结果试验测得 8种药物单独使用对大肠杆菌O1、O2、O78及本地分离株的最小抑菌浓度值,见表1。

表1 抗菌药物单独使用对10株鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度(M IC) (μg/m L)

卡那霉素对大肠杆菌产生了耐药性,呈现混浊,未能测得MIC,不在表中体现。其他8种药物抑菌效果按MIC值排序：头孢噻呋＜庆大霉素＜丁胺卡那霉素＜安普霉素＜新霉素＜大观霉素＜磺胺脒＜TMP。

3.2 药物协同指数(FIC)测定结果试验测得8种药物单用及分别与头孢噻呋联合应用的MIC值,根据公式计算出的FIC值,见表2。

表2 头孢噻呋与其他药物联合使用的协同指数(FIC)

测定结果显示：同头孢噻呋联合应用时,FIC＞2的有新霉素、庆大霉素、安普霉素;FIC=1～2的有大观霉素;FIC=0.5～1的有磺胺脒;FIC＜0.5的有丁胺卡那霉素、TMP。即头孢噻呋与新霉素、庆大霉素、安普霉素联合应用为颉颃作用,头孢噻呋与大观霉素联合应用为无关作用,头孢噻呋与磺胺脒联合应用为相加作用,头孢噻呋与丁胺卡那霉素、TMP联合应用为协同作用,而头孢噻呋与TMP联合应用的协同指数最小,表明头孢噻呋与TMP的协同关系最好。

3.3 纸片扩散法药敏试验结果不同比例的复方头孢噻呋、头孢噻呋及TMP对鸡大肠杆菌的纸片扩散法药敏试验结果比较,见表3。

表3 复方头孢噻呋对鸡大肠杆菌的药敏试验结果 (mm)

通过药敏试验结果表3可见,不同血清型的10株鸡大肠杆菌对药物敏感性差异不显著。鸡大肠杆菌对 4∶1的复方头孢噻呋的体外药物敏感性(23.42 mm)优于其他比例的复方头孢噻呋,差异不显著(P＞0.05)。4∶1的复方头孢噻呋显著优于头孢噻呋单独用药(P＜0.05),极显著优于TMP单独用药(P＜0.01)。

4 讨论

根据药物的最小抑菌浓度(MIC)的测定结果分析,在本试验选择的9种药物中,卡那霉素对大肠杆菌产生了耐药性。因此,卡那霉素已经不具备再与头孢噻呋复配成复方制剂的条件,首先被淘汰。头孢噻呋、大观霉素、新霉素等8种药物单独使用对标准株O1、O2、O78及本地分离的共 10株鸡大肠杆菌的平均MIC值说明：头孢噻呋相对于其他8种药物对大肠杆菌具有较强的抗菌活性。王付民等[4]曾报道,头孢噻呋对临床分离的24株鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度为0.2μg/mL,本试验结果显示,头孢噻呋对鸡大肠杆菌的MIC值为0.65μg/mL,表明头孢噻呋对鸡大肠杆菌抗菌活性有所下降,头孢噻呋需要和其他药物联合应用才能提高疗效。

通过头孢噻呋和7种药物联用的协同指数(FIC)测定结果发现,头孢噻呋与丁胺卡那霉素、TMP联合应用均呈现协同作用,而与TMP的协同指数(0.275)最小,表明头孢噻呋与TMP联合的协同作用优于同丁胺卡那霉素联用。因此,选用头孢噻呋与TMP配伍组成复方头孢噻呋。

从纸片扩散法药敏试验结果看,本试验不同血清型的10株鸡大肠杆菌对同一药物敏感性差异小,抑菌圈直径差异不明显。鸡大肠杆菌对4∶1比例的复方头孢噻呋的药物敏感性优于其他比例的复方头孢噻呋、头孢噻呋(差异显著P＜0.05)及TMP(差异极显著P＜0.01)单独使用,从药物敏感性上说明复方头孢噻呋中头孢噻呋与TMP的最佳配比4∶1。