HPLC法测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量

王艳芝

（吉林省双辽市中医院药剂科，吉林双辽 136400）

雷公藤提取物为雷公藤根的醋酸乙酯提取物。本品为棕色的块状物或粉末；气微香，味微苦。取本品约10 mg，加乙醇15ml使溶解；加碱性二硝基苯甲酸试液0.5 ml，即显红色。雷公藤片含雷公藤甲素，有抗感染和免疫抑制作用，适用于类风湿性关节炎活动期。每次10～20 mg，3次/d，1个月为1个疗程。病情控制后减量、停药，采用间歇治疗。笔者采用HPLC法测定雷公藤片中雷公藤甲素的含量，研究结果表明，雷公藤甲素在此条件下分离较好，检测灵敏度高，测定专属性强。现报道如下：

1 仪器与试药

1.1 仪器

HP1100高效液相色谱仪；在线脱气机；四元泵；二极管阵列检测器；HP1100化学工作站；Agilent G1313ALS自动进样器；METTLER电子分析天平；simplicity-185超纯水器。

1.2 试药

雷公藤片（批号：091243，北京同仁堂公司）；雷公藤甲素（批号：100021-200817，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil-C18（4.6 mm×200 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（60∶40）；检测波长：218 nm；流速：1.3 ml/min。 柱温：35℃；进样量：10 μl；理论塔板数按雷公藤甲素计不低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备

取雷公藤甲素对照品适量，精密称定，加甲醇溶液制成每毫升含0.023 8 mg的溶液作为对照品贮备液。精密吸取对照品贮备液4 ml置10 ml量瓶中，加甲醇溶液定容至刻度，作为对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取雷公藤片30片，研碎后取10片量，加氯仿10 ml，超声10 min，加中性氧化铝1 g，搅拌均匀，蒸干，上中性氧化铝柱，以醋酸乙酯溶液洗脱，收集洗脱液150 ml，蒸干，残渣加甲醇溶液使溶解，定容至10 ml作为供试品溶液。

2.4 系统适用性试验

分别取雷公藤甲素对照品溶液、阴性溶液和供试品溶液，按上述色谱条件进行试验，考察系统适用性。HPLC色谱图见图1。

2.5 线性关系考察

分别精密量取“2.2”项下雷公藤甲素对照品贮备液1、2、4、6、8、10 ml，分别置 10 ml量瓶中，加甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，分别吸取20 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定色谱峰面积，以对照品进样量（μg）为横坐标，峰面积为纵坐标，计算回归方程，结果表明雷公藤甲素进样量在0.047 6～0.476 0 μg范围内，呈良好的线性关系。回归方程为Y=2 110.8X+3.7（r=0.999 1）。

2.6 精密度试验

精密吸取“2.2”项下对照品溶液20 μl，重复进样 5次，按上述色谱条件测定色谱峰峰面积，RSD为1.84%，结果表明本法精密度良好。

2.7 稳定性试验

精密吸取“2.3”项下供试品溶液，分别于放置 0、2、4、6、8、12 h后，注入液相色谱仪，测定色谱峰峰面积，RSD为2.39%，结果表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.8 重复性试验

取同一批样品，按“2.3”项下方法制备5份供试品溶液，分别测定色谱峰面积，计算得平均含量为11.48 μg/g，RSD=1.36%（n=6）。结果表明本法重复性良好。

2.9 回收率试验

取已知含量的样品6份，加入雷公藤甲素对照品溶液（0.050 48 mg/ml）1 ml，加入氯仿 10 ml，按“2.3”项下方法制备样品溶液，照“2.1”项下方法测定雷公藤甲素色谱峰，测得平均回收率为99.08%，RSD=0.75%，结果见表1。

表1 回收率试验结果（n=6）Tab.1 Resultsof recovery test(n=6)

2.10 样品含量测定

取本品30片，称定重量，研碎，精密称取10片量，按“2.3”项下方法制备样品溶液，精密吸取样品溶液 20 μl，依“2.1”项下方法进行测定。结果见表2。

表2 样品含量测定结果（%，n=3）Tab.2 Content determination results of samples(%,n=3)

3 讨论

雷公藤片既有抗感染作用，又有免疫抑制作用。目前其他的抗风湿药没有免疫抑制作用，而免疫抑制药又没有抗感染作用，而雷公藤两者均具有。同时对胃的刺激又比其他的抗风湿药小，细胞毒作用比其他的免疫抑制剂（如磷酰胺）安全。所以说雷公藤是一个不可多得具有很高价值的中国独创的新药。本研究通过照薄层色谱法试验，测定雷公藤片中其主要药理作用的雷公藤甲素进行含量分析，效果较好。吸取供试品溶液、对照品溶液，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以氯仿-乙醚为展开剂，展开，取出，晾干，喷以碱性二硝基苯甲酸试液，照薄层色谱法进行扫描，测量供试品吸收度积分值与对照品吸收度积分值，计算，即得。本品按片计，含雷公藤甲素（C20H24O6）不少于0.1%，此方法可以作为雷公藤片中雷公藤甲素的检测。

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