喙尾琵琶甲抗菌活性的研究

施贵荣，庄孝龙，孙会仙，陈 艾

（大理学院药学院，云南大理 671000）

喙尾琵琶甲抗菌活性的研究

施贵荣，庄孝龙，孙会仙，陈 艾

（大理学院药学院，云南大理 671000）

目的：观察喙尾琵琶甲乙醇提取物对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的体外抑菌活性。方法：采用试管稀释法测定喙尾琵琶甲乙醇提取物对5株临床分离的MRSA菌株的最低抑菌浓度（MIC）和最低杀菌浓度（MBC），初步判断其抑菌效果。结果：喙尾琵琶甲乙醇提取物对5株MRSA的MIC值为0.98~1.95mg/mL，MBC值为3.9~7.8mg/mL。结论：喙尾琵琶甲乙醇提取物具有良好的体外抑菌活性。

喙尾琵琶甲；耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；抗菌作用；最小抑菌浓度

近年来由于抗生素滥用导致大量药物相关的不良反应发生，产生药源性疾病，同时还导致细菌产生耐药性和耐药菌感染流行的严重后果，使临床治疗更为困难。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起化脓性疾病的重要病原菌，目前已经成为一些大型综合医院最常见的医院感染菌之一，并且表现为异质和多重耐药性〔1〕，给临床治疗带来极大的困难。

喙尾琵琶甲（Blaps rynchopetera Fairmaire）属鞘翅目拟步甲科琵琶甲属，是云南少数民族地区长期使用的一种药用昆虫，具有抗菌、消炎、解毒、调节机体免疫功能等作用，主要用于治疗发热、咳嗽、胃炎、疔疮、肿瘤等病症〔2〕。李蕾、罗氘芸、刘勇等〔3-5〕对喙尾琵琶甲进行了抗菌活性成分研究，但尚未见对临床分离耐药菌株的研究报道。本课题组就喙尾琵琶甲乙醇提取物对临床分离的MRSA进行初步的体外抑菌实验，为耐药菌株的治疗以及喙尾琵琶甲的应用提供新的实验依据。

1 材料与方法

1.1 药材 样品采自大理州凤仪镇，由大理学院生命科学与化学学院毛本勇教授鉴定为喙尾琵琶甲。

1.2 供试菌株 5株临床分离的MRSA来自大理州医院住院病人和门诊病人。根据菌落形态、革兰染色特点和胶乳凝集试验，经VITEK-32全自动微生物分析仪GPI鉴定卡（法国生物梅里埃公司生产）作菌株鉴定。

质控菌株金黄色葡萄球菌ATCC25923由大理学院基础医学院病原微生物教研室提供。

1.3 培养基 MH琼脂（杭州天和微生物试剂有限公司，批号：090817），MH肉汤（杭州天和微生物试剂有限公司，批号：090526）。

1.4 实验仪器 SW-CJ-2FD型双人单面净化工作台（苏州净化设备有限公司），隔水式恒温培养箱（上海一恒科技有限公司），YXQ-LS-50SII型立式压力蒸汽灭菌器（上海博讯实业有限公司医疗设备厂），FD-1C-80冷冻干燥机（北京博医康实验仪器有限公司），R-210旋转蒸发仪（瑞士步祺）。

1.5 方法

1.5.1 样品的制备 取喙尾琵琶甲粗粉，加乙醇冷浸提取4次，每次24 h。合并乙醇提取液，浓缩得乙醇提取浸膏。浸膏样品用水溶解，经冷冻干燥得冻干粉，低温保存备用。

1.5.2 供试菌株的活化 将所有供试菌株分别接种于MH琼脂平板上，置37℃恒温培养箱培养24 h活化，待用。

1.5.3 菌液制备 挑取琼脂平板上形态相同的菌落，用灭菌生理盐水校正菌液浓度，使其相当于0.5麦氏比浊标准，再用MH液体培养基稀释后备用。稀释后的菌液在15min内接种。

1.5.4 最低抑菌浓度（MIC）测定 取无菌小试管15支作为一组，共6组。其中，第13、14、15管分别为“原液对照管”、“肉汤对照管”、“测试菌生长对照管”。每支试管分别加入MH肉汤2m L。配制喙尾琵琶甲乙醇提取物原液浓度为250mg/mL，用吸管吸取药液2 m L放入第1管内，混匀后吸取2 m L放入第2管，依此法逐管进行稀释至第12管。除第13、14管外，每支试管加入菌液0.1 mL，置于37℃恒温培养箱内，培养24 h后观察结果。在对照管符合要求的情况下，凡无肉眼可见的细菌生长的药物最低浓度即为药物对该测试菌的MIC〔6-7〕。

1.5.5 最低杀菌浓度（MBC）测定 分别从各肉眼观察无菌生长的试管中取0.02 mL于相应培养基的琼脂平板上作次代培养，经37℃培养过夜，观察有无细菌生长。平板上计数少于5个菌落作为该药物对该测试菌的MBC〔8〕。

实验中应用金黄色葡萄球菌ATCC25923作为质控菌株。

2 结果

喙尾琵琶甲乙醇提取物对各供试菌的作用结果见表1和表2。

表1 喙尾琵琶甲乙醇提取物对MRSA的MIC（mg/mL）

表2 喙尾琵琶甲乙醇提取物对MRSA的MBC（mg/mL）

由表1和表2结果显示，喙尾琵琶甲乙醇提取物对5株MRSA和ATCC25923的MIC值分别为0.98~1.95 mg/mL、0.98 mg/mL；MBC值分别为3.9~7.8 mg/mL、3.9mg/mL。

3 讨论

本实验首先对收集的菌株进行鉴定，采用液体稀释法，参照NCCLS/CLIS2006标准判断，苯唑西林的MIC值大于或等于4μg/mL可定义为MRSA菌株，本实验中5株临床分离株的苯唑西林MIC均大于4μg/mL，而用PBP2胶乳凝集试剂盒检测5株菌所产的PBP2蛋白〔9〕，结果均呈阳性，进一步证实了5株菌株均为MRSA。

抗菌实验结果显示，喙尾琵琶甲乙醇提取物对5株MRSA及标准株均有显著的抑菌作用，并且对同一种菌的不同菌株表现出相近的抑菌活性。这一结果提示可能喙尾琵琶甲提取物的抗菌作用机制与目前临床常用的治疗MRSA感染的药物作用机制有所区别，尚有待后续研究。本次实验只涉及喙尾琵琶甲粗提物的体外抗菌活性，至于其在体内是否能达到有效的抗菌浓度治疗感染，还需通过建立动物模型进行体内实验，进一步探索其抑菌活性，为其应用提供科学依据

〔1〕张坚磊.细菌耐药性的新问题〔J〕.国外医学临床生物化学与检验学分册，2001，22（1）：45.

〔2〕张兰胜，夏从龙，杨永寿，等.彝药喙尾琵琶甲的研究进展〔J〕.时珍国医国药，2009，20（12）：3113-3114.

〔3〕李蕾，罗氘芸，刘勇.云南琵琶甲抗菌活性成分研究〔J〕.中草药，2001，32（3）：197-199.

〔4〕罗氘芸，刘勇，李蕾.云南琵琶甲脂溶性抗菌活性成分研究〔J〕.中草药，1999，30（8）：566-567.

〔5〕刘勇，罗氘芸，李蕾，等.云南琵琶甲防御性分泌物抗菌活性及GC-MS分析〔J〕.云南大学学报：自然科学版，2000，22（3）：217-219.

〔6〕陈奇，卞如濂，陈修.中药药理研究方法学〔M〕.2版，北京：人民卫生出版社，2006：274-277.

〔7〕徐叔云.药理实验方法学〔M〕.3版，北京：人民卫生出版社，2002：1649-1661.

〔8〕黄燕，肖艳芬，甄汉深，等.苦玄参体外抗菌作用的实验研究〔J〕.广西中医药，2008，31（1）：46-47.

〔9〕吴伟元，王凌伟，卢月梅，等.三种检测甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌方法的比较〔J〕.实用医学杂志，2008，24（2）：306-307.

（责任编辑 蒋 康）

Study into the Antibacterial Activity ofBlaps rynchopetera Fairmaire

SHIGuirong，ZHUANG Xiaolong,SUN Huixian,CHENG Ai
（College of Pharmacy,DaliUniversity,Dali,Yunnan 671000,China）

Objective:To observe the in vitro antibacterial activity of ethanol-extract ofBlapsrynchopeteraFairmaire against methicillin-resistant Staphylococcus aureus （MRSA）.Methods:The minimum inhibition concentration （MIC） and minimum bactericidal concentration （MBC）of ethanol-extract ofBlapsrynchopeteraFairmaire against 5 strains MRSA isolated from clinical sampleswere carried outby tube dilutionmethod.Results:The MIC and the MBC of ethanol-extractofBlapsrynchopeteraFairmaire against 5 strains MRSA were 0.98-1.95 mg/mL and 3.9-7.8 mg/mL,respectively.Conclusion:The Ethanol-extract ofBlaps rynchopeteraFairmaire has a strong antibacterial activity in vitro.

BlapsrynchopeteraFairmaire;MRSA;antibacterial activity；MIC

Q969.498.2

A

1672-2345（2010）12-0018-02

大理学院大学生科研基金资助项目（DXSKYX 2010007）

2010-10-21

施贵荣，实验师，主要从事天然药物化学研究.