熟地黄多糖对环磷酰胺诱导小鼠的抗突变作用研究

梁颖，徐绍娜，徐放，李明珠，黄寅炎，吴勃岩

(黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040)

地黄为玄参科植物地黄(Radix Rehmanniae PreParata)的新鲜或干燥块茎。熟地黄是生地的炮制品，是中医常用的补肝肾、益精血之品，具有补血滋阴、益精填髓的功效，是优良的滋阴补血药，被誉为“壮水之主，补血之君”，广泛用于阴虚、血虚所致的各种疾病。多糖是地黄中有效成分之一，有资料表明，熟地黄多糖具有抗氧化，抗衰老［1］，增强机体免疫功能等作用［2，3］。但关于熟地黄多糖在抗突变方面的文献的报道还很少。本实验通过三种常用的抗突变试验，研究熟地黄多糖的抗突变作用，为其进一步研究提供依据。

1 材料方法

1.1 实验动物 昆明种小鼠，由黑龙江中医药大学药物安全性评价中心提供。

1.2 药品与试剂 熟地黄(购于同仁堂);熟地黄多糖(由本实验室提取并鉴定);环磷酰胺(上海华联制药有限公司);秋水仙素(上海国药集团化学试剂有限公司);5－BrdU(南京探求生物技术有限公司)。

1.3 实验方法

1.3.1 实验剂量 经抑瘤试验证明，熟地黄多糖给药量为500mg·kg－1时为最佳剂量，效果最为显著。以下试验均采用此剂量。

1.3.2 小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验 选取20～22g的昆明种小鼠30只，雌雄各半，随机分成3组，每组10只。阴性对照组，灌胃给生理盐水，10d。熟地多糖组，按表1的剂量灌胃给药10d。阳性对照组，第1～8d口服生理盐水，第9、10d腹腔注射环磷酰胺(40mg·kg－1)。第10d给环磷酰胺6h后，处死小鼠。取股骨骨髓细胞，常规制片，Giemsa染色，油镜下观察。每只小鼠统计1000个嗜多染红细胞，并记录出微核细胞数。采用SPSS 10.0统计软件进行t检验，计算抑制率:

抑制率=［(阳性组出现数－实验组出现数)/阳性组出现数］×100

1.3.3 小鼠骨髓细胞染色体畸变试验 选取20～22g的昆明种小鼠30只，雌雄各半，分组及给药情况同微核试验。第10d阳性对照组注射完环磷酰胺后2h，将所有小鼠全部腹腔注射秋水仙素(4mg·kg－1)，4h后处死小鼠。取小鼠股骨骨髓细胞，37℃ KCl溶液中低渗处理30min。甲醇冰醋酸固定2次，制片，Giemsa染色，油镜下观察。每只动物计数100个细胞分裂相，并记录出染色体畸变的细胞数，采用SPSS 10.0统计软件进行t检验，计算抑制率。

1.3.4 小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换试验 选取20～22g昆明种小鼠30只，雌雄各半，分组及给药情况同微核试验。所有小鼠在处死前24h，分12次腹腔注射5－BrdU，1mg·g－1。处死前4h腹腔注射秋水仙素。处死后取股骨骨髓细胞，低渗处理和固定过程同染色体畸变实验。制片后将装片于37℃恒温箱内放置3d，将分化好的装片置于30W的紫外灯下照射30min，自然晾干，Giemsa染色，油镜下观察。每只动物计数30个细胞分裂相，并记录出现交换的染色体数。采用SPSS 10.0统计软件进行t检验分析，计算抑制率。

2 结果

2.1 熟地黄多糖对环磷酰胺诱导微核的影响

熟地黄多糖对环磷酰胺诱导小鼠骨髓细胞PCE微核率具有抑制作用。与阳性对照组比较，差异显著(P<0.01)，抑制率为37.87%。与阴性对照组比较，差异显著(P<0.01)，有统计学意义，结果见表1。该实验结果表明，熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的小鼠微核率有显著的抑制作用。

2.2 熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的小鼠骨髓细胞染色体畸变的影响

熟地黄多糖组与阳性对照组比较差异显著(P<0.01)，抑制率为21.46%，与阴性对照组比较差异显著(P<0.01)，有统计学意义。表明熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的染色体畸变有良好的抑制作用。结果见表2。

2.3 熟地黄多糖对环磷酰胺诱导骨髓细胞姐妹染色单体交换率的影响

熟地黄多糖组与阳性对照组比较存在差异(P<0.05)，抑制率为25.61%，与阴性对照组比较差异显著(P<0.01)，有统计学意义，结果见表3。表明熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的骨髓细胞姐妹染色单体交换率有一定的抑制作用。

表1 熟地黄多糖对CP诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的影响(±s)

表1 熟地黄多糖对CP诱导小鼠骨髓嗜多染红细胞微核的影响(±s)

注:与阳性对照组比较，**P<0.01;与阴性对照组比较，##P<0.01。

组别 熟地黄多糖(mg·kg－1) CP(mg·kg－1) 动物数(只) PCE(个) 微核率(‰) 抑制率(%)阴性对照组10 1000 2.20±0.25 －阳性对照组 － 40 10 1000 63.9±5.74 －熟地黄多糖组 500 40 10 1000 39.7±6.74**##－－37.87

表2 熟地黄多糖对CP诱导小鼠骨髓细胞染色体畸变的影响(±s)

表2 熟地黄多糖对CP诱导小鼠骨髓细胞染色体畸变的影响(±s)

注:与阳性对照组比较，**P<0.01;与阴性对照组比较，##P<0.01。

组别 熟地黄多糖(mg·kg－1) CP(mg·kg－1) 动物只数(只) 骨髓细胞(个) 染色体畸变率(%) 抑制率(%)阴性对照组10 100 12.00±1.92 －阳性对照组 － 40 10 100 54.33±4.32 －熟地黄多糖组 500 40 10 100 42.67±3.93**##－－21.46

表3 熟地黄多糖对CP诱导小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换的影响(±s)

表3 熟地黄多糖对CP诱导小鼠骨髓细胞姐妹染色单体交换的影响(±s)

注:与阳性对照组比较，*P<0.05;与阴性对照组比较，##P<0.01。

组别 熟地黄多糖(mg·kg－1) CP(mg·kg－1) 动物只数(只) 细胞数(个) 姐妹染色单体交换率(%) 抑制率(%)阴性对照组10 30 3.50±1.87 －阳性对照组 － 40 10 30 10.25±1.67 －熟地黄多糖组 500 40 10 30 7.62±1.68*##－－25.61

3 讨论

熟地黄是中医临床常用药，为补阴补血佳品。在熟地黄中，多糖的含量为3.33%［4］。除多糖外，还有梓醇、苷类、5－羟甲基糠醛等成分。有资料表明，熟地黄多糖具有抗氧化、抗衰老的作用，能够增强机体的免疫力，低分子量的地黄多糖还具有抑瘤作用［5］。

本试验证明，熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的微核率有良好的抑制作用，可以有效地避免微核的发生，减少染色体的损伤。同时熟地黄多糖还对环磷酰胺诱导的骨髓细胞染色体畸变率和姐妹染色单体交换率有明显的抑制作用。因此，我们可以推测熟地黄多糖可以通过抵抗诱变剂对染色体造成的损伤，来达到对机体遗传物质的保护作用，避免突变的发生，最终起到抗肿瘤作用。同时也表明，熟地黄多糖对遗传物质无损害作用。熟地黄多糖抗突变的作用机制还有待于进一步深入研究。

［1］ 陈丁丁，戴培德，张涛.地黄煎剂消退L－甲状腺素诱发的大鼠心肌肥厚并抑制其升高的心、脑线粒体 Ca2+、Mg2+ATP酶活力［J］.中药药理与临床，1997，13(4):27 －29.

［2］ 苗明三.怀地黄多糖对衰老模型小鼠免疫器官的影响［J］.河南中医，1999，19(3):30.

［3］ 苗明三，方晓艳.怀地黄多糖免疫兴奋作用的实验研究［J］.中国中医药科技，2002，9(3):159 －160.

［4］ 纪耀华，孙莹.地黄炮制前后总多糖含量的比较［J］.中医药信息，1999，16(4):16 －17.

［5］ 魏小龙，茹祥斌.低分子量地黄多糖对P53基因表达的影响［J］.中国药理学学报，1997，18(5):471 －474.