丹槐银屑浓缩丸对小鼠银屑病模型的病理实验研究

王学军 陶以成 刘长发

1 黑龙江省中医研究院（哈尔滨 150036）

2 黑龙江中医药大学在读博士（哈尔滨 150040）

3 黑龙江中医药大学在读博士后（哈尔滨 150040）

丹槐银屑浓缩丸对小鼠银屑病模型的病理实验研究

王学军1陶以成2刘长发3

目的验证丹槐银屑浓缩丸的药效，为其临床应用提供试验依据。方法采用小鼠阴道上皮细胞有丝分裂模型、尾部鳞片表皮模型，观察丹槐银屑浓缩丸对小鼠阴道上皮细胞有丝分裂及尾部鳞片表皮细胞分化的影响。结果丹槐银屑浓缩丸能显著抑制小鼠阴道上皮细胞的有丝分裂，促进小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成。结论丹槐银屑浓缩丸具有抑制银屑病小鼠模型阴道上皮有丝分裂，促使小鼠动物模型尾部鳞片颗粒层形成的作用。

丹槐银屑浓缩丸 小鼠阴道上皮细胞有丝分裂模型 小鼠尾部鳞片表皮模型

1 黑龙江省中医研究院（哈尔滨 150036）

2 黑龙江中医药大学在读博士（哈尔滨 150040）

3 黑龙江中医药大学在读博士后（哈尔滨 150040）

银屑病是一种以泛发性、顽固性、易复发性为特点的慢性炎症皮肤角化落屑性疾病。本实验根据其作用及功效进行试验，考察其对银屑病小鼠动物模型 （小鼠阴道上皮细胞有丝分裂和小鼠尾部鳞片颗粒层形成实验）的影响，为该药疗效及临床用药提供科学依据。

1 材料

1.1 药物与试剂 丹槐银屑浓缩丸药物组成为丹参、槐花、柴草、赤芍、地黄、黄连、白鲜皮、大青叶、鸡血藤，功能清热解毒、凉血活血、祛屑止痒，适用于血热型银屑病;由黑龙江省中医研究院制剂室提供。郁金银屑片，功能疏通气血、软坚消积、清热解毒、燥湿杀虫，用于银屑病的治疗;由西安正大制药有限公司提供。秋水仙碱由西双版纳药业有限责任公司提供;己烯雌酚由天津金耀氨基酸有限公司提供。

1.2 实验动物 昆明种小白鼠，清洁级，体重17～29g，雌雄各半，由吉林大学基础医学院动物实验中心提供 [合格证号SCXK-（吉）2003-0001];机制鼠料块由哈尔滨兽医研究所实验动物中心提供（合格证号黑动字P001001004）。

1.3 仪器 电子分析天平，载玻片，光学显微镜。

2 方法与结果

2.2 对模拟银屑病模型小鼠阴道上皮细胞有丝分裂的影响取雌性小鼠50只，腹腔注射己烯雌酚0.2mg/只，每日1次，连续3d，使小鼠处于雌激素期。第4日将小鼠随机分为5组：丹槐银屑浓缩丸高、中、低剂量组、郁金银屑片阳性对照组和模型组，每组10只。另取雌性小鼠10只，作为空白对照组。给药组分别在每日上午8：00灌胃给予7.9、4.1、2.0g/kg丹槐银屑浓缩丸和0.8g/kg郁金银屑片，给药剂量0.2mL/10g;模型组和空白对照组给予同体积生理盐水，每日1次，连续5d。第5日末次给药1h后，各组小鼠腹腔注射秋水仙碱15mg/kg，使细胞有丝分裂周期停滞于有丝分裂中期，便于计数。5h后处死小鼠，取阴道标本，用10%甲醛固定，石蜡包埋，HE染色，用光学显微镜（×400）观察有丝分裂情况，计数300个基底细胞中的有丝分裂数，计算有丝分裂指数（每100个基底细胞有丝分裂数）。结果见表1。模型组与空白对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.01），表明造模成功。与模型组比较，各给药组较模型组阴道上皮细胞分裂指数明显降低（P＜0.05或0.01）。肉眼观察活体小鼠阴道口组织空白对照组色泽鲜红，厚而湿润，而给药组色暗，薄而干燥。光镜下观察，可见注射过己烯雌酚的小鼠阴道上皮呈多层上皮，出现角化，证明属于雌激素周期的阴道上皮。模型组阴道组织被覆分化良好的鳞状上皮，表面角化，基底层可见多个处于核分裂期细胞;阳性对照组和丹槐银屑浓缩丸组阴道组织被覆分化良好的鳞状上皮，表面角化，但基底层可见少量处于核分裂期细胞。病理结果见图1。

表1 丹槐银屑浓缩丸对雌性周期小鼠阴道上皮细胞分裂指数的影响 （%，±s）

表1 丹槐银屑浓缩丸对雌性周期小鼠阴道上皮细胞分裂指数的影响 （%，±s）

与模型对照组比较,*P＜0.05,**P＜0.01;与空白对照组比较,△P＜0.05，△△P＜0.01;与阳性对照组比较，▲P ＜0.05。下同

n组 别空白对照组丹槐银屑浓缩丸高剂量组丹槐银屑浓缩丸中剂量组丹槐银屑浓缩丸低剂量组阳性对照组模型对照组10 10 10 10 10 10剂量（g/kg）-7.9 4.1 2.0 0.8-基底层分裂相细胞数9.70±2.89 25.01±3.95**29.02±4.98*31.50±6.01 29.03±5.91*35.65±3.90△

图1 小鼠阴道上皮有丝分裂光镜病理图片

2.3 对小鼠尾部鳞片表皮的影响 取小鼠50只，雌雄各半，随机分为丹槐银屑浓缩丸高、中、低剂量组、郁金银屑片阳性对照组和空白对照组，每组10只。给药组分别在每天上午8时灌胃给予7.9、4.1、2.0g/kg丹槐银屑浓缩丸和0.8g/kg郁金银屑片，给药剂量0.2ml/10g。空白对照组给予同体积生理盐水，每日1次，连续14d。末次给药后处死小鼠，取距尾根约1.5cm处的背部表皮，进行常规组织切片，HE染色。光学显微镜下观察鼠尾皮肤角化层、颗粒层、棘细胞层、基底细胞层、真皮层和毛囊等变化，并计数100个鳞片中有颗粒层形成的鳞片数（凡两个毛囊口之间的鳞片表皮有排列成行的颗粒层者计为有颗粒层形成的鳞片）。结果见表2。丹槐银屑浓缩丸对鼠尾鳞片表皮颗粒层形成有明显的促进作用，与空白对照组比较，丹槐银屑浓缩丸高、中、剂量组差异有统计学意义（P＜0.05）。病理组织学检查结果显示，正常组小鼠尾表皮颗粒细胞较少，给药组表现为角质不均或消失，颗粒层增生，棘细胞层增厚和基底细胞分裂相减少等表皮变化。其中以阳性对照组和丹槐银屑浓缩丸高剂量组最为明显;真皮层和毛囊等各组均未见明显变化。病理结果见图2。

表2 丹槐银屑浓缩丸对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的影响 （%,±s）

表2 丹槐银屑浓缩丸对小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成的影响 （%,±s）

n 组别丹槐银屑浓缩丸高剂组丹槐银屑浓缩丸中剂组丹槐银屑浓缩丸低剂组阳性对照组空白对照组10 10 10 10 10剂量（g/kg）7.9 4.1 2.0 0.8-有颗粒层的鳞片数32.80 ±7.82△△▲26.11±5.15△△19.96±4.93△23.59±6.34△△13.96±6.56

图2 小鼠尾部鳞片光镜病理图片

3 讨论

实验结果表明，丹槐银屑浓缩丸灌胃给药后可有效抑制雌激素周期小鼠阴道上皮细胞有丝分裂，并能明显诱导小鼠尾部鳞片表皮颗粒层形成，提示丹槐银屑浓缩丸对银屑病表皮细胞增生、角化不全等主要病理表现具有良好的治疗作用。

银屑病是一种以皮肤代谢发生障碍产生慢性鳞屑性皮损为主要特征的疾病。在临床上，西医治疗有很好的疗效，但治标而不治本，疗效难以巩固，且具有较大的毒副作用。丹槐银屑浓缩丸为笔者经验方，具有清热解毒、凉血活血、祛屑止痒之功效，为治疗银屑病的新型而有效的纯中药制剂，在临床上深受患者好评。通过以上实验，验证了丹槐银屑浓缩丸疗效，为临床推广应用提供了依据。

Pathologic Experimental Study of Danhuaiyinxie Concentrated Pill on Mice with Psoriasis

WANG Xue-jun1,TAO Yi-cheng2,LIU Chang-fa2
1 Heilongjiang Academy of TCM（Haerbin 150036）
2 Heilongjiang University of Chinese Medicine（Haerbin 150040）

Objective:To observe the pharmacodynamic action of Danhuaiyinxie Concentrated Pill in order to support the clinical application of it.Methods:The influences of Danhuaiyinxie Concentrated Pill on caryomitotic vaginal epithelial cell and tail squamous surface cell of mice were observed.Results:Danhuaiyinxie Concentrated Pill could inhibit caryomitotic vaginal epithelial cell and promote the formation of tail squamous surface cell of mice.Conclusion:Danhuaiyinxie Concentrated Pill has certain effect on inhibiting caryomitotic vaginal epithelial cell and promoting the formation of tail squamous surface cell of mice.

Danhuaiyinxie Concentrated Pill;Caryomitotic model of vaginal epithelial cell of mice;Squamous surface cell model of mice tail

R285.5

A

1004-745X（2010）01-0104-02

2009-07-10）