杜仲叶提取物对女运动员骨组织保健的机理研究

乔媛媛 王晓晨 王曼莹

(玉林师范学院 体育系，广西 玉林 537000)

杜仲叶提取物对女运动员骨组织保健的机理研究

乔媛媛 王晓晨 王曼莹

(玉林师范学院 体育系，广西 玉林 537000)

探讨杜仲提取物对女运动员骨组织保护的作用机制。方法：用未成年雌性大鼠，PMSG处理，48h后处死，取其卵巢，收集颗粒细胞，用MTT法测定颗粒细胞的增殖，用酶联免疫法测定雌激素的含量，观察了杜仲提取物对颗粒细胞增殖和分泌激素的影响。结果：杜仲提取物可增加颗粒细胞的增殖和雌二醇的生成量，呈剂量依赖性关系。结论：杜仲提取物对女运动员骨组织保护的机理与其促进颗粒细胞雌二醇的生成有关。

杜仲提取物；颗粒细胞；雌二醇

1 引言

雌激素对女性生理特征与机体内分泌系统的作用影响已广为人知。绝经前期的女运动员，若体内雌激素水平降低可导致运动性闭经与骨质的过早丢失。绝经期后的妇女，尤其是退役女运动员因体内雌激素缺乏可导致骨内矿物质含量减少与骨基质的等比例丢失，发生骨质疏松病变，称为绝经后骨质疏松症(PMOP)。临床研究表明，雌激素缺乏是导致绝经后妇女骨质疏松的一个危险因素。适宜运动可增加体内雌激素的分泌，但剧烈运动，大强度训练可影响下丘脑-垂体-性腺轴，使体内雌激素水平降低，对骨代谢产生负面影响。因此，如何正确理解雌激素与骨代谢的关系，科学地保护女运动员的骨组织健康，预防职业性骨质疏松的发生已经成为一个重要的医学课题。

杜仲是一种具有补肾壮阳作用的名贵滋补药材，杜仲提取物中的雌激素活性物质可以激活性腺芳香化酶系统，使雌激素生成增加，这一药食两用的天然资源不仅可以防治绝经后骨质疏松，而且可以用于竞技运动员特别是女性运动员的日常护理与调养。本实验采用离体细胞培养的方法，观察了杜仲叶提取物对大鼠颗粒细胞增殖和分泌雌二醇的影响，并对其防治骨质疏松的机理作了初步研究。

2 材料与方法

2.1实验材料

孕马血清促性腺激素(PMSG)(宁波市三生药业有限公司)；定量E2酶联免疫诊断试剂盒(北京北方生物技术研究所)；DMEM培养基(GIBCO公司)；胎牛血清(杭州四季青生物工程材料有限公司)；杜仲叶提取物(本实验室自己提取)。SD大鼠由江西医学院动物实验中心提供。

2.2大鼠颗粒细胞悬液的制备及培养

选用21-25天龄的雌性SD大鼠，于早晨8点皮下注射PMSG100U/只，48h后断头处死动物，取出双侧卵巢可见卵巢表面有多个囊状卵泡，用不锈钢针刺破卵泡，用PBS缓冲液反复冲洗，将含有颗粒细胞的PBS液离心10min(2000转/min)，弃上清，向沉积在离心管底的疏松细胞团中加入DMEM，充分混匀即得颗粒细胞悬液。

用血细胞计数板计数颗粒细胞，用DMEM将其稀释至2×105/ml，按4×104/孔接种到96孔培养板，每孔200μl细胞悬液，放入37℃ 5%CO2培养箱中培养。待细胞贴壁后，进行实验，吸去培养上清，加入不含胎牛血清的培养液及各种浓度的杜仲提取物，每组6孔，继续培养两天后进行操作。

2.3统计学处理

实验所得样品按E2酶联免疫试剂盒要求程序进行操作。数据以均数±标准差(M±SD)表示，以t检验检查其显著性差异。

3 结果

3.1杜仲叶提取物对离体大鼠颗粒细胞增殖的影响

实验结果显示，杜仲提取物直接给药可促进颗粒细胞的增殖，并呈一定的剂量依赖性，其中以10-5中药组作用最为明显(表1)。

表1 杜仲提取物对卵巢颗粒细胞增殖的影响(M±SD)

注：*与对照组比 P<0.05

3.2杜仲叶提取物对离体大鼠颗粒细胞生成E2的影响

实验结果显示，不同浓度的杜仲叶提取物均可以刺激大鼠颗粒细胞E2的生成，以10-5杜仲提取物对大鼠颗粒细胞的E2生成作用最强(表2)。

表2 杜仲提取物对颗粒细胞产生E2的影响 (M±SD)

注：*与对照组比P<0.05

4 讨论

研究表明，大强度运动可影响下丘脑-垂体-性腺轴功能，使雌激素水平下降，而雌激素缺乏时，促骨吸收因子增多，导致骨量快速丢失。因此，雌激素在女运动员的骨组织保护中占有重要地位。药物直接作用于体外培养的卵巢颗粒细胞，受体内其他因素的干扰少，作用直接，便于观察。

4.1动物的选择

21-25日龄的SD雌性幼鼠下丘脑-垂体-卵巢轴功能尚未发育成熟，其颗粒细胞在离体前未受到内源性促性腺激素的刺激，处于未分化状态，受PMSG刺激后，未成熟卵巢可同时产生大量同步发育的颗粒细胞，故本实验中的动物选择可最大限度的排除卵巢外因素的干扰。

4.2杜仲提取物对颗粒细胞增殖的影响

颗粒细胞是卵巢的主要功能细胞，其增殖能力直接影响卵泡的发育，排卵及甾体激素的分泌等。本研究通过MTT法观察杜仲提取物对基础状态下大鼠卵巢颗粒细胞增殖的影响，结果表明，杜仲提取物直接给药可促进颗粒细胞的增殖，且作用与药物剂量有明显相关性。

4.3杜仲提取物颗粒细胞分泌激素的影响

卵泡颗粒细胞是构成卵泡的重要体细胞，其分泌雌、孕激素的功能与卵泡的生长、发育状况密切相关。众多体外研究表明，颗粒细胞在离体情况下可产生雌二醇。故本实验室观察了在杜仲提取物的影响下，离体颗粒细胞分泌雌二醇的情况，结果发现杜仲提取物可增加颗粒细胞雌二醇的分泌量。

4.4杜仲提取物对女运动员骨组织保健的机理探讨

剧烈运动、大强度训练可影响下丘脑-垂体-性腺轴，使体内雌激素水平降低，对骨代谢产生负面影响。雌激素可以增加人成骨细胞OPGmRNA的表达。OPG通过与破骨细胞分化因子结合，间接抑制破骨细胞的生成和活化，从而发挥抗骨质疏松的作用。本实验可以看出，杜仲提取物可以增加卵巢颗粒细胞雌激素的分泌。因此杜仲提取物保护女运动员骨组织健康的机理可能与其增加卵巢颗粒细胞雌激素的分泌有关。

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ResearchonMechanismofAbstractivePartsofDuzhongLeavesforBoneHealthofFemaleAthletes

Qiao Yuanyuan，Wang Xiaochen，Wang Manying

(P.E.Department，Yulin Normal University，Yulin，537000，Guangxi，China)

To examine the effect of Duzhong leaves on the estrogen production by cultured rat granulose cells in vito.Methods: Immature female SD rats were treated with PMSG for 48h and were sacrificed their ovaries were taken out and granular cells were collected,with Duzhong leaves.The production of estradiol was determined by ELISA.Results: Abstractive parts of Duzhong leaves increased estradiol production and also decreased the progesterone peoduction.Conclusion: we could conclude from the date that the abstractive parts of Duzhong leaves stimulated production of rat ovarian granular cells.

abstractive parts of Duzhong leaves;ovarian granular cells;estradio

2010-03-10；

2010-05-08

国家自然科学基金资助项目(30460160)。

乔媛媛(1980-)，女，山西太谷人，硕士，研究方向：运动生化与营养。

G804.7

A

1672-1365(2010)04-0060-02