HPLC法测定肠安康颗粒中白术内酯Ⅰ与苍术酮的含量

何雄伟（重庆市第九人民医院，重庆市 400700）

HPLC法测定肠安康颗粒中白术内酯Ⅰ与苍术酮的含量

何雄伟＊（重庆市第九人民医院，重庆市 400700）

目的：建立肠安康颗粒中白术内酯Ⅰ与苍术酮的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，色谱柱为伊利特ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（梯度洗脱），流速为1 mL·min-1，检测波长为220 nm。结果：白术内酯Ⅰ进样量在0.1～2.0 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝0.999 9），平均回收率为98.84%，RSD＝0.76%（n＝6）；苍术酮进样量在0.5～10.0 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系（r＝0.999 9），平均回收率为98.43%，RSD＝1.14%（n＝6）。结论：本方法简便、准确，可用于肠安康颗粒的质量控制。

肠安康颗粒；白术内酯Ⅰ；苍术酮；高效液相色谱法；含量测定

＊主管药师。研究方向：中药制剂与质量标准。电话：023-68289034

肠安康颗粒是根据国家级名中医临床验方研发的医院制剂，由黄芪、益母草、白术、龟板、鳖甲等7味药材组成，具有补气、活血、软坚散结之功效，是肠癌辅助治疗用药，抗转移疗效确切[1～3]。为提高制剂质量，笔者采用高效液相色谱（HPLC）法同时测定了肠安康颗粒中白术内酯Ⅰ与苍术酮的含量，方法简便、准确，可用于该制剂的质量控制。

1 材料

1.1 仪器

LC-10ATvp HPLC仪、SPD-10Avp紫外检测器（日本岛津公司）；色谱工作站（杭州英谱科技开发有限公司）；电子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；KQ-400型超声提取仪（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药

乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯；白术内酯Ⅰ、苍术酮标准品均由浙江省中医药研究院制备（纯度均＞98%）；肠安康颗粒（批号：20071011、20071015、20071102）及阴性样品均由重庆市第九人民医院自制。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：伊利特ODS色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（洗脱程序见表1）；柱温：室温；流速：1 mL·min-1；检测波长：220 nm。

2.2 溶液的制备

2.2.1 标准品溶液：精密称取干燥至恒重的白术内酯Ⅰ标准品10.00 mg，置于25 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制得白术内酯Ⅰ贮备液；再取苍术酮标准品10.00 mg，置于5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制得苍术酮贮备液。精密吸取2种贮备液各1 mL，置于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成每1 mL含白术内酯Ⅰ0.04 mg及苍术酮0.20 mg的混合标准品溶液。

表1 梯度洗脱程序Tab 1 Gradient elution program

2.2.2 供试品溶液：取装量差异项下的本品约1.0 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，放置1 h，超声处理30 min，放冷至室温，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，滤过，取续滤液过0.2 μm微孔滤膜，即得。

2.2.3 阴性对照溶液：取缺白术的阴性样品，按“2.2.2”项下方法操作，即得。

2.3 系统适用性试验

分别吸取上述标准品溶液、供试品溶液及阴性对照溶液各10 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件记录色谱图。结果，供试品色谱中指标成分与相邻峰的分离度分别为3.26与5.79；理论塔板数以白术内酯Ⅰ及苍术酮色谱峰计算应＞3 000；阴性对照在与标准品出峰相应保留时间位置未出现杂质峰，表明本法专属性强。色谱图见图1。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察：精密吸取标准品贮备液，分别稀释成梯度浓度的混合标准品溶液，精密吸取10 μL注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定，记录峰面积。以峰面积积分值（Y）对进样量（X，μg）进行线性回归，得白术内酯Ⅰ的回归方程为Y＝27 183.3X—2 062.1（r＝0.999 9）；苍术酮的回归方程为Y＝2 927.3X—705.6（r＝0.999 9）。结果表明，白术内酯Ⅰ、苍术酮的进样量分别在0.1～2.0、0.5～10.0 μg范围内与各自峰面积积分值呈良好线性关系。

图1 高效液相色谱图A.混合标准品；B.供试品；C.阴性对照；1.白术内酯Ⅰ；2.苍术酮Fig 1 HPLC chromatogramA.mixtrue standard；B.test sample；C.negative control；1.atractylenolideⅠ；2.atractylone

2.4.2 精密度试验：精密吸取混合标准品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，每次10 μL。结果，白术内酯Ⅰ和苍术酮峰面积的RSD分别为1.02%和1.81%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 稳定性试验：取同一供试品溶液（批号：20071011），按上述色谱条件分别于0、2、4、6、8、12 h各进样10 μL。结果，白术内酯Ⅰ和苍术酮峰面积的RSD分别为1.39%和1.23%，表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.4.4 重复性试验：取同一批样品（批号：20071011）共6份，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定。结果，白术内酯Ⅰ和苍术酮的平均含量分别为0.060 mg·g-1和0.30 mg·g-1，RSD分别为1.12%和1.08%，表明方法重复性良好。

2.4.5 加样回收率试验：称取已知含量的样品（批号：20071011）共9份，精密称定，按照高、中、低比例分别精密加入对照品溶液（每1 mL含白术内酯Ⅰ0.04 mg和苍术酮0.20 mg），按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定样品含量，计算加样回收率，结果分别见表2、表3。

表2 白术内酯Ⅰ的回收率试验结果（n＝6）Tab 2 Recovery of atractylenolideⅠ（n＝6）

表3 苍术酮的回收率试验结果（n＝6）Tab 3Recovery of atractylon（n＝6）

2.5 样品含量测定

取3批肠安康颗粒，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液。分别精密吸取混合标准品溶液1 μL及供试品溶液20 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以外标法计算样品含量，结果见表4。

表4 样品含量测定结果（n＝3）Tab 4Result of sample determination（n＝3）

3 讨论

虽然《中国药典》中白术项下没有含量测定，但考虑到制剂中白术未经提取，直接将细粉入药制粒成型，有效成分含量较高，而且有相关实验室提供了白术内酯和苍术酮标准品，能够满足含量测定的需要，故最终以白术内酯Ⅰ和苍术酮为指标，建立了该制剂的含量测定方法并制定含量限度。

苍术酮不稳定，冰冻保存6个月后纯度下降，因此将苍术酮有效期定为6个月并冷冻保存。临用时再配制标准品溶液。

试验对流动相梯度洗脱程序进行了比较，选择了成分分离良好、分析时间适宜的条件。另对供试品溶液的制备条件进行了比较，最终确定文中所述制备方法。

[1]国家药典委员会编.中华人民共和国药典（一部）[S].2005年版.北京：化学工业出版社，2005：68.

[2]文红梅，李 伟，吴 皓.白术质量标准研究Ⅰ——HPLC法测定2种白术内酯的含量[J].药物分析杂志，2001，21（3）：170.

[3]俞忠民，戴诗文，寿 旦，等.超微粉碎对白术中内酯成分体外溶出的影响[J].中国药房，2009，20（9）：653.

Determination of AtractylenolideⅠ and Atractylone in Chang’ankang Granule by HPLC

HE Xiong-wei（The Ninth People’s Hospital of Chongqing，Chongqing 400700，China）

ABSTRCTOBJECTIVE：To develop a method for determination of atractylenolideⅠ and atractylone in Chang’ankang granule by HPLC.METHODS：The determination was performed on Yilite ODS column（250 mm×4.6 mm，5 μm）.The mobile phase contained of acetonitrile-water（gradient elution）with flow rate of 1 mL·min-1and detection wavelength of 220 nm.RESULTS：The linear range of atractylenolide Ⅰwere 0.1～2.0 μg（r＝0.999 9）with mean recovery of 98.84%（RSD＝0.76%，n＝6）.The linear range of atractylone were 0.5～10.0 μg with mean recovery of 98.43%（RSD＝1.14%，n＝6）.CONCLUSION：This method is simple，convenience and accurate for quality control of Chang’ankang granule.

Chang’ankang granule；AtractylenolideⅠ；Atractylone；HPLC；Content determination

R283.627；R927.2

A

1001-0408（2010）03-0249-02

2009-10-29

2009-12-12）