柴胡、郁金醇提工艺研究

2010-09-17钟晓明潘爱娟冯春荣

中成药 2010年7期

钟晓明，潘爱娟，冯春荣，黄真

(浙江中医药大学，浙江杭州310053)

苏郁滴丸是根据临床治疗抑郁症有效验方制备而成，主要由柴胡、郁金、石菖蒲和苏梗等组成，具有舒肝解郁、理气宽中、宁心安神之功效，主治肝气郁结、痰火扰神所致的轻、中度抑郁症。君药柴胡为伞形科植物柴胡(Bupleurum chinense DC.)或狭叶柴胡(Bupleurum scorzonerfolium Willd.)，按性状不同，分别习称“北柴胡”及“南柴胡”［1］。戈宏焱等［2］研究表明，柴胡的主要成分柴胡皂苷具有抗惊厥、抗癫痫及抗细胞黏附等多种药理作用，可使抑郁型大鼠脑中的高香草酸、去甲肾上腺素、多巴胺及5-羟色胺的含量升高，对抑郁症起到治疗作用。张峰等［3］研究表明，柴胡可能是通过降低脑组织中前额叶5-羟色胺和多巴胺含量而发挥抗抑郁作用的。郁金为姜科植物温郁金(Curcuma wenyujin Y.H.Chen et C.Ling)、姜黄(Curcuma longa L.)、广西莪术(Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang)或蓬莪术(Curcuma phaeocaulis Val.)的干燥块根。前两者分别习称“温郁金”和“黄丝郁金”，其余按性状不同习称“桂郁金”或“绿丝郁金”。韩珍等［4］研究结果表明，郁金对小鼠抑郁症的强迫游泳模型、悬尾模型和拮抗利血平所致的抑郁症模型均有治疗作用。本文优选出柴胡、郁金的最佳醇提工艺，为苏郁滴丸的工业化生产提供依据。

1 材料与仪器

柴胡皂苷a对照品(中国药品生物制品检定所，批号110777-200406)，柴胡药材与郁金药材均购自浙江中医药大学中药饮片厂提供，经浙江中医药大学资源鉴定教研室陈孔荣副教授鉴定分别为伞形科的南柴胡和姜科的黄丝郁金;化学试剂均为分析纯。

赛多利斯分析天平(赛多利斯科学仪器北京有限公司);RE-52AA旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);752型紫外分光光度计(上海光谱仪器有限公司)。

2 检测方法的建立

2.1 评价指标的确定

苏郁滴丸方中以柴胡为君药，郁金中起抗抑郁作用的成分为姜黄素，所占的含量极少。所以以柴胡总皂苷的提取率为指标考察柴胡郁金的提取工艺。

2.2 对照品溶液的制备及测定波长的选择

精密称取柴胡皂苷a对照品3 mg，用甲醇定容到10 mL，作为对照品溶液。精密量取对照品与供试品溶液适量，水浴挥干溶剂，加入新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，高氯酸0.8 mL，60℃水浴15 min，取出，冰水冷却数分钟，各加入冰醋酸5.0 mL，摇匀，以空白做对照，在400～800 nm处进行紫外扫描。结果对照品与供试品溶液的最大吸收在603 nm处。

2.3 标准曲线的制备

分别精密吸取柴胡皂苷 a对照品溶液0.2，0.3，0.4，0.7，0.8 mL挥干溶剂，按2.2项下的显色方法操作，在603 nm处测定吸光度(A)，以柴胡皂苷a对照品溶液浓度(mg/mL)为横坐标，A值为纵坐标，作标准曲线，计算回归方程为A=18.094C+0.062 3，r=0.999 7。表明柴胡皂苷在0.06～0.24 mg范围内线性关系良好。

2.4 精密度试验和重复性试验

分别精密吸取6份柴胡皂苷a对照品溶液0.3 mL，按2.2项下的显色方法操作，在603 nm处测定吸光度，计算得RSD为1.29%。同法用6份柴胡、郁金提取液供试液检查重复性，得RSD为2.15%。

2.5 稳定性试验

取最佳工艺下的柴胡郁金提取液供试品每隔10 min测1次，共测定6次，计算得RSD为2.07%。表明本品在1 h内稳定。

2.6 加样回收率试验

取柴胡、郁金供试液一定量3份，分别加入相当于样品量80%、100%和120%的柴胡皂苷a对照品，同法平行制备3份，共9份进行吸光度的测定。

由表1可知，柴胡、郁金提取液中柴胡皂苷a的加样回收率为99.99%，RSD为2.65%，表明本方法回收率良好。

表1 加样回收率试验结果

3 柴胡、郁金醇提工艺研究

3.1 样品溶液的制备

将浓缩后的柴胡、郁金提取液用水饱和正丁醇萃取4次，合并正丁醇液，减压浓缩至干，用甲醇溶解并定容，作为供试品溶液。

3.2 提取溶媒的确定

精密称取4份柴胡和郁金药材各2.5 g，分别在两份药材中加入70%乙醇，其余两份中加入纯化水各50 mL，分别进行回流提取2 h，超声提取2 h，过滤，减压浓缩，用水饱和正丁醇萃取4次，合并正丁醇液，减压浓缩至干，用甲醇溶解并定容，按对照品方法显色，于603 nm处测定A，计算提取率。由表2可知，采用乙醇回流提取法提取柴胡总皂苷的提取率最高。

表2 不同提取溶剂和方法对皂苷提取的影响

3.3 正交实验设计

3.3.1 因素水平表

选用4个影响提取效果的主要因素:乙醇浓度(A)、乙醇用量(B)、提取次数(C)和回流提取时间(D)，每个因素各选3个水平，制定因素水平表。见表3。

表3 正交试验因素水平

3.3.2 样品的制备

按处方1∶1的比例分别称取9份柴胡、郁金混合药材5 g，按L9(34)正交表所列条件进行实验，收集提取液，浓缩，用水饱和正丁醇萃取4次，减压浓缩至干，用甲醇定容至25 mL量瓶中，备用。

3.3.3 提取工艺正交安排及结果分析

按正交设计表对样品提取率进行考察，结果见表4，表5。

表4 提取工艺正交安排及结果分析

从表4直观分析得出各因素对实验结果的影响次序为C>A>B>D。再从各因素水平来看(K值分析)A和D均为 K2>K1>K3，B 为 K2>K3>K1，C 为 K3>K2>K1，故选择提取条件为A2B2C3D2。结合表5的方差分析，A，B因素均其中C因素对柴胡皂苷的提取影响显著，其他因素未见有显著性差异。为提高工作效率，采用D1，即提取1 h，故柴胡、郁金提取液以柴胡皂苷为评价指标来看，采用柴胡、郁金的最佳提取条件是A2B2C3D1，即用相当于药材8倍量的70%的乙醇回流提取3 h，每次1 h。