降糖灵颗粒中马钱苷的含量测定

李成舰，夏新华

（1.湖南环境生物职业技术学院，湖南 衡阳 420001；2.湖南中医药大学药学院，湖南 长沙 410208）

降糖灵颗粒系由山茱萸、菟丝子、丹参等组方制备而成，临床用于治疗肾性糖尿病具有良好的疗效。为控制其质量，对该处方制剂中重要中药——山茱萸中的主要药理活性成分马钱苷进行含量测定，以确保该新制剂的质量。

1 实验材料

1.1 药物

马钱苷对照品 （中国药品生物制品检定所，060809）；甲醇与乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯；山茱萸等药材（均购自湖南省三湘中药饮片有限公司，山茱萸按照药典方法测得含量为0.66%，符合规定要求[1]）。

1.2 仪器

Waters 1525高效液相色谱仪，Waters 2487型紫外检测器 （美国），Breeze工作站，C-R3A数据处理器；MA11O电子分析天平（上海天平仪器厂）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件的选择[1，3]

kromasil bt14764 C18色谱柱 （250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈-水（9∶91）；检测波长：240 nm；流速：1.0 mL/min；柱温：30℃。在此条件下马钱苷的理论塔板数在3 000以上，分离度符合要求。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取在五氧化二磷中干燥48 h的马钱苷对照品10.0 mg，用80%的甲醇定溶于50 mL量瓶中，精密量取2 mL置于10 mL量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀即得（每1 mL含马钱苷40μg）。

2.3 供试品溶液的制备[2-4]

取本品适量，研细，取细粉约1.5 g，精密称定，置于25 mL量瓶中，加80%甲醇稀释至刻度，称质量，置于三角烧瓶中超声提取30 min，称质量，补充减少的溶剂，摇匀，过0.45μm的微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.4 线性关系的考察

分别精密量取对照品溶液 4、6、8、10，12 μL 进样，测定其峰面积积分值，以进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归直线方程为

Y=1857X-1430，r=0.9997

结果表明马钱苷在160～480ng范围内具有良好的线性关系。

2.5 干扰试验

取缺山茱萸的阴性样品适量，照供试品溶液的制备方法制备即得。分别精密量取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液各10μL，按照上述色谱条件测定。供试品色谱图中，在与马钱苷对照品色谱图相应的位置上有一相同的色谱峰，而阴性样品色谱图中，在与马钱苷对照品相应位置上无峰，说明阴性无干扰，见图1。

图1 干扰试验的HPLC图谱

2.6 精密度试验

精密量取对照品溶液10μL，重复进样6次，测定其峰面积积分值。6次峰面积积分值的RSD为0.8%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验

分别精密量取同一供试品溶液10μL，于0、1、2、4、8、24h进样，测定其马钱苷峰面积积分值。结果表明，供试品溶液在24h内峰面积积分值的RSD为0.5%，说明该制剂在24h内性质稳定。

2.8 重复性试验

取同一批号样品约1.5g，精密称定，共6份，按“2.3”项下方法制备溶液。分别精密量取此溶液和对照品溶液10μL进样，测定其马钱苷含量。得平均含量为5.47×10-4g/g，RSD为0.4%。表明方法的重复性好。

2.9 回收率试验

精密称取已知含量的样品 （含量为5.47×10-4g/g）约0.75g，共6份，分别精密加入马钱苷对照品溶液（200 μg/mL）2mL，然后按“2.3”项下方法制备溶液，并进样10μL测定含量，计算，得平均回收率为99.4%，RSD为 2.5%，见表 1。

表1 回收率试验结果

2.10 样品的测定

按拟定的含量测定方法，测定3批样品中马钱苷的含量，重复测2次，测定样品中马钱苷的平均含量为5.45×10-4g/g。 结果见表 2。

表2 样品中马钱苷的含量测定结果 （10-4g/g）

3 结论

2005版药典的药材山茱萸中马钱苷的含量测定中其流动相为乙腈-水（15∶85）[1]20，但是对于该复方的含量测定不适合；本实验考察了流动相甲醇和水的配比为15∶85、13∶87、11∶89、10∶90、9∶91 以及 8∶92 等， 最终确定流动相为乙腈-水（9∶91）为最佳。

2005版药典测定山茱萸中马钱苷的含量的提取方法是回流1h；而以参考资料来看，超声提取方法效果更好[2]，故本实验以超声提取和药典回流提取方法比较，得供试品溶液的制备方法以超声30min为佳。

该含量测定方法简便易行，重复性好，可以作为降糖灵颗粒中马钱苷的质量控制。

[1]中华人民共和国药典2005版[S].北京：化学工业出版社，2005：20.

[2]晏桂敏，林燕飞，孙静芸，等.山茱萸中马钱苷含量测定的样品处理方法改进[J].中国药业，2005，14（10）：37-38.

[3]侯 放.高效液相色谱法测定杞菊地黄口服液中马钱苷的含量[J].长春中医药大学学报，2009，25（6）：962-963.

[4]戴 冰，王诚元，邹双华，等.不同来源山茱萸中马钱苷含量的测定[J].湖南中医学院学报，2006，26（1）：21-22.