胎儿安方对先兆流产大鼠β-HCG、TXB2及6-Keto-PGF1 α水平的影响

张 瑾 袁惠霞 西安医学院第二附属医院产科 (西安 710038)

胎儿安方是导师袁惠霞教授根据多年中医药保胎经验,依据“凡出血,必有瘀血”、“血以流为贵,以滞为患”、“瘀血不去,新血不得归经”等理论,在寿胎丸基础上加减变化而来,具有益气补肾,和血安胎之效,且临床运用疗效显著。为了探索胎儿安方用于先兆流产的保胎作用机理,我们设立了动物实验,现将实验结果总结如下:

1 材料与方法

1.1 实验动物及来源 选取清洁级SD雌性大鼠 60只(未孕 ,体重 180～220g,周龄 10W～12W)和清洁级 SD雄性大鼠 30只,体重 230g～250g。由第四军医大学实验动物中心提供。

1.2 实验药品

1.2.1 药品及试剂 胎儿安方:菟丝子 15g,黄芪 20g,川断、丹参、白芍、杜仲各 10g,川芎、苏梗各6g,煎成浓缩液,放冰箱 4℃保存;黄体酮注射液:10mg/mL浙江仙居制药股份有限公司生产;催产素注射液:10u/mL安徽丰原药业有限公司马鞍山药厂

1.3 实验方法及步骤

1.3.1 分组及给药:将雌性受孕大鼠随机分为 6组,每组10只。 A组:空白组;B组:模型组;C组:胎儿安方小剂量组,4.74g/kg/d灌胃;D组:胎儿安方中剂量组 9.48g/kg/d灌胃;E组:胎儿安方大剂量组,18.96g/kg/d灌胃;F组:黄体酮组,6mg/kg隔天肌注。

从妊娠第 5天起,B组每只按 2mL/d的剂量灌服生理盐水;C、D、E组分别灌服胎儿安方小、中、大剂量,每日 1次,共 4次(大鼠药物用量按人与动物体表面积的等效比值表折算[3]);F组隔天肌注黄体酮 1次,共 2次。孕 9～10d采用张晋峰等[2]的报道,用针刺加催产素的方法建立先兆性流产动物模型,孕11d起按原剂量与方法继续用药 3d,孕 14d将大鼠处死后采用放免法检测血清β-HCG、TXB2及 6-Keto-PGF1 α的含量。

统计学处理 采用 SPSS13.0统计软件,采用均数±标准差表示,采用 t检验和χ2检验 ,P＜0.05为有统计学意义。

2 实验结果

2.1 造模前后各组大鼠体重改变 经妊娠及各种不同的方法给药后,各组大鼠在体重方面较前有明显增加;在活动方面,A、D、E、F组的大鼠较 B、C组明显增多;在进食量方面,A、D、E、F组大鼠也较 B、C组明显增多;经针刺与催产素共同作用的 B、C、D、E和 F组大鼠均出现不同程度的阴道出血,但未见妊娠产物排出,说明应用该方法造模是成功的。造模后,因操作等方面原因 ,B组 1只大鼠完全流产,E组 1只大鼠造模失败,未流产,D组 1只大鼠针刺时意外死亡,剩余大鼠均造模成功,故后期实验剔除以上 3只大鼠。造模前后各组大鼠体重改变见表 1:

表1 各组大鼠造模前后体重比较()

表1 各组大鼠造模前后体重比较()

组别 n 造模前体重(g) 造模后体重(g)A组 10 243.0014.18 263.0010.59 B组 9 235.5517.40 251.1112.69 C组 10 228.0019.32 256.0021.71 D组 9 224.4412.36 247.7717.16 E组 9 230.0021.21 247.7719.22 F组 10 221.0012.87 246.0018.37

表1结果显示:各组大鼠造模后体重较造模前均有增高,其中 D、E组增高较多,C、F组增高较少,B组最少,但经统计学处理(t检验),各组大鼠造模前后体重无差异(P＞0.05)。组间比较,B、C、D、E、F组与正常妊娠 A组造模前体重、造模后体重分别比较,均无差异(P＞ 0.05)。

2.2 各组大鼠子宫湿重、胚胎数、子宫内有瘀血例数比较解剖后肉眼见 A组正常妊娠的 10只大鼠子宫呈结节状膨大,色红润,周围血供丰富,解剖后见胚胎完好;其余 5组大鼠子宫膨大的结节明显小于 A组,而且胚胎之间界限不明显,有些胚胎有明显瘀血痕迹,有些大鼠子宫无膨大结节,形状似未孕大鼠,但子宫周围可见明显充血;但胎儿安方各剂量组大鼠子宫有瘀血例数较 B组少,见表 2:

表2 各组大鼠子宫湿重、胚胎数、子宫内有瘀血例数比较()

表2 各组大鼠子宫湿重、胚胎数、子宫内有瘀血例数比较()

注:与 E组相比,△ P＜0.05

组别 n 子宫湿重(g) 胚胎数(个)子宫内有瘀血例数(%)A组 10 1.3470.154 9.401.65△ 0(100)B组 9 1.2030.153 4.891.83 6(66.7)C组 10 1.2240.203 7.001.70 5(50)D组 9 1.3460.164 10.113.02 4(44.4)E组 9 1.3220.152 11.672.78 3(33.3)F组 10 1.2760.179 8.202.86△ 4(40)

表2结果显示:各组大鼠的子宫湿重和子宫内有瘀血例数相比,均无差异(P＞0.05);E组较 F组和 A组的孕胎个数多,相比有差异(P＜0.05)。

2.3 各组大鼠血清中β-HCG含量对比 见表 3。

表3 各组大鼠血清中β-HCG含量对比()

表3 各组大鼠血清中β-HCG含量对比()

注:与 B组相比 ,△P＜0.05,▲P＜0.01;与 F相比,◇P＞ 0.05

组别 n β-HCG(mIu/mL)A组 10 15.182.24▲B组 9 10.872.56 C组 10 12.931.61△◇D组 9 13.692.09△◇E组 9 14.122.61◇F组 10 14.451.83▲

表3标明,模型组大鼠血清β-HCG含量较空白组明显降低 (P＜0.01);与模型组相比 ,用药后各组大鼠血清β-HCG均有上升(P＜0.05),其中西药组上升较明显(P＜0.01);但中药各剂量组与西药组相比无明显差异(P＞0.05),中药各剂量组之间也无明显差异(P＞0.05)。

2.4 各组大鼠血清中 TXB2及 6-Keto-PGF1 α含量对比见表 4。

表4 各组大鼠血清中 TXB2及 6-Keto-PGF1α含量对比()

表4 各组大鼠血清中 TXB2及 6-Keto-PGF1α含量对比()

注:与 B组相比,△P ＜0.05,▲P＜0.01;与 F相比,◇P＜0.05

A组 10 269.4440.69▲◇ 254.4722.95▲B组 9 355.4237.54 188.7149.28 C组 10 307.8725.50▲ 232.9432.04△D组 9 284.2329.47▲◇ 241.7727.22△E组 9 289.3319.07▲◇ 244.9721.08▲F组 10 317.9635.24△ 242.3551.02△)

TXB2方面:中药各剂量组及西药组大鼠体内 TXB2含量较模型组明显降低(P＜0.05或 P＜0.0l),但中药中、大剂量组较西药组下降明显(P＜0.05);中药各剂量组之间无明显差异(P＞0.05)。说明胎儿安方有降低体内 TXB2的作用,其效果较黄体酮效好。

6-Keto-PGF1α方面:中药各剂量组与西药组血浆中 6-Keto-PGF1α的含量较模型组均有升高(P＜0.05或 P＜0.0l),其中中药大剂量组升高较明显(P＜0.01);但中药各剂量组与西药组相比无明显差异(P＞0.05);中药各剂量组之间相比也无明显差异(P＞0.05)。说明胎儿安方有升高体内 6-Keto-PGF1 α的作用 ,其效果与黄体酮相当。

2.5 子宫病理切片 光镜下观察 A组正常妊娠大鼠子宫内蜕膜组织正常,未见充血坏死,胚胎发育正常;B组可见胎盘部分充血坏死,绒毛结构模糊,面积减少,部分绒毛纤维素化,绒毛间隙增宽,有炎细胞渗出(以中性粒细胞为主);中药治疗组蜕膜完整 ,绒毛面积增宽,间隙变窄,充血及炎细胞渗出较B组减少。

3 讨 论 导师袁惠霞教授在治疗先兆流产过程中发现,大部分先兆流产患者除阴道少量出血及小腹痛外,B超提示常伴有宫内少量积血,或化验发现抗心磷脂抗体为阳性。依据肾为先天之本,元气之根,主人体生长发育、生殖,胞络系于肾,肾虚则胎失所系、冲任不固,故安胎先补肾 ,肾气足胎自安;而人体又是一个有机整体,有赖于气血的正常运行,气血贵流不宜滞,以流为贵、以通为顺,今血行于脉外而不归经,必有出血,凡出血必有瘀血,瘀血阻于胞脉,影响气血运行,再次成为致病因素,导致血瘀气滞,瘀血不去,新血不能归经,流于脉外而妄行。对于此类症候,导师辩证为肾虚血瘀 ,并创导了安胎必和血,血和瘀去胎自安的理论,于补肾药中加入活血化瘀之品,组方胎儿安方。本方组成为菟丝子 15g,川断、丹参、白芍、杜仲各 10g,黄芪 20g,川芎、苏梗各 6g。

方中菟丝子味辛甘平,入肝肾经,治肾虚体弱,可平补肾阴肾阳,固冲任。罗元恺认为“菟丝子又补阳又补阴,不辛燥,不滋腻,为安胎首选”。哈荔田认为在补肾安胎药中选用菟丝子、杜仲、川断等,可于阴中求阳,水中补火,守而能走,效果满意。配伍川断滋肾育胎,共为君药。黄芪长于补脾肺之气,为补气要药,补而不滞,且能升举阳气,维系胞脉,固摄胎元;丹参性寒味苦,寒能凉血,功善活血化瘀,能祛瘀生新而不伤正,其活血养血作用广为医者所用。《日华子本草》记载丹参可“破宿血,补新生血,安生胎,落死胎”,川芎辛散温通,为血中之气药,能行气止痛安胎 ,三者共为臣药,共奏和血活血、行瘀安胎之效。白芍味苦酸微寒,既可养血柔肝 ,又可缓急止痛安胎,与杜仲共为佐药。苏梗味辛甘,理气散郁,止痛安胎为使药。众药相伍,益气补肾则肾精足胎自安,和血使瘀去血行,新血得生,改善胎儿供血,使胎儿正常发育至足月而娩。

现代药理研究[4～5]证明,补肾益气药有促黄体功能的作用,能促进垂体释放黄体生成素,且能直接或间接作用于卵巢,促使孕酮合成和分泌。活血化瘀药则具有改善血液循环,扩张血管、改善微循环和血液的粘聚状态、调节血小板功能等作用,另外还可提高机体免疫功能。胎儿安方中菟丝子具有雌激素样活性,可促进卵巢黄体的形成,促进子宫及胚胎发育;黄芪对机体免疫功能有调节作用,并可升高白细胞;丹参具有明显的对抗血栓形成作用,能改善血瘀患者微循环和血液流变学特性,促进血液循环,并有缓解平滑肌痉挛的作用;川芎所含的阿魏酸小剂量可促进子宫平滑肌舒张;白芍具有抗血栓,增强免疫功能的作用;杜仲煎剂能松弛子宫平滑肌,使其恢复正常状态。苏梗有提高机体的非特异性免疫功能。正是由于这些药物协同作用的结果,才使全方能增加体内 β-HCG含量,改善 TXB2及6-Keto-PGF1α二者的平衡 ,从而改善微循环,扩张血管,改善子宫缺血缺氧状态,起到防治先兆流产的作用。

[1]乐 杰.妇产科学 [M].北京:人民卫生出版社,2004,6:91.

[2]沈映君.中药药理学 [M].上海:上海科技出版社,1997,1:12.

[3]张晋峰,张玉芬,刘光珍,等.孕安冲剂治疗先兆流产的临床及实验研究 [J].中国中西医结合杂志,2000;20(4):253.

[4]李承珠,林嘉宝,杨诗春,等.丹参素对血小板释放血管收缩物质的影响[J].中西医结合杂志.1984,4(9):565.

[5]侯家玉.中药药理学 [M].北京:中国中医药出版社.2002,1:132.