不同产地桃叶鸦葱多糖的含量测定

杨 辉,李秀荣

(1.河北北方学院药学系,河北张家口 075000;2.北京石景山医院药剂科,北京 100043)

不同产地桃叶鸦葱多糖的含量测定

杨 辉1,李秀荣2

(1.河北北方学院药学系,河北张家口 075000;2.北京石景山医院药剂科,北京 100043)

采用水提醇析的方法提取桃叶鸦葱中多糖,用苯酚 -硫酸法测定多糖的含量.结果表明:不同产地桃叶鸦葱多糖的含量有一定的差异,多糖含量范围在 12.75% ～18.69%之间.

桃叶鸦葱;多糖;含量测定;苯酚 -硫酸法;分光光度法

0 前言

桃叶鸦葱是菊科植物桃叶鸦葱 (Scorzonera sinensisLipsch)的干燥全草,广泛分布于河北、内蒙古、山东等地.民间有蜥蜴喂食烟袋油 (主要成分为烟碱)后,用桃叶鸦葱的乳汁可瞬间解毒的报道.近来证实鸦葱属植物有保肝[1]及抗肿瘤[2]的作用.文献报道其化学成分主要为苯丙素、木脂素及其苷、倍半萜及其苷、三萜及其苷和黄酮类化合物[3-6].作者在前期研究发现,桃叶鸦葱中含有大量多糖类成分.

植物多糖具有多种生物活性,能促进 T细胞、B细胞、NK细胞、M细胞等免疫细胞的功能,并能促进白介素、干扰素、肿瘤坏死因子等细胞因子的产生[7],是理想的免疫增强剂.植物多糖的含量可以在很大程度上体现该药材免疫作用的强弱.目前有关桃叶鸦葱多糖的研究尚未见报道.作者采用水提醇析的方法提取桃叶鸦葱中多糖,采用苯酚-浓硫酸法[8]对不同产地的桃叶鸦葱进行多糖的含量测定,为桃叶鸦葱的开发应用及其药理作用的进一步研究提供了理论依据.

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

桃叶鸦葱分别采自河北赤城、辽宁建平、内蒙古商都、山东陵县.

葡萄糖对照品:中国药品生物制品检定所;其他试剂均为国产分析纯.

1.2 仪器与设备

UV—2100紫外可见分光光度计:北京莱伯泰科仪器有限公司;TG—322A微量分析天平:上海天平仪器厂;RE—52AA旋转蒸发仪:上海亚荣仪器厂.

1.3 方法

1.3.1 桃叶鸦葱多糖的提取与精制

称取不同产地桃叶鸦葱粉末各 60 g,经 95%乙醇浸提 3次,药渣置室温干燥后置索氏提取器中,加水 600 mL提取,虹吸 3次,提取液减压浓缩至约 200 mL.分别加入 4倍体积的无水乙醇,搅匀,冰箱中静置过夜,抽滤得粗多糖.将粗多糖溶于水,Sevage法脱蛋白[9],加 1%活性炭脱色,抽滤,滤液加入 4倍体积的无水乙醇,搅匀,静置过夜,抽滤,所得沉淀用无水乙醇、丙酮、乙醚数次洗涤,置 60℃真空干燥箱中干燥,即得多糖精制品.

1.3.2 标准曲线的制备

精确称取 105℃干燥至恒重的葡萄糖 100 mg,置 100 mL的容量瓶中,加水溶解定容,摇匀,精确吸取葡萄糖对照品溶液适量,分别加水稀释制成 0.03 mg/mL、0.04 mg/mL、0.05 mg/mL、0.06 mg/mL、0.07 mg/mL、0.08 mg/mL的溶液 ,摇匀.分别精确吸取上述不同浓度溶液 1.0 mL,置锥形瓶中,均加 10%苯酚溶液 1 mL,摇匀,迅速加入浓硫酸 5.0 mL,立即摇匀,室温放置 30 min,平行空白,在 490 nm波长处测定吸光度,以吸光度 (A)和浓度 (C)进行线性回归,得回归方程:A=9.957 1C+0.069 1,r=0.999 2.

1.3.3 多糖换算因子的测定

精确称取干燥至恒质量的精制多糖 6 mg,置于 100 mL容量瓶中,加蒸馏水定容至刻度,摇匀.精确量取 1.00 mL,照标准曲线的制备方法操作,测定吸光度值,根据线性回归方程求出质量浓度,再代入下式计算换算因子,求得 f=1.320,(n=6).

f=W/(C×D),

式中:W为多糖质量;C为多糖质量浓度;D为多糖稀释因数.

1.3.4 精密度试验

精确称取桃叶鸦葱多糖样品 6.0 mg,置 100 mL容量瓶中,加水溶解定容,摇匀,按 1.3.2操作,平行 5份,测定吸光度 A,RSD=0.07%.

1.3.5 稳定性试验

精确称取桃叶鸦葱多糖样品 6.0 mg,置 100 mL容量瓶中,加水溶解定容,摇匀,按 1.3.2操作 ,分别于 20、40、60、80、100、120、140、160 min测定吸光度,RSD=0.28%.

1.3.6 重现性试验

取同一批药材粉末 5份,分别按上述方法制备供试液,按 1.3.2操作并测定吸光度 A,RSD=0.24%.

1.3.7 回收率试验

精确称取已知浓度的桃叶鸦葱多糖样品 5份各 6.0 mg,加水溶解后,定容至 100 mL容量瓶中,摇匀,精确吸取 1 mL,分别加入葡萄糖标准品0.2 mg,按 1.3.2操作,测定吸光度,得平均加样回收率为 101.7%,RSD=0.61%.

1.3.8 样品多糖的含量分析

取各供试品溶液,按 1.3.2方法操作,测定吸收值,从回归方程中求出供试液中葡萄糖的含量,按下式计算样品中多糖含量:多糖含量 (%)=C×D ×F×100/W.

2 结果与讨论

在桃叶鸦葱多糖的含量测定中,因较难得到相应多糖对照品,采用葡萄糖代替对照品,测定样品中多糖的相对含量.作者以比色法测定样品中的单糖,通过单糖和多糖的换算因子计算药材中多糖,结果见表1.

从表1可知,不同产地桃叶鸦葱多糖含量有一定的差异,其中内蒙古产的桃叶鸦葱多糖含量最高,山东产的桃叶鸦葱多糖含量最低.可能与所处生长环境纬度及气候有关.

表1 不同产地桃叶鸦葱多糖的含量 %

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DETERM I NATI ON OF POLYSACCHAR I DES OFSCORZONERA SINENSISOF D IFFERENT PLACES

YANG Hui1,L IXiu-rong2
(1.Phar m acy Departm ent,Hebei N orth University,Zhangjiakou075000,China;2.Phar m acy Departm ent of Shijingshan Hospital,B eijing100043,China)

The article extracted polysaccharides fromScorzonera sinensisof different places by water extraction and alcohol precipitation,and determined the content of the polysaccharides by phenol-sulphuric acid method.The results showed that theScorzonera sinensisof differentplaces had different contentsof polysaccharides,and the content of polysaccharides ranged from 12.75%to 18.69%.

Scorzonera sinensis;polysaccharide;content determination;phenol-sulfuric acid method;spectrophotometry

TS201.2

B

1673-2383(2010)05-0059-03

2010-07-22

杨辉 (1972-),男,河北赤城人,硕士,讲师,主要从事药物化学教学与科研.