阿胶低肽不同给药途径的药效学研究

付英杰，曲立生，田景振（1.山东中医药大学药学院，济南市50355；.山东泰安市中医医院，泰安市71000）

前期研究利用酶解法等将阿胶进行了酶解与纯化制得阿胶低肽，并利用超滤法制取了不同分子量段的酶解阿胶低肽，且确定注射用阿胶低肽的安全范围及有效范围:分子量为1～3 kD，口服用有效范围:分子量为＜5 kD；同时考察了有效范围的量效关系。本研究拟通过药效学实验以证实阿胶低肽的升血、抗疲劳、免疫增强作用。

1 材料

1.1 仪器

一次性注射器（济南诚信化玻公司，规格:1、5、10 mL）；MTN-61型全自动血细胞计数仪（长春市曼特诺医疗器械有限公司）。

1.2 试药

2%盐酸苯肼（上海试剂三厂，批号:060710）以注射用水配制成2%浓度后过0.22 μm微孔滤膜除菌；氢化可的松注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批号:0411081）；阿胶（山东东阿阿胶股份有限公司，批号:070367）；注射用分子量（MWt.）1～3 kD阿胶低肽（低肽含量:0.371g·mL-1）、ig用MWt.＜5kD阿胶低肽（低肽含量:0.042 g·mL-1）均由笔者自制。

1.3 动物

家兔32只，♀♂兼用，体质量2～2.5 kg；昆明种小鼠90只，♂，体质量18～22 g，均由山东中医药大学实验动物中心提供（动物生产许可证号:SCXK（鲁）20050015）。

2 方法与结果

2.1 阿胶低肽对贫血模型家兔的药效影响

实验分为5组，即空白、模型、阿胶灌胃（ig，5%阿胶水溶液1.55 mL·kg-1）、低肽灌胃（ig，阿胶低肽6.25 mL·kg-1）、低肽注射（ip，注射用阿胶低肽0.70 mL·kg-1）组。家兔脊背sc 32%盐酸苯肼（30 mg·kg-1），每5天 1次，连续注射3次，复制家兔贫血模型。复制模型成功后，每天给药1次，连续7 d，抗凝检测红细胞计数（RBC）、血红蛋白（Hb）、白细胞计数（WBC）[1]。

与模型组比较，阿胶灌胃、低肽注射组Hb、RBC、WBC显著提高（P＜0.01），低肽灌胃组对于Hb及RBC只有提升趋势但无显著意义（P＞0.05）；阿胶灌胃组与阿胶注射组间WBC、RBC没有显著差别；与阿胶灌胃组比较，阿胶注射组Hb提升更显著。阿胶低肽在模型家兔体内的药效学指标见表1。

表1 阿胶低肽在模型家兔体内的药效学指标Tab 1 Pharmacodynamic indicator of low peptide of E’jiao in anemic model rabbits

2.2 阿胶低肽对小鼠负重游泳时间的影响

昆明种小鼠40只均分为4组，即阿胶灌胃（ig，5%阿胶水溶液，22.5 mL·kg-1）、低肽灌胃（ig，阿胶低肽22.5 mL·kg-1）、低肽注射（ip，注射用阿胶低肽2.5 mL·kg-1）、葡萄糖灌胃（ip，葡萄糖溶液2.5 mL·kg-1）组，每天给药1次，连续14 d。于末次给药物30 min后，将小鼠置于水深30 cm、水温（25±0.5）℃的水箱中游泳，鼠尾根部负荷自身5%体质量的铅皮。记录小鼠力竭时间（s）[2]，以判断抗疲劳能力。结果表明，各组均具有一定的抗疲劳作用趋势，但无显著差异（P＞0.05）。小鼠负重游泳测定结果见表2。

表2 小鼠负重游泳测定结果Tab 2 The results of load swimming test of mice

2.3 阿胶低肽对免疫低下模型小鼠脾重指数的影响

小鼠ip氢化可的松（25 mg·kg-1），每天1次，连续7d，以复制免疫低下小鼠模型。实验分为5组，即空白、模型、阿胶灌胃（ig，5%阿胶水溶液，22.5 mL·kg-1）、低肽灌胃（ig，阿胶低肽22.5 mL·kg-1）、低肽注射（ip，注射用阿胶低肽2.5 mL·kg-1）组。开始复制模型第2天起，各组分别给药，每天1次，连续6 d。给药后测定脾重和脾重指数（脾重指数＝脾重/体质量×100%[3]）。与模型组比较，阿胶灌胃、低肽灌胃、低肽注射组脾指数显著升高（P＜0.05）。结果表明，阿胶各种给药方式均有一定的免疫增强作用，但各种方法制取的阿胶制剂间没有差别。小鼠脾重指数测定结果见表3。

3 讨论

在家兔药效学指标测定中，与模型组比较，阿胶灌胃与低肽注射组均有良好的提升Hb、RBC、WBC的作用，低肽灌胃组对于Hb及RBC只有提升趋势但无显著意义。阿胶灌胃组与低肽注射组间WBC、RBC没有显著差别，但低肽注射组的Hb提升效果比阿胶灌胃组高；与空白组比较，阿胶灌胃组与低肽注射组均可以将Hb、WBC提升至正常水平，但均不能在短期内将RBC提升至正常水平，低肽灌胃组在短期内生血作用较差。其原因为低肽在胃内被降解为更小的分子，故作用下降，提示口服用低肽可能会对胃肠功能较差的患者起到良好作用。

表3 小鼠脾重指数测定结果Tab 3 The results of spleen weight index measurement of mice

在小鼠负重游泳时间测定实验中，与空白组比较，各组均有提升的趋势，但无显著性差异。分析原因，可能是因为给药时间较长（长达14 d），各组小鼠体质量均有较大幅度的提升，造成游泳时间延长。另外，由于葡萄糖可以转化为较多能量，故也可能造成空白组结果偏大。提示设计小鼠负重游泳实验时需要适当减少给药时间，并将空白组改为生理盐水。该设想需要进一步实验验证。

在小鼠脾重指数测定中，与模型组对照，各组均具有显著的对抗氢化可的松所导致的小鼠免疫抑制作用，但各组间无显著性差异；与空白组比较，各组均能回复到正常水平。提示阿胶药材、口服用低肽及注射用低肽均有一定的免疫增强作用。在本研究中，需要注意的是实验温度控制要求较高，若温度过低，复制模型时小鼠容易死亡。

[1]韩丽莎，张国民，杨玉梅，等.增血素口服液对苯肼致家兔溶血性贫血的影响[J].包头医学院学报，1999，15（2）:3.

[2]谢居乐，陈菊芳.对菊参抗疲劳耐缺氧作用的研究[J].中国药房，1995，6（2）:10.

[3]杨 卉，王 倩，齐志敏.体外免疫法制备狗脾抗结核特异性转移因子的实验研究[J].中国现代医学杂志，2000，10（9）:18.