GC测定金玄痔科熏洗散超临界萃取物中胡薄荷酮的含量

李亚平，王辉，周璐，於小波，刘焱文

(湖北中医学院，湖北 武汉 430061)

*刘焱文，E-mail：ywliu2008@163.com

GC测定金玄痔科熏洗散超临界萃取物中胡薄荷酮的含量

李亚平，王辉，周璐，於小波，刘焱文*

(湖北中医学院，湖北 武汉430061)

目的建立气相色谱法测定金玄痔科熏洗散超临界萃取物中胡薄荷酮含量的方法，为完善该中药制剂的质量标准提供参考依据。方法采用ZB-5(30m×0.25mm，0.25μm)石英毛细管柱，以萘为内标，FID检测器，程序升温。结果胡薄荷酮在0.0370～0.6667mg·mL-1线性关系良好，r=0.9999；平均回收率为100.64%，RSD=2.36%(n=6)。结论该方法简便、灵敏、准确，从而为金玄痔科熏洗散中药品种提供了一种可靠性强的含量分析方法。

金玄痔科熏洗散；胡薄荷酮；超临界流体萃取；气相色谱法

金玄痔科熏洗散为武汉马应龙药业集团股份有限公司生产的中药制剂，具有消肿止痛、祛风燥湿的功效，用于痔疮术后、炎性外痔所致的肛门肿胀、疼痛等症[1,2]，临床疗效显著。金玄痔科熏洗散由玄明粉、枯矾、金银花、荆芥及马齿苋5味中药组成，其中金银花、荆芥和马齿苋3味植物药含有挥发油类成分。本项研究按处方配伍比例，采用超临界CO2萃取技术，对3味植物药中挥发油类成分的提取工艺进行了研究。药理实验表明：金玄痔科熏洗散中植物药的超临界CO2萃取物具有良好的抗炎和镇痛作用[3]。胡薄荷酮为金玄痔科熏洗散方中荆芥的主要有效成分[4]，故本试验选择胡薄荷酮作为含量检测指标，建立了气相色谱法测定[5]金玄痔科熏洗散超临界萃取物中有效成分胡薄荷酮含量的方法。该方法简便、准确、可靠性强，从而为进一步完善金玄痔科熏洗散的质量控制标准提供了参考依据。

1 仪器与试药

1.1仪器

HA-221-40-11-C型超临界CO2萃取装置(江苏南通华安公司)；SHIMADZUGC-14C气相色谱仪(N2000色谱工作站，浙江大学智达信息工程有限公司)；BP-211D型十万分之一分析天平(德国Satorius)。

1.2试药

胡薄荷酮(中国药品生物制品检定所，批号111706-200602)，萘(分析纯，天津市福晨化学试剂厂)，其他试剂均为分析纯。金银花、荆芥、马齿苋药材均由武汉马应龙药业集团股份有限公司提供，经湖北中医学院鉴定教研室鉴定，分别为金银花LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾，荆芥SchizonepetatenuifoliaBriq.的干燥梗，马齿苋PortulacaoleraceaL.的干燥地上部分。

金玄痔科熏洗散超临界萃取物的制备：取金银花、荆芥、马齿苋，按金玄痔科熏洗散处方比例3∶4∶3混合均匀，计200g，粉碎，过40目筛，装入1L萃取釜进行超临界萃取。萃取温度45℃，压力25MPa，萃取1.5h。萃取物经除去水分后称定质量，作为超临界CO2萃取物样品。

2 方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱为毛细管柱ZB-5(30m×0.25mm,0.25μm)，固定液：5%-Phenyl-95%-Dimethylpolysiloxane,载气为氮气，进样量为1μL。程序升温：起始温度50℃，以8℃·min-1升至210℃，保持5min，再以20℃·min-1升至280℃。进样口温度290℃，检测器温度310℃。

2.2检测溶液的制备

2.2.1内标溶液的制备 取萘适量，精密称定，用乙醚配制成2mg·mL-1的溶液作为内标溶液。

2.2.2对照品储备液的制备 取胡薄荷酮对照品适量，精密称定，用乙醚制成0.7408mg·mL-1的溶液，作为对照品储备液。

2.2.3供试品溶液的制备 取超临界萃取样品0.1g，置10mL量瓶中，加1mL内标溶液，用乙醚溶解并定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.3线性关系

精密吸取对照品储备液0.5,1,1.5,2,4,9mL置10mL容量瓶中，各加入1mL内标溶液，乙醚定容至刻度。分别精密吸取1μL进样，以对照品浓度为横坐标，对照品峰面积与内标峰面积之比为纵坐标进行线性回归，得回归方程Y=2.5641X-0.0071，r=0.9999，表明胡薄荷酮在0.0370～0.6667mg·mL-1线性关系良好。

2.4精密度试验

精密吸取同一含内标物的供试品溶液1μL，重复进样6次，测得胡薄荷酮与内标物峰面积比值的RSD=0.59%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.5稳定性试验

取同一含内标物的供试品溶液，放置0,2，4，6，8，24h，精密吸取1μL，注入气相色谱仪中，测得胡薄荷酮与内标物峰面积比值的RSD=1.04%(n=6)，表明本品在24h内稳定性良好。

2.6重现性试验

取同一批超临界萃取物6份，按2.2.3项下方法制备供试品溶液，取供试品溶液1μL注入气相色谱仪，按照上述色谱条件试验，测定萃取物中胡薄荷酮的含量，结果萃取物中胡薄荷酮含量的RSD=1.92%(n=6),表明本方法重现性良好。

2.7回收率试验

采用加样回收法，分别精密称取已知含量的超临界萃取样品6份，置于10mL量瓶中，精密加入胡薄荷酮对照品适量，精密加入内标物溶液1mL,加乙醚至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜过滤。精密吸取1μL注入气相色谱仪中测定，结果见表1。

表1 胡薄荷酮加样回收率试验

2.8样品的测定

取3批金银花、荆芥、马齿苋药材，按上述条件提取得到3份超临界萃取物，按2.3项下方法分别制备供试品溶液，取供试品溶液1μL注入气相色谱仪，按照上述色谱条件试验，测定萃取物中胡薄荷酮的含量,结果见表2。供试品溶液及对照品溶液GC图见图1～3。

表2 萃取物中胡薄荷酮的含量测定 /mg·g-1

3 讨论

柱温是气相色谱分离的重要参数，在色谱条件的摸索过程中，尽可能使样品中各种成分不在色谱柱中残留和缩短分析时间。研究结果表明，起始温度50℃，以8℃·min-1程序升温至210℃，保持5min，再以20℃·min-1升至280℃，分离效果较好。

[1] 潘经媛，李继洪，邱银生,等.痔痛安熏洗剂的药效学研究[J].时珍国医国药，2006,17(7)：1163-1165.

[2] 李国栋，贾菲.金玄痔疮熏洗剂的药效学研究[J].中国临床医生,2007,35(11)：46-48.

[3] 文莉，章文颖，张晟,等.金玄痔疮熏洗散的抗炎镇痛活性部位研究[G].武汉:现代化中药制剂发展与中药药理学研究交流会论文集,2009:160-163.

[4] 邱琴,凌建亚,丁玉萍,等.超临界CO2流体萃取法与水蒸气蒸馏法提取荆芥穗挥发油化学成分的研究[J].色谱,2005,23(6):646-650.

[5] 唐杨，颜挺，晁若冰.GC测定荆芥及荆芥油中的薄荷酮和胡薄荷酮[J].华西药学杂志,2008,23(1):102-104.

DeterminationofPulegoneinSupercriticalFluidExtracsofJinXuanZhiKeXunXiSanbyGC

Li Yaping , Wang Hui , Zhou Lu ,Yu Xiaobo, Liu Yanwen

(HubeiCollegeofTraditionalChineseMedicine,WuhanHuBei430061，China)

Objective: To establish a method for determination of pulegone in supercritical fluid extracts of JinXuanZhiKeXunXi San by GC, and it would provide a reference for improving the quality standards of the Traditional Chinese Medicine.MethodsAn ZB-5(30m×0.25mm,0.25μm) quartz capillary column was used with naphthalene as internal standard , and the detector was FID with the processing of programmed temperature.ResultsThere was a good linear relationship in the concentration range of0.0370～0.6667mg·mL-1,r=0.9999; The mean recovery of the pulegone was100.64%, RSD=2.36%(n=6).ConclusionThis method was simple, sensitive, accurate, which provided a reliable method of content of pulegone for JinXuanZhiKeXunXi San.

JinXuanZhiKe XunXi San; Pulegone; supercritieal fluid extraction; GC

2010-01-12)