高效液相色谱法测定曲匹布通片中曲匹布通含量

汪 杰

(武警部队药品仪器检验所，北京 102613)

曲匹布通片是一种利胆药，用于治疗胆囊炎及胆道疾病，收载于《国家药品标准·化学药品地方标准上升国家标准》(第四册)，其中含量测定方法为容量法。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法[1]测定曲匹布通片的曲匹布通含量，报道如下。

1 仪器与试药

HP1050型液相色谱仪，HP8452型紫外色谱仪，AP-250D型电子天平，超声波仪。曲匹布通片(南京某药厂，批号为041201;沈阳某制药公司，批号分别为050801001，050801037);曲匹布通对照品(中国药品生物制品检定所，批号为100439-200301);甲醇(色谱纯)，超纯水、磷酸二氢钾等其他试剂和辅料(均为分析纯)。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:资生堂 MG C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(取磷酸二氢钾1.36 g加水至1 000 mL，用磷酸调节pH至3.0)-甲醇(30∶70);流速:0.8 mL/min;柱温:30℃;检测波长:235 nm;进样量:10 μL。理论板数按曲匹布通峰计算大于9 000。

2.2 溶液制备

精密称取曲匹布通对照品20.36 mg，置50 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液;精密量取对照品储备液3.0 mL，置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液;取曲匹布通片10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于曲匹布通20 mg)，置25 mL量瓶中，加甲醇适量，超声15 min，再用甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液1 mL，加至25 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液;称取处方量的空白辅料，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

阴性干扰试验:取2.2项下的3种溶液各10 μL进样，记录色谱图。由图1可见，空白辅料不干扰样品测定。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取对照品贮备液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL，分别置50 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，进样5，10，20 μL，在235 nm波长下测定峰面积，平行测定2次。以对照品进样量对平均峰面积进行线性回归，回归方程为 Y=4 438.3 X-0.998 6，r=0.999 99(n=7)。结果表明，曲匹布通进样量在0.040 72～0.814 40 μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:取同一对照品溶液，依法进样10 μL。结果峰面积的 RSD为0.04%(n=6)。

稳定性考察:取同一供试品溶液，避光放置，分别在0，4，8，12，24 h时进样。结果峰面积的 RSD为0.86%(n=5)，表明供试品溶液在24 h内稳定。

加样回收试验:取已测定含量的样品6份，分为3组，每组分别按80%，100%，120%的比例精密加入曲匹布通对照品适量，配成低、中、高3个质量浓度的溶液，进样10 μL。按外标法分别计算含量，计算回收率。结果见表1。

表1 曲匹布通加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取两个厂家样品各10片，每个批号平行操作2次，依法制备供试品溶液并测定含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

以甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(60∶40)为流动相，曲匹布通峰保留时间在15 min处;改变流动相比例，以甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢钾溶液(70∶30)为流动相，曲匹布通峰保留时间在8 min处，且峰形良好，缩短检测时间近一半，提高了检测效率。另据文献[2]报道，曲匹布通在用甲醇-水作流动相主峰拖尾严重，但若在流动相中加入少量磷酸二氢钾，用磷酸调pH至3.0，则能显著改善峰形。

曲匹布通的甲醇溶液在235，270，328 nm波长处有最大吸收，且吸收峰形均较好，3个波长处均无干扰，但235 nm波长处响应值最大，检测灵敏度最高，故选此波长为测定波长。

本试验结果表明，HPLC法准确可靠，可用于测定曲匹布通片的曲匹布通含量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M].北京:化学工业出版社，2005:附录28.

[2]牛剑钊.HPLC法测定曲匹布通含量及有关物质[J].药物分析杂志，2005，25(1):61-63.