超微粉碎对羚玳息风丸溶出特性的影响＊

孙文格，赵午申

(1.河北省石家庄市中医院，河北 石家庄 050051; 2.河北省邢台市中医院，河北 邢台 054001)

羚玳息风丸是根据我国名中医邢月朋主任中医师的经验方制成的纯中药制剂，具有滋阴潜阳、凉肝息风等功效，用于阴虚肝热所致的头痛眩晕、偏头痛、烦躁失眠、目赤、急躁易怒。将超微粉碎技术应用到该制剂工艺中，所制产品的临床疗效较好[1]。本研究旨在利用薄层色谱半定量法和高效液相色谱法对羚玳息风丸(超微细粉和传统蜜丸两种蜜丸)的黄芩苷和延胡索乙素进行定性、定量测定，探讨超微粉碎技术对其溶出特性的影响。

1 仪器与试药

岛津2010型高效液相色谱仪;AUW-220D型电子分析天平;5210DT型超声处理器(功率250 W，频率33 kHz);WKZ-10型超微粉碎机(山东青州精诚机械制造公司);BT-1500型离心沉降式粒度分布仪。延胡索乙素对照品(批号为110726-200809)，黄芩苷对照品(批号为110715-200815)，均由中国药品生物制品检定所提供;羚玳息风丸(超微细粉，批号 20081026，20081105，20081207)，羚玳息风丸(传统蜜丸，批号为 20080326，20080606，20080810)，均由石家庄市中医院生产;甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 样品制备

超微细粉丸:按处方比例称取羚羊角丝、玳瑁、天麻等药材适量，先粗粉碎，过3号筛，再放入超微粉碎机，粉碎1 h。经测试，粒度在10 μm以下者大于95%。每100 g超微细粉加炼蜜70 g，制成小蜜丸。

传统蜜丸:按处方比例称取羚羊角丝、玳瑁、天麻等药材适量，粉碎成细粉。每100 g细粉加炼蜜70 g，制成小蜜丸。

2.2 定性测定(薄层色谱半定量法)

极性目标成分黄芩苷:分别取超微细粉丸和传统蜜丸各5 g，加硅藻土5 g，研匀，加甲醇25 mL，超声处理5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，制得供试品溶液A和B;另取超微细粉丸和传统蜜丸各5 g，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液同上处理，作为供试品溶液C和D;再取黄芩苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2]试验，吸取上述5种溶液各10 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5∶3∶1∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁乙醇溶液。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，供试品溶液A，C，D的斑点大小相等、颜色相同，而供试品溶液B则几乎无斑点(图1)。

脂溶性目标成分延胡索乙素:分别取超微细粉丸和传统蜜丸各 5 g，加硅藻土 5 g，研匀，加甲醇 25 mL，超声处理 5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水10 mL使溶解，加浓氨试液调至碱性，用乙醚提取3次，每次10 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，制得供试品溶液A和B;另取超微细粉丸和传统蜜丸各5 g，加硅藻土 5 g，研匀，加甲醇 25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液同前处理，作为供试品溶液C和D;再取延胡索乙素对照品，加无水乙醇制成每1 mL含0.5 mg的对照品溶液。照薄层色谱法[2]试验，吸取上述5种溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠溶液为黏合剂的硅胶G薄层板上，以正己烷-三氯甲烷-甲醇(7.5∶4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，以碘蒸气熏至斑点显色清晰。结果供试品溶液A，C，D色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，其中供试品溶液A和C与对照品溶液色谱的斑点大小相等，供试品溶液D的斑点略小于C，供试品溶液B则几乎无斑点;在空气中挥尽板上吸附的碘后，置紫外光灯(365 nm)下检视，荧光斑点差异同前(图2)。

图1 黄芩苷薄层鉴别色谱图

2.3 延胡索乙素含量测定

2.3.1 色谱条件与系统适用性试验[2]

色谱柱:DiscoveryC18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流动相:0.1%磷酸(三乙胺调pH至6.0)-甲醇(45∶55);流速:1.0 mL/min;检测波长:280 nm;柱温:30℃;进样量:10 μL。在此色谱条件下，左旋延胡索乙素与相邻的色谱峰分离完全，以延胡索乙素峰计理论板数为5 000，阴性对照品溶液对测定无干扰(图3)。

图2 延胡索乙素薄层鉴别色谱图

图3 延胡索乙素含量测定高效液相色谱图

2.3.2 溶液制备

精密称取延胡索乙素对照品50.32 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇适量，超声使完全溶解后，稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液10 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。取超微细粉丸和传统蜜丸各约1 g，精密称定，各加硅藻土1 g，研匀，置具塞锥形瓶中，精密加入浓氨试液-甲醇(1∶20)的混合溶液50 mL，密塞，精密称定质量，加热回流1 h，放冷，再称定质量，用浓氨试液-甲醇(1∶20)的混合溶液补足质量，滤过，取续滤液25 mL，蒸干，残渣用甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。取不含延胡索的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。

2.3.3 方法学考察

线性关系考察:精密量取对照品贮备液 1，2，3，4，5 mL，分别置50 mL量瓶中加甲醇稀释至刻度，摇匀。按拟订的色谱条件分别进样，记录延胡索乙素峰面积值。以峰面积积分值(Y)对对照品质量浓度(X)进行线性回归，得回归方程 Y=4.23 X-6.30，r=0.999 1(n=5)。结果表明，延胡索乙素对照品质量浓度在 2.062～202.10 μg/mL范围内与峰面积值呈良好的线性关系。

精密度试验:取同一对照品溶液，重复进样5次。结果峰面积的 RSD=0.73%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:分别取超微细粉丸(批号为20081026)和传统蜜丸(批号为20080326)，按2.4.2项下方法制备供试品溶液，分别于0，1，2，3，4，5，6 h 时进样测定。结果超微细粉丸的 RSD=0.88%(n=7)，传统蜜丸的 RSD=0.98%(n=7)，表明供试品溶液在6 h内峰面积基本稳定。

重复性试验:分别取超微细粉丸(批号为20081026)和传统蜜丸(批号为20080326)各6份，按2.4.2项下方法制备供试品溶液，进样测定含量。结果超微细粉丸和传统蜜丸含量的 RSD=0.85%和 RSD=0.73%(n=6)，表明方法的重复性良好。

加样回收试验:分别取已知含量的超微细粉丸(批号为20081026)和传统蜜丸(批号为20080326)各5份，每份加入对照品0.5 mL，按2.4.2项下方法制备待测溶液，进样10 μL，分别测定。结果见表1。

表1 加样回收试验结果(n=6)

2.3.4 样品含量测定

对超微细粉丸和传统蜜丸各取3批样品，按2.4.2项下方法制备供试品溶液，分别进样测定，按外标法以峰面积计算含量。结果批号为20081026，20081105，20081207的超微细粉丸中延索乙素的含量分别为 53.01，53.69，53.57 μg/g，平均 53.59 μg/g;批号为20080326，20080606，20080810的传统蜜丸中延胡索乙素的含量分别为 37.26，37.19，37.17 μg/g，平均 37.21 μg/g。

3 讨论

薄层色谱半定量法定性和高效液相色谱法定量结果表明，超微细粉丸指标成分溶出量大于传统蜜丸，延胡索乙素含量多于传统蜜丸(P＜0.05)，故超微细粉丸的溶出特性优于传统蜜丸。这说明超微粉碎有利于提高羚玳息风丸的溶出速率和溶出量。当然，羚玳息风丸中尚含有其他多种成分，超微粉碎对这些成分有何影响，有待进一步研究。

药材经超微粉碎后，细胞破壁率提高，大大增加了比表面积，使药材中化学成分的溶出效率提高。丸剂是中药传统剂型之一，也是中成药中所占比例最大的剂型，在2010年版《中国药典(一部)》中收载的丸剂总数为320个，占制剂总数的30%。在丸剂的制备工艺中，粉碎工序非常关键。采用普通粉碎得到的药材细粉粒径分布宽，均一性差;而超微粉碎后粒径分布变窄，均一性显著提高。超微粉碎技术不仅有利于有效成分的溶出，又保证了丸剂本身的质量，值得研究。

[1]孙文格，李 红，郑 倩.羚玳息风丸应用超微粉碎技术的临床研究[J].时珍国医国药，2009，20(3):609-610.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:附录Ⅵ B，130.