几种杀菌剂对南方红豆杉炭疽病的室内毒力测定

2010-09-10范晓龙

山西农业科学 2010年8期

范晓龙

（山西林业职业技术学院，山西太原030009）

南方红豆杉炭疽病是红豆杉的主要病害之一，由胶孢炭疽菌（Colletotrichum gloeosporioides（Penz）Sacc）侵染引起。该病主要为害红豆杉的叶和嫩梢，叶片尤为严重。为了寻求有效的控制措施，本研究在室内进行了7种不同的杀菌剂对南方红豆杉炭疽病分生孢子萌发和菌丝生长的抑制测定。

1 材料和方法

1.1 供试药剂

共选用了7种不同的杀菌剂用于化学防治试验，具体情况如表1所示。

表1 供试药剂一览

1.2 供试菌株

菌株来自福建省明溪县沙溪镇南方红豆杉与杉木混交林中红豆杉炭疽病病叶，对其进行常规组织分离，经单孢纯化后获得菌种。在PDA培养基上，于（25±1）℃中培养备用。

1.3 测定方法

1.3.1 分生孢子萌发测定将7种杀菌剂分别配成 500，1 000，1 500，2 000 倍液，然后将孢子悬浮液（10×10倍显微镜下每视野100个左右孢子）加入7种药剂的各个浓度中，用滴管滴少许含有孢子悬浮液的药剂于凹玻片上（在培养皿中保湿），置于25℃的恒温箱中培养，以无菌水作对照，重复3次，48 h后检查分生孢子的萌发情况，计算抑制率[1]，并进行方差分析和多重比较。

1.3.2 菌落生长速度测定采用含毒介质培养法的生长速度法[2-3]。将7种杀菌剂各设6个浓度梯度，即 500，800，1 000，1 500，2 000，3 000 倍液，以清水作对照。农药按外比法稀释[4]，即稀释100倍或100倍以上的，计算稀释量时不扣除原药剂所占的1份。分别将各种杀菌剂，用无菌水稀释成比供试浓度高10倍的母液，将培养基灭菌后，冷却到50℃左右，在无菌工作台上，根据不同浓度处理所需剂量，用移液管将母液移入培养基中，迅速摇匀后倒入培养皿中，制成薄厚均匀的含药PDA平板。取直径为6 mm，培养5 d的炭疽菌落的边缘菌饼，置于PDA平板中央，于28℃的恒温箱中培养3 d，用十字交叉法测量菌落直径3次，求平均值，计算相对抑制率[4]，并进行方差分析和多重比较。每一药剂设3个重复，并以无菌水作对照。

1.3.3 抑制中浓度（E C50）的计算为较精确地测定出胶孢炭疽菌对不同杀菌剂的敏感程度，用有效中浓度（即抑制50%病菌菌丝生长量所需的有效浓度）作为杀菌剂的毒力比较指标[1]。统计计算时，将相对抑制率转化为几率值作为因变量（Y），以各处理药剂浓度的对数值作为自变量（X），用最小二乘法进行直线回归求出毒力回归方程[5-9]。由毒力回归反应式，令Y=5（即抑制50%的几率值），反求X（致死中浓度EC50）。EC50值越小，即浓度越小，说明该药剂对病原菌的抑制作用越强；反之，抑制作用越差[10]。

2 结果与分析

2.1 分生孢子萌发抑制测定结果

从表2，3可以看出，各种药剂对孢子的萌发均有很高的抑制率。对孢子萌发抑制最好的是甲基托布津，其次为炭克、多菌灵、退菌特、达科宁和代森锰锌，最差的是代森锌。DMRT方差分析结果表明，不同药剂和不同浓度对红豆杉炭疽菌的分生孢子萌发抑制率的影响差异显著。

表2 不同杀菌剂对分生孢子萌发的影响

续表2

表3 不同药剂和浓度对孢子萌发影响的方差分析

2.2 菌丝生长速度法的测定结果

生长速度法测定结果（表4）表明，7种药剂对红豆杉炭疽菌菌丝的生长均有抑制作用，但各药剂间的抑制强度不同，从毒力回归方程及EC50值可以看出，甲基托布津和炭克的抑制作用最强，EC50值分别为2.29，2.88 mg/L；其次是多菌灵和退菌特，EC50值分别为3.72，4.07 mg/L；达科宁、代森锰锌和代森锌的抑制作用最差，EC50值分别为6.31，8.13，15.49 mg/L。7种药剂对红豆杉炭疽菌的毒力大小依次为：甲基托布津＞炭克＞多菌灵＞退菌特＞达科宁＞代森锰锌＞代森锌。

由表5（DMRT方差分析）结果可知，不同药剂和不同浓度对红豆杉炭疽菌菌丝生长的影响差异显著。