HPLC法测定麻黄中盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱的含量

2010-10-31广西桂林食品药品检验所541002阳志云饶伟文

首都食品与医药 2010年4期

广西桂林食品药品检验所（541002）阳志云饶伟文

《中国药典》2005年版一部收载的麻黄项下的含量测定中仅控制了麻黄碱[1]，而已有文献报道的测定方法存在着样品提取步骤多、耗时长、溶剂毒性大、流动相配制繁琐等问题，笔者在现有方法的基础上，经系统研究，优化了供试液制备方法、流动相系统等，使本法既简便快速，又能同时测定麻黄中麻黄碱、伪麻黄碱两种成分的含量，效果满意。

1 仪器与试药

Agilent 1100高效液相色谱仪（美国Agilent公司），BUT2030-40-06超声波清洗器（必能信超声上海有限公司），GZX-DH-BS电热恒温干燥箱（上海跃进医疗器械厂）， GR-202电子分析天平（日本A N D 公司）。盐酸麻黄碱对照品（ephedrine hydrochloride）（批号171241-200506）盐酸伪麻黄碱对照品（pseudoephedrine hydrochloride）（批号171237-200505）均购自中国药品生物制品检定所；麻黄药材产自甘肃，经笔者鉴定为草麻黄Ephedra sinica Stapf的干燥全草；乙腈、磷酸、三乙胺均为色谱纯，水为纯化水，其余试剂均为分析纯。

2 HPLC测定方法的建立与验证

2.1 供试液制备方法的优选

2.1.1 提取溶剂的选择比较了①甲醇、②50%甲醇、③95%乙醇、④20%乙醇、⑤1mol.L-1盐酸-20%乙醇（1：10）、⑥1mol.L-1盐酸、⑦本文流动相等7种溶剂，结果用⑤、⑥、⑦号溶剂提取的供试液的色谱峰峰形好，杂质峰少，其中⑤的提取率最高，故选其作为提取溶剂。

2.1.2 提取方法的选择在取样量相同的前提下，以测得样品的峰面积为指标，比较了索氏提取、回流、超声等提取方法的提取效率，结果回流提取效果最差，索氏提取和超声提取效果相当，而超声法提取更简便，故选之。见附表1。

2.1.3提取时间的选择用超声法提取，仍以峰面积为指标，比较了3种提取时间的提取率，结果表明超声处理30分钟以上，已基本提取完全，故本实验采用超声处理30分钟。见附表2。

2.2 流动相的选择比较了流动相：①乙腈-0.2%磷酸水溶液（4：96）[2]；②乙腈-0.02mol.L-1磷酸二氢钾溶液（含0.2%三乙胺，磷酸调pH值2.7）（2：98）[3]；③乙腈-0.1%磷酸（9：87）；④乙腈-0.2%磷酸-三乙胺（4：96：0.2），结果显示采用流动相不仅基线稳定，且能使各色谱峰达到良好的分离，120min的图谱显示55min后再没有其他特征峰出现，故选为本实验流动相。

2.3 系统适应性试验色谱柱：Diamonsil-C18﹙250mm×4.6mm，5.0μm﹚；流动相：乙腈－0.2%磷酸－三乙胺（4：96：0.2）；流速：1ml.min-1；柱温：30℃；检测波长：207nm；进样量:20μl。在此色谱条件下，盐酸麻黄碱及盐酸伪麻黄碱可达到良好的分离。理论板数大于6000。

2.4 拟定的测定法

2.4.1 对照品溶液的制备精密称取盐酸麻黄碱对照品10mg及盐酸伪麻黄碱对照品10mg置同一100ml量瓶中，以1mol. L-1盐酸-20%乙醇（1：10）为溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2ml至25ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀。

2.4.2 供试品溶液的制备取麻黄细粉约0.2g，置具塞锥形瓶中，精密加入上述溶剂25ml，超声处理（220v， 50Hz）30分钟，用45μm微孔滤膜滤过，即得。

2.4.3 测定法分别精密吸取以上两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，依法测定。

2.5 方法学考察

2.5.1 线性关系考察取盐酸麻黄碱对照品溶液（104.3μg.ml-1）、盐酸伪麻黄碱对照品溶液（101.1μg.ml-1），分别进样1、2、3、4、5、8、10、15、20、30、40、50μl，记录色谱图，以峰面积对进样量进行回归，得到盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱回归方程分别为：y=0.0005x-0.0008， Y=0.0004x+0.0091；质量浓度线性范围分别为104.3～521.5μg.ml-1﹙r=1，n=12﹚、101.1～505.5μg.ml-1﹙r=1，n=12﹚。