2003－2008年我国实验猴BV抗体检测结果及抗体水平变化规律的分析

王吉，卫礼，巩薇，岳秉飞，贺争鸣

(中国药品生物制品检定所国家实验动物微生物、遗传检测中心，北京 100050)

研究报告

2003－2008年我国实验猴BV抗体检测结果及抗体水平变化规律的分析

王吉，卫礼，巩薇，岳秉飞，贺争鸣

(中国药品生物制品检定所国家实验动物微生物、遗传检测中心，北京 100050)

目的对近年来我国实验猴BV(猴疱疹病毒Ⅰ型)抗体检测结果进行比较分析，以了解我国实验猴BV感染情况及其抗体水平变化规律，为我国实验猴质量控制及标准化提供依据。方法根据国标中ELISA方法，对2003～2008年我国11个单位送检的2个品种猴血清进行BV抗体检测，并对检测结果进行统计分析。结果

检测的4612份猴血清中，有1843份BV抗体呈阳性，阳性率为39.96%;6年中检测猴群BV抗体阳性率基本在30%～50%。幼年(≤2岁)、青年(2.1～4.0岁)、成年(4.1～6.5岁)、老年(≥6.5岁)4个不同年龄段猴BV感染率分别为26.28%、31.53%、53.74%、87.27%。不同年龄感染率差异显著(P＜0.01)。雌猴BV感染率(35.91%)高于雄猴(34.93%)，但两者差异不显著(P＞0.05)。结论不同年龄猴BV感染率不同，随着年龄的增长BV感染率升高。

实验猴;B病毒抗体;酶联免疫吸附试验;血清阳性率

灵长类动物在形态学、生殖生理特性和生化代谢等方面与人类非常相似，是医学和生物学等各领域研究的理想实验动物［1］。随着分子生物学、医学等学科的不断发展，对猴的需求量也越来越大。每年用于医学、生物学领域研究的猴就达数万只。

B病毒(BV)(猕猴疱疹病毒Ⅰ型)是一种严重危害人类健康的病原体。猴感染BV后无明显症状，其感染率可达10%～60%。感染了BV的猴不仅严重影响实验结果，造成人力物力的极大浪费，而且饲养人员和实验人员可通过猴咬伤、抓伤或笼子剐伤而直接接触猴子的体液或唾液被感染，死亡率极高(达70%以上)［2］。幸存者也会留下神经后遗症，而且还可通过人传给人［1－3］。BV感染已成为影响实验猴的质量和人类健康的重要因素。因此，进行BV的定期监测，研究控制和根除猴群中BV，不仅有利于保证使用这些动物或其组织进行研究的人员的健康和安全，避免人力物力的极大浪费，而且保证了持续获得这些独特资源用于未来生物医学等的研究。

本实验室对2003～2008年猴BV感染检测结果进行比较，分析其抗体水平变化规律，以对国内实验猴BV的感染和质量控制提供可参考的数据。同时也为实验动物管理体系的完善、实验动物的标准化提供重要的依据。

1 材料与方法

1.1 主要材料

猴血清:2003～2008年全国7个地区、11个单位送检的4612份猴血清;单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV－1)(SM44株)抗原:本室制备冻存;山羊抗人IgGHRP来源:Sigma公司产品;SM 44阴阳对照血清:由本室制备冻存。

1.2 主要仪器

酶标仪:Thermo Multiskan MK3;37℃水浴箱:上海森信实验仪器有限公司DK－4500B型;37℃培养箱:WGP－600。

1.3 方法

根据国家标准进行操作［4］。对送检的猴血清，4000 r/min离心10 min，分离血清，冻存备用。对需要复检的血清进行56℃30 min灭活处理后复检。

1.4 统计方法

对实验数据用SPSS11.5统计软件进行卡方检验，P＜0.05为差异显著，P＜0.01为差异极显著，均具有统计学意义。

2 结果

2.1 猴B病毒抗体阳性率

6年来共检测猴血清4612份，每年血清抗体阳性率均不同，最低为32.46%，最高为48.29%。抗体阳性率与检测血清的份数没有相关性，其阳性率也没有随着时间的推移逐年升高或降低(见表1)。

表1 2003年～2008年猴B病毒抗体阳性率(%)Tab.1 The positive rate of BV antibody detection in the monkeys between 2003 and 2008(%)

2.2 不同品种猴B病毒抗体阳性率

食蟹猴和恒河猴抗体阳性率差异显著(P＜ 0.05)。血清抗体阳性率与送检血清数量没有相关性(见表2)。

表2 不同品种猴血清抗体阳性率比较Tab.2 Comparison of the positive rate of serologic antibody in the monkeys of different breeds

2.3 不同年龄血清B病毒抗体阳性率

无论是雌性还是雄性，其血清抗体阳性率随着猴年龄的增长而升高，不同年龄段抗体阳性率差异显著(P＜0.05)。幼年(≤2岁)、青年(2.1～4.0岁)和成年(4.1～6.5岁)、和老年(≥6.5岁)差异极显著(P＜0.01);成年和老年差异极显著(P＜0.01)。见表3。

不同年龄段雌、雄间血清抗体阳性率虽有不同，但差异无显著性(P＞0.05)。

表3 不同年龄和不同性别猴血清抗体阳性率比较Tab.3 Comparison of positive rates of BV antibody of the monkeys of different ages and sexes

2.4 曾经送检抗体呈阴性、1年之内再次送检的猴跟踪调查情况

其血清抗体阳性率的高低，因时间的长短而不同，最低的间隔1周，抗体阳性率为3%;最长的间隔时间为11个月，其抗体阳性率高达100%。每年重复送检猴的抗体阳性率统计结果见表4。

表4 历年重复检测动物及抗体阳性率比较Tab.4 Comparison of positive rates of BV antibody in the monkeys of repeated tests over the years

从检测结果看，猴群存在持续感染，被感染猴体内抗体也在持续产生。

3 讨论

目前，猴体内是否存在B病毒抗体或相关抗体已成为衡量猴质量的重要指标之一。本实验室检测猴群抗体阳性率一般在30%～50%之间，但也有个别的抗体阳性率低于20%或高达70%～80%，最高有的抗体阳性率竟达100%。自2003年以来，还没有检测到血清抗体100%阴性的猴群。

从本实验室检测结果看，随着猴年龄的增长，B病毒抗体水平呈上升趋势。抗体阳性的猴年龄越大，所得A值(OD490)越高。而且猴群在持续被感染。

从统计结果看，雌性BV感染率高于雄性，与文献［5－7］报道的相符;从近年的检测结果看，不同季节送检的猴，BV抗体水平变化差异不大;从来源看，南方地区送检猴BV抗体水平普遍高于北方地区。

从本实验室近几年的检测结果看，猴血清经过56℃30 min灭活处理后，可排除假阳性，使假阳性率降低。但血清经过灭活处理后，检测结果显示大部分血清灭活后A值高于灭活前A值。本研究还专门对200份猴血清灭活前后的检测结果进行了比较，结果显示200份血清中有71份灭活前A值高于灭活后A值，占总数的35.5%;有129份灭活后A值高于灭活前A值，占总数的62.5%。阴阳对照灭活后A值明显高于灭活前A值。证明猴血清经过56℃30 min灭活处理后，去除非特异性反应因子效果并不明显，而且会使大部分血清非特异性反应增强。

本研究是用人单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV－1) (SM44株)替代B病毒做抗原来查B病毒抗体，虽然不能完全体现B病毒抗体水平，但是贺争鸣等［6］用SM44株做抗原的ELISA方法和美国Bio Reliance公司采用B病毒抗原的ELISA法进行比较，检测结果符合率为98.02%(差异无显著性)，所以一定程度上也比较真实的反映了我国现有实验猴B病毒的抗体水平及其变化规律。文献［5，7－8］也报道了用人单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV－1)替代B病毒抗原来检测猴群中的B病毒抗体，且能比较真实地反应猴群中B病毒的感染情况。

［1］Huff JL，Barry PA.B－virus(Cercopithecine herpesvirus 1) infection in humans and macaques:potential for zoonotic disease［J］.Emerg Infect Dis，2003，9(2):246－250.

［2］Focher F，Lossani A，Verri A，et al.Sensitivity of Monkey B virus(Cercopithecine herpesvirus 1)to antiviral drugs:role of thymidine kinase in antiviral activities of substrate analogs and acyclonucleosides［J］.Antimicrob Agents Chemother，2007，51 (6):2028－2034.

［3］饶军华，刘晓明，王海英，等.人工驯养条件下食蟹猴B病毒抗体水平变化规律研究［J］.中国比较医学杂志，2007，17 (1):12－14.

［4］GB/T14926.50－2001［S］、GB/T14926.60－2001［S］、GB/ T14926.22～29－2001［S］.

［5］周亚敏，李绍东，段幸生.野捕恒河猴(Macaca mulatta)B病毒相关抗体调查［J］.中国实验动物学杂志，1998，8(1):7－9.

［6］贺争鸣，卫礼，巩薇，等.猴B病毒抗体ELISA检测方法的建立和应用研究［J］.中国实验动物学报，2003，11(3):161－164.

［7］Bleweet EF，Saliki JT，Eberle R.Development of a competitive ELISA for detection of primates infected with monkey B virus (Herpesvirus simiae)［J］.J Virol Methods，1999，77(1):59－67.

［8］Ohsawa K，Black DH，Sato H，et al.Sequence and genetic arrangement of the UL region of the monkey B virus (Cercopithecine herpesvirus 1)genome and comparison with the UL region of other primate herpesviruses［J］.Arch Virol，2003，148(5):989－997.

Analysis of the BV Antibody Detected in Chinese Laboratory M onkeys between 2003 and 2008 and the Regularity of Its Variation

WANG Ji，WEI li，GONG Wei，YUE Bing－fei，HE Zheng－m ing
(National Institute for the Control of Pharmaceutical and Biological Products，National Center for Microbiological and Cenetic Monitoring of Laboratory Animals，Beijing 100050，China)

ObjectiveTo determine the monkey B virus(BV)infection condition and variation of the BV antibody levels in Chinese laboratory monkeys，and to provide the basis for the quality control and the standardization of laboratory monkeys in China.M ethods The BV antibodies in the serum of 2 breeds of monkeys from 11 units in our country were assayed according to GB ELISA，and a statistical analysis of the detection results was carried out.Results 4612 serum samp les of monkeys were tested for BV antibody from 2003 to 2008，in which 1843 were positive，with a positive rate of 39.96%.During the 6 years，the positive rate among monkey groups was between 30%–50%.The BV infection rates of monkeys at 4 different ages were as following:26.28%in cub(≤2years old)，31.53%in juvenile(2.1～4.0 years old)，53.74%in adult(4.1－6.5 years old)and 87.27%in senile(≥6.5 years old)monkeys.There were significant differences in the infection rates among the 4 groups(P＜0.01).The BV infection rate of female monkeys was 35.91%，slightly higher than that of the males(34.93%)，with a non－significant difference between them(P＞0.05)..Conlusions The infection rate of BV is different in monkeys of different ages，increasing with the age.

Laboratory monkey;BV antibody;ELISA;Seroprevalence

R－33

A

1005－4847(2010)03－0268－04

2009－07－21

王吉(1974－)，女，助理研究员，研究方向:微生物学和免疫学。E－mail:wj_nd_jds@yahoo.com.cn

贺争鸣(1957－)，男，研究员，博士，研究方向:微生物学和免疫学。E－mail:zhengminghe57@163.com