苦参碱对豚鼠离体胆囊平滑肌条收缩功能的影响*

苏丽梅 戴贵东 聂黎虹 丁 娟 周 旭△ 宁夏医科大学研究生学院(银川 750004)

苦参碱(Matrine)是从豆科槐属植物苦豆子中提取的单一生物碱,化学分子式为 C15H24N20。近年来研究发现其有广泛的药理作用和临床功能,其主要药理作用有抗病毒、抗炎、抗肿瘤及对中枢神经系统的镇静、镇痛解热降温和强心、降压、抗心率失常等作用[1]。

文献报道[2]苦豆子水煎剂可增高豚鼠胆囊肌条的张力,加快收缩频率及减少收缩波平均振幅且酚妥拉明、异搏定可部分阻断苦豆子对胆囊肌条的作用,表明其对胆囊肌条的作用与2受体、Ca2+有关。本实验进一步探讨苦参碱对豚鼠离体胆囊平滑肌的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 选普通级医学实验动物三色毛豚鼠(由宁夏医科大学动物实验中心提供),32只,体重 300～450g,雌雄不限。

1.2 药品 (1)苦参碱(宁夏博尔泰力药业股份有限公司提供 ,批号:20030501),系白色结晶样粉末,纯度 99.5%,实验系列浓度为 1.00× 10-5、 1.10× 10-4、 2.10× 10-4、 (mmol/L),(2)Krebs液:每次实验时配制新鲜溶液 3L,成分(mmol/L):NaCl 120.6,KCl5.9,NaH2PO41.2,CaCl22.5,Mg Cl21.2,NaHCO315.4,C6H12O611.5。试剂均为市售试剂。(3)拮抗剂:阿托品(天津药业集团新郑股份有限公司,批号:0804201),浓度 10-6mmol/L,苯海拉明(天津药业集团新郑股份有限公司,批号:0804121),浓度 10-6mmol/L,异搏定(上海禾丰制药有限公司,批号 071201),浓度 10-7mmol/L,酚妥拉明 (Sigma公司 ,批号98k4081)浓度 10-6mmol/L,六烃季铵 (Sigma公司,批号25k1028)浓度 10-5mmol/L,消炎痛 (Sigma公司,批号88k0666),浓度 10-6mmol/L。

1.3 实验器材 BL-420E+生物机能实验系统(成都泰盟电子有限公司),FT-100生物张力传感器(成都泰盟电子有限公司),PHS-25实验室 PH计(上海理达仪器厂)。高级恒温水浴泵(上海市实验仪器厂),精密移液器(上海求精生化试剂仪器有限公司),方正电脑。

1.4 方 法

1.4.1 实验方法:猛击豚鼠头部致昏,迅速摘取胆囊,用 Krebs液漂洗干净。将胆囊固定在盛有石蜡并充满 Krebs液的培养皿中,向培养皿中持续供给 95%O2和 5%CO2混合气体。用锋利手术刀沿胆囊纵轴切取肌条,每个胆囊制备 3个肌条,共 96条,观察苦参碱对胆囊肌条张力、收缩频率及收缩幅度的影响;观察不同拮抗剂对苦参碱的影响。将肌条置于 5mL灌流肌槽中,记录肌条的等长收缩活动。药物采用累积加药法,加药间隔 2min,容量 50uL,加入拮抗剂后 2min再依次加入苦参碱溶液。以给药前胆囊张力(g)和收缩波平均振幅(mm)、收缩频率(c/min)作为对照值 ,给药后的数值作为效应值。药物浓度是指溶于肌槽内 5mL Krebs液之后的最终浓度。

2 结 果

2.1 苦参碱对豚鼠离体胆囊肌条的作用肌条自发活动平稳后,每相隔 2min累积加入苦参碱溶液,累积浓度为 1.00× 10-5、 1.10× 10-4、 2.10× 10-4(mmol/L),胆囊肌条张力增高,收缩频率减慢、收缩波平均振幅增高。 (表 1)

表1 苦参碱对豚鼠离体胆囊平滑肌肌条收缩活动的影响(,n=12)

表1 苦参碱对豚鼠离体胆囊平滑肌肌条收缩活动的影响(,n=12)

注:与对照组比,△P＜0.05,▲P＜0.01

苦参碱浓度(mmol/L)项 目 对照1.00× 10-5 1.10× 10-4 2.10× 10-4张力(g) 1.00±0.05 1.04±0.04△ 1.19±0.05▲ 1.34±0.05▲振幅 (mm) 5.70± 1.14 5.67± 1.15 6.70± 1.36 7.67± 1.83▲频率 (c/min) 3.00± 0.74 2.83± 0.71 2.58± 0.67 2.25± 0.75△

2.2 拮抗剂对苦参碱效应的影响 消炎痛、阿托品、异搏定等均可阻断苦参碱增高胆囊肌条张力作用,酚妥拉明可阻断苦参碱升高收缩波平均振幅的作用,六烃季铵和苯海拉明对胆囊肌条活动无明显影响。 (表 2和表 3)

表2 拮抗剂加苦参碱(1.10×10-4mmol/L)对豚鼠离体胆囊平滑肌条收缩活动的影响(,n=12)

表2 拮抗剂加苦参碱(1.10×10-4mmol/L)对豚鼠离体胆囊平滑肌条收缩活动的影响(,n=12)

注:与苦参碱组比,△P＜0.05,▲P＜0.01

组 别 张力(g) 振幅(mm) 频率(c/min)苦参碱 1.19± 0.05 6.70± 1.36 2.58± 0.66阿托品+苦参碱 1.12±0.07 7.25±1.92 2.83± 0.93酚妥拉明+苦参碱 1.20±0.06 4.91±2.10△ 3.41±1.24异搏定+苦参碱 1.16±0.06 5.83±2.03 3.25± 1.48六烃季铵+苦参碱 1.14±0.05 6.08±2.93 2.91±0.99苯海拉明+苦参碱 1.16±0.07 5.08±2.53 3.16±0.71消炎痛+苦参碱 1.10±0.07▲ 6.67±2.60 2.58±0.79

表3 拮抗剂加苦参碱(2.10×10-4mmol/L)对豚鼠离体胆囊平滑肌条收缩活动的影响(,n=12)

表3 拮抗剂加苦参碱(2.10×10-4mmol/L)对豚鼠离体胆囊平滑肌条收缩活动的影响(,n=12)

注:与苦参碱组比,△P＜0.05,▲P＜0.01

组 别 张力(g) 振幅(mm) 频率(c/min)苦参碱 1.34± 0.05 7.67± 1.83 2.25± 0.75阿托品+苦参碱 1.27±0.07△ 7.33±2.05 2.83±1.03酚妥拉明+苦参碱 1.34±0.06 4.75±2.41▲ 3.25±1.60异搏定+苦参碱 1.27±0.06△ 5.67±2.57 3.25±1.65六烃季铵+苦参碱 1.31±0.05 6.00±2.21 2.91±1.37苯海拉明+苦参碱 1.32±0.07 6.00±2.33 2.58±1.79消炎痛+苦参碱 1.25±0.09▲ 6.83±2.32 2.17±1.26

3 讨 论 胆囊呈节律性收缩和舒张,以储存、浓缩和排出胆汁。目前关于胆石症的病因和发病机制仍不清楚,但普遍认为胆囊运动功能的减弱在胆石症疾病中起非常重要的作用[3]。胆囊收缩功能异常 ,排空延迟,使得胆囊内过饱和胆汁形成的胆固醇结晶不能被及时的排入肠道,聚集成石,这是胆石形成机制的经典学说。 Jazrawi[4]等证实:肝胆汁在进入小肠前大部分先进入胆囊并很快离开胆囊,即使在消化间期依然存在,胆囊内这种胆汁成分的不断更换洗刷作用,不利于胆石形成,而胆石症患者的这种运动明显减弱。丁夷峰等[5]通过对无痛性胆囊结石患者脂餐前后的胆囊容积变化研究发现,研究组空腹胆囊容积和脂餐后剩余容积均较正常组增大,且排空率下降,随餐后时间延长 ,正常组 80%为持续排空,而研究组 48.9%进入再充盈期,说明存在明显的胆囊排空功能障碍。

对于胆石症的治疗,内外科均有疗效,其中中药治疗有其独到之处。按照中医辨证论治的理论,采用中医药对症治疗胆石症,各种方法都取得了良好的疗效[6]。实验证明:芒硝的主要成分可使胆管括约肌松弛,胆囊收缩 ,利于胆汁、结石排出[7];单味中药金钱草、木香、郁金能促进胆囊收缩,胆汁流量增加[8];威灵仙能促进肝内胆汁分泌,松弛 Oddi括约肌[9]。

西北特色药物苦豆子是传统中药,具有清热解毒、祛风燥湿、止痛杀虫等作用,临床用来治疗湿疹[10]及放射性皮肤[11]损伤等。苦豆子中含有多种生物碱,苦参碱是苦豆子中含有的生物碱之一。研究证明[12]:高胆红素血症小鼠经灌胃口服苦参碱75mg/kg和 100mg/kg后,血清总胆红素 (TBIL)、结合胆红素(DBIL)和对照组比较均有显著下降;血清谷丙转氨酶(SGPT)和谷草转氨酶(SGOT)也均有显著降低。证明口服苦参碱具有明显的降酶退黄作用。苦参碱还能明显对抗组胺、乙酰胆碱和氯化钡兴奋豚鼠、大鼠离体气管平滑肌的作用[13]。

本课题组前期研究发现[2]:苦豆子水煎剂可明显改善豚鼠离体胆囊平滑肌的收缩功能,苦豆子水煎剂对豚鼠胆囊平滑肌的作用是通过阻断平滑肌细胞膜上的 M受体和肾上腺素能α受体。本实验结果显示:苦参碱可使豚鼠离体胆囊平滑肌条收缩张力增高,频率减少,收缩波平均振幅升高,其作用可被阿托品、异搏定、酚妥拉明、消炎痛部分阻断,苦参碱对平滑肌条的作用,可能与胆囊平滑肌细胞膜上的 M受体、肾上腺素能α受体、Ca2+通道和前列腺素受体有关;六烃季铵和苯海拉明不阻断苦参碱的作用,表明其作用与壁内神经节受体和组胺 H1受体无关。有关苦参碱对豚鼠胆囊平滑肌的作用机理尚需进一步的研究。

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[4]Jazrawi RP,Pazzi P,Perroni M L,et al.Postprandial gallbladder motor function:refilling and turnover of bile in health and in choleLithiasis.Gastroenterology,1995,109:582.

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