注射用哌拉西林钠中高分子聚合物的测定

江苏省泰州药品检验所（225500） 屈蓉

注射用哌拉西林钠是半合成青霉素类抗生素，过敏反应包括荨麻疹等各类皮疹、白细胞减少、间质性肾炎、哮喘发作和血清病型反应，严重者偶见如过敏性休克。大量实验和研究已证实，β-内酰胺类抗生素所致的速发型过敏反应并非由药物本身所致，而是与药物中存在的高分子聚合物有关[1]。因此，在生产和贮存过程中应严格控制高分子聚合物的含量，以保证该类产品的质量以及临床用药安全。本品已为《中国药典》2010年版收载品种，但未收载高分子聚合物测定项。本文参考相关文献[2]，利用分子排阻色谱法，建立了注射用哌拉西林钠中高分子聚合物的测定方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Amersham Biosciences AKTA prime 抗生素高分子杂质仪，Primeview Evaluation 色谱软件；METTLER AG135 电子天平。

1.2 药品和试剂 磷酸二氢钠（分析纯），磷酸氢二钠（分析纯），注射用哌拉西林钠（A厂批号：8100231BI、0010202BH，B厂批号：09102701），哌拉西林钠对照品（中检所 批号130419-200103 含量：90.5%）。

附表1 系统试验数据

附表2 对照溶液的浓度及峰面积

2 方法与结果

2.1 色谱条件和系统适用性 色谱柱：葡聚糖凝胶 Pharmadex G10柱（16mm×37cm），流动相A： pH值为7的0.025mol/L磷酸盐缓冲液[0.025mol/L磷酸氢二钠溶液-0.025mol/L磷酸二氢钠溶液（61：39）]，流动相B为超纯水。流速：1.0ml，检测波长：254nm，进样量200µl。分别以流动相A、B为流动相，取0.1mg/ml蓝色葡聚糖2000溶液200µl注入液相色谱仪，理论塔板数按蓝色葡聚糖2000峰计算应不低于700，拖尾因子小于2.0。在两种流动相系统中，蓝色葡聚糖2000峰保留时间的比值为0.93～1.07，对照品溶液主峰与和供试品溶液中聚合物与相应色谱系统中，蓝色葡聚糖2000的保留时间的比值均应在0.93～1.07。另以流动相B为流动相，精密量取对照液200µl，连续进样5次，峰面积的相对标准偏差应不得大于5.0% （结果见附表1）。

2.2 实验结果

2.2.1 对照溶液的线性关系 精密称取哌拉西林钠对照品20.36mg，置100ml量瓶中，用少量甲醇溶解后，加纯水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。再分别精密量取1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml置于10ml量瓶中，用纯水稀释至刻度，摇匀。将此6种溶液分别重复进样2次，每次进样200µl，记录色谱图，计算2次平均峰面积对浓度的一元回归议程。结果表明哌拉西林在浓度18～110µg·ml-1的范围内线性良好。以哌拉西林对照溶液峰面积为纵坐标，浓度（µg·ml-1）为横坐标，求得回归方程：Y=0.4228X-0.2778，相关系数为0.9993。（结果见附表2）

2.2.2 对照溶液峰的重复性 取2.2.1项下55.2774µg/ml对照溶液，以流动相B为流动相，重复进样5次，记录色谱图，峰面积分别为22.0880、22.7169、23.0411、22.7647、22.5272，计算相对标准差（RSD）为1.6%。

2.2.3 高分子聚合物峰的线性范围 取同一批样品（批号：8100231BI），分别称取50.08mg、99.60mg、199.52mg、402.92mg、599.24mg置10ml量瓶中，用少量甲醇溶解后，加水稀释至刻度，制成供试液，立即进样，聚合物的峰面积分别为3.5600、7.0488、16.3512、34.0616、49.4497。以注射用哌拉西林钠的浓度（mg·ml-1）为横坐标，以聚合物的峰面积为纵坐标。求得回归方程为：Y=0.8464X-0.7814，相关系数为0.9996。结果供试液浓度在5～60 mg·ml-1范围内对聚合物的峰面积呈良好线性关系。

2.2.4 聚合物峰的重复性 取同一批样品（批号：8100231BI）约0.2g 5份，精密称定，置10ml的量瓶中，用少量甲醇溶解后，加水稀释至刻度，分别进样，聚合物的峰面积分别为16.3512、15.7606、16.9819、16.6477、15.9660，计算相对标准差（RSD） 为3.0%。

2.2.5 以信噪比10：1为指标，测得定量限为2×10-3mg·ml-1。

2.2.6 样品测定 分别取三批不同批号的样品，精密称取约0.2g，置于10ml量瓶中，用少量甲醇溶解后，加水稀释至刻度，摇匀，立即精密量取200µl进样，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图，测得8100231BI、0010202BH和 09102701 的聚合物含量分别为0.22%、0.19%、0.12%。

3 讨论

3.1 流动相A 的磷酸盐浓度 实验中分别采用0.01mol·L-1、0.025mol·L-1、0.05mol·L-1、0.1mol·L-1pH7.0的磷酸盐缓冲液为流动相进行实验，结果表明，在0.025 mol·L-1磷酸盐缓冲液中分离度最大，且聚合物的峰形较对称。故选用0.025 mol·L-1的磷酸盐缓冲液作为流动相。

3 .2 流速的选择 实验中分别采用0.8 ml·min-1、1.0 ml·min-1、1.5 ml·min-1流速，记录色谱图。结果表明，0.8ml·min-1主峰流出时间过长，1.5 ml·min-1其分离度不好，选用1.0ml·min-1测定时，主峰分离度较好，且出峰时间适宜，故选用流速为1.0ml·min-1。

3.3 流动相A 的pH 值 分别以pH 8.0，pH7.0，pH6.0的0.025 mol·L-1磷酸盐缓冲液为流动相，进行实验。结果表明，在pH6.0和pH8.0的缓冲液中，聚合物的分离效果不理想，在pH7.0的缓冲液中分离情况较好，故选用pH为7.0的0.025 mol·L-1磷酸盐缓冲液作为流动相A。

3.4 为保证检测结果的准确性，供试品溶液在制备完成后应立即进样。