维他敏胶囊质量控制方法研究

达庆国，钱 芳，周春来，刘志辉

(南京中医药大学附属医院，江苏 南京 210029)

维他敏胶囊由山豆根、人参、黄芪、茵陈、苦地丁等中药组成，具有抗病毒和提高人体免疫力的作用。笔者对制剂质量控制方法进行了研究，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪，包括G1311A四元泵，G1316A柱温箱，G1314A可变波长扫描紫外（VWD）检测器；Agilent Ver A 10.2色谱工作站；939型全自动薄层制板器（重庆市南岸贝尔德仪器技术厂）；101－1A型电热鼓风干燥箱（南通沪通制药机械设备厂）；HHS型电热恒温水浴锅（江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司）；WD－9413A型凝胶成像分析仪（北京市六一仪器厂）；KQ－1000E型医用超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BP－211D型1/10万电子分析天平(德国Sartorius)；玻璃点样毛细管(华西医科大学仪器厂)。硅胶G（青岛海洋化工集团）；氧化苦参碱对照品（含量测定用，批号为0780－9703）、苦参碱对照品（含量测定用，批号为0805－9703）、人参皂苷Rb1对照品（定性鉴别用，批号为704－9407）、人参皂苷Rg1对照品（含量测定用，批号为0703－9914）、人参皂苷Re对照品（含量测定用，批号为954－9608）、黄芪甲苷对照品（含量测定用，批号为110781－200512），均购自中国药品生物制品检定所；维他敏胶囊（规格为0.4 g，批号分别为060412，060421，060422，本院自制）。所用试剂均为分析纯或色谱纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

人参：取胶囊内容物约2 g，加水50 mL使溶解，超声30 min，滤过，滤液加水饱和的正丁醇萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，加稀氨试液洗脱至下层溶液无色，取上层溶液，水浴蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性对照品溶液。另取人参对照药材粉末2 g，加水50 mL，加热回流1 h，滤过，放冷，加水饱和的正丁醇萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，加稀氨试液洗脱至下层溶液无色，取上层溶液，水浴蒸干，残渣加2 mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液。另取人参皂苷Rb1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每1 mL各含2 mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各6!L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇－乙酸乙酯－稀氨溶液(5→50)(4∶1∶5)[1]的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液、对照品溶液色谱相应位置上分别显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰（图1 A）。

黄芪：按人参鉴别项下供试品溶液制备方法制备供试品溶液和阴性对照品溶液。另取黄芪对照药材粉末2 g，加水50 mL，加热回流1 h，滤过，放冷，加水饱和的正丁醇萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，加稀氨试液洗脱至下层溶液无色，取上层溶液，水浴蒸干，残渣加2 mL甲醇使溶解，作为对照药材溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各6!L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇－乙酸乙酯－稀氨溶液（5→50）(4∶1∶5)[1]的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃下加热至显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液、对照品溶液色谱相应位置上分别显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰（图1 B）。

图1 薄层色谱图

茵陈：取胶囊内容物4 g，加水50 mL使溶解，加三氯甲烷萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，水浴蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性对照品溶液。另取茵陈对照药材粉末5 g，加水100 mL，加热提取1 h，滤过，滤液浓缩至适量，加三氯甲烷萃取2次，每次40 mL，合并三氯甲烷液，水浴蒸干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述3种溶液各10!L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－三氯甲烷－丙酮（4∶9∶2）[2]为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰（图1 C）。

苦地丁：取胶囊内容物5 g，加水100 mL使溶解，加浓氨试液调pH至11～12，用三氯甲烷萃取2次，每次50 mL，合并萃取液，水浴蒸干，残渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性对照品溶液。另取苦地丁对照药材粉末5 g，加水100 mL，加热提取30 min，滤过，滤液加浓氨试液调pH至11～12，加三氯甲烷萃取2次，每次25 mL，合并萃取液，水浴蒸干，残渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述3种溶液各8!L，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙醚－乙醇－氨水(18∶2∶1∶0.05)[3]为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰（图1 D）。

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件[4]

色谱柱：Hypersil Aps－2(NH2)柱 (250 mm ×4.6 mm，5!m)；VWD检测器；流动相：乙腈－0.3%磷酸－无水乙醇（82∶8∶10）；检测波长：220 nm；柱温：30 ℃；流速：1 mL/min；进样量：10!L。理论塔板数按氧化苦参碱峰、苦参碱峰计不低于3 000。

2.2.2 溶液制备

取氧化苦参碱、苦参碱对照品各10 mg，精密称定，置50 mL量瓶中，加流动相溶解成每1 mL含氧化苦参碱0.200 0 mg、苦参碱0.202 0 mg的对照品溶液。取本品粉末 0.4 g，精密称定，加水50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液用三氯甲烷萃取3次，每次30 mL，合并萃取液，水浴蒸干，残渣加流动相使溶解，转移至10 mL量瓶中，加流动相至刻度，摇匀，即得供试品溶液。同法制备阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

系统适用性试验：分别精密吸取2.2.2项下3种溶液各10!L，注入高效液相色谱仪测定，结果氧化苦参碱、苦参碱保留时间分别为10 min和15 min，阴性对照无干扰（见图2）。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察：取上述对照品溶液，用流动相分别稀释成氧化苦参碱质量浓度为200.00,100.00,50.00,25.00，12.50,6.25!g/mL和苦参碱质量浓度 为 202.00,101.00,50.50,25.25,12.625,6.312 5!g/mL的系列对照品溶液，分别精密吸取系列对照品溶液各10!L，注入高效液相色谱仪，测定色谱峰峰面积。经线性回归，得氧化苦参碱回归方程 Y=630.44 X+6.491 2，r=1.000(n=6)，苦参碱回归方程 Y=586.51 X+7.781 0，r=0.999 8(n=6)，结果表明氧化苦参碱质量浓度在6.25～200.00!g/mL范围内、苦参碱质量浓度在6.312 5～202.00!g/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系。

精密度试验：取对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积，结果氧化苦参碱峰面积的 RSD为1.64%，苦参碱峰面积的 RSD为1.52%（n=6），表明仪器精密度良好。

重现性试验：取样品（批号为060412）粉末0.4 g，共6份，精密称定，依法制备供试品溶液并测定峰面积，结果氧化苦参碱峰面积的 RSD为 1.31%，苦参碱峰面积的 RSD为 1.44%（n=6），表明方法重现性良好。

加样回收试验：取已知含量的样品（批号为060412）6份，分别加入规定量的对照品溶液，照上述色谱条件测定，结果见表1。

表1 加样回收试验结果（n=6）

2.2.4 样品含量测定

取3个批号的制剂各2份，照上述方法制备供试品溶液，依法测定，结果批号为060412，060421，060422的3批样品中氧化苦参碱平均含量分别为 0.43，0.48，0.46 mg/粒，苦参碱平均含量分别为 0.32，0.34，0.34 mg/粒（n=2）。

3 讨论

人参、黄芪的薄层色谱鉴别中，曾用三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇 －水（15∶40∶22∶10）和三氯甲烷 －甲醇 －水（13∶7∶2）的下层溶液为展开剂展开，结果薄层色谱图斑点发散、不圆整，改用正丁醇－乙酸乙酯－稀氨（5→50）(4∶1∶5)的上层溶液为展开剂展开后，薄层色谱图斑点集中、清晰，分离较好。人参及相应制剂供试品的处理，未用三氯甲烷进行脱脂去杂，而是加水溶解，超声处理后再用水饱和的正丁醇萃取，萃取液再经稀氨试液洗脱，该法简化了操作，效果较好。

含量测定中供试品溶液的制备曾采用加三氯甲烷超声提取方法、加酸水溶解超声然后萃取的提取方法和文中方法，结果前两种提取方法氧化苦参碱、苦参碱的含量均偏低，最终确定文中方法。

[1]王术玲.人参、三七、黄芪的薄层色谱鉴别[J].中国药品标准，2003，4(2)：49.

[2]周仰青，陈庆辉，张伟婷.茵胆平肝胶囊中主要中药的鉴别[J].海峡药学，1998，10(4)：48.

[3]李清娟，陈卫平，张宏武.感冒清热颗粒中苦地丁的薄层色谱鉴别[J].中国药事，2005，19(1)：47.

[4]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京：化学工业出版社，2005：139，213 －214.