类风湿关节炎患者AECA 、VEGF、IL-17的检测及临床相关性研究

樊有龙,傅颖媛

(1.南昌大学第二附属医院,江西 南昌 330006;2.南昌大学医学院,江西 南昌 330006)

类风湿关节炎患者AECA 、VEGF、IL-17的检测及临床相关性研究

樊有龙1,2,傅颖媛2*

(1.南昌大学第二附属医院,江西 南昌 330006;2.南昌大学医学院,江西 南昌 330006)

目的通过对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清抗血管内皮细胞抗体(Anti endothelial cell antibodies,AECA)、血浆血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)和白细胞介素-17(interleukin-17,IL-17)的检测,以探讨AECA、VEGF、IL-17在RA患者发病、病情进展中的相关性及其内在联系。方法采用间接免疫荧光法(IIF)和双抗体夹心ELISA法检测86例 RA、45例骨关节炎(OA)、30例健康对照AECA的阳性率和VEGF、IL-17水平,VEGF、IL-17水平与红细胞沉降率(ESR)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、类风湿因子(RF)等指标进行相关性分析。结果RA患者AECA阳性率为8.1%,高于OA患者的阳性率2.2%和健康对对照的阳性率0%(P＜0.05);R A活动期AECA阳性率为16.7%,高于RA缓解期的阳性率3.6%(P＜0.05);RA患者血浆IL-17和VEGF水平显著高于OA组和健康对照组(P＜0.05);RA患者活动期血浆IL-17和VEGF水平明显高于RA缓解组及健康对照组(P＜0.01);RA患者AECA滴度、血浆 IL-17、VEGF水平与 ESR、hs-CRP、RF的指标呈正相关。结论AECA、VEGF、IL-17三者与RA的发病、病情活动存在一定的关系,IL-17、VEGF水平变化及AECA的滴度可作为临床观察RA病情活动、判断疗效及预后等方面的参考指标。

类风湿关节炎;白细胞介素-17;血管内皮生长因子;抗血管内皮细胞抗体

类风温关节炎(rheumatoid arthritis,RA)滑膜中血管病变的存在与RA发病、发展以及并发症的出现有关。AECA 、VEGF、IL-17与血管炎症反应、血管新生、关节滑膜血管病变均存在一定的内在联系,目前国内对AECA 、VEGF、IL-17三者在RA的发病及血管病变等方面的作用报道较少,故探讨AECA、VEGF、IL-17在RA中的发病及病情进展中的作用机制,对RA的诊断治疗及发病机制研究具有重要的临床意义。

1 材料与方法

1.1 对象

1.1.1 RA组 2005年6月-2008年12月收集南昌大学第二附属医院、南昌大学第一附属医院、江西省中医院RA住院患者86例,均符合1987年美国风湿病学会(American Rheumatism Association,ARA)RA诊断标准,年龄19-66岁,平均41.7岁,86例RA患者中男性33例,女性53例,按照1987年ARA制定的RA分类标准[1],86例RA患者中活动期患者30例,缓解期患者56例,所有RA患者均排除其他风湿性疾病、感染等。

1.1.2 OA组 45例OA患者,年龄 13-65岁,平均43.2岁,男性28例,女性17例,符合1986年美国风湿病学会(ARA)原发性骨关节炎诊断标准[2]。

1.1.3 对照组 30例本院体检健康者标本,所选标本年龄、性别等与病例标本相匹配。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 检查对象采空腹静脉血3管,一管为血清,用于 hs-CRP、RF、AECA检测。另一管全血1.6 ml置于0.4 ml 3.8%枸橼酸钠抗凝管中,用于ESR检测.第3管1.8 ml全血置0.2 ml 0.109 mol/L枸橼酸钠抗凝管中,分离血浆,分装后置-70℃保存,用于检测VEGF、IL-17。

1.2.2 VEGF、IL-17检测 采用双抗体夹心ABCELISA法,IL-17试剂盒由南昌长城生物科技有限公司提供,批号为20090312,VEGF试剂盒由上海森雄公司进口分装试剂,批号为20090417,严格按说明书操作,采用美国宝特Elx-800型酶标仪于450 nm波长处测定OD值,以OD值为纵坐标,以标准品浓度为横坐标通过绘制标准曲线计算样本的浓度。

1.2.3 AECA检测 间接免疫荧光法(IIF)检测,参照文献[3],试剂盒为德国欧蒙实验诊断公司提供的原装进口试剂,批号20081105,严格按说明书操作,阳性标本倍比稀释检测AECA滴度。

1.2.4 ESR检测 抗凝血于全自动动态血沉仪(DRAGONMED?2010型)检测,记录检测结果。

1.2.5 hs-CRP、RF检测 采用速率散射免疫比浊法定量检测,仪器为德灵(DADE BEHRING INC)诊断(上海)公司产品及配套试剂。

1.3 统计学处理

所有数据均使用SPSS11.5 forwindows软件系统处理,数据用均数±标准差(±s)表示,组间的比较采用 t检验。阳性率比较采用Fisher确切概率法。各指标之间的相关性检验采用pearson相关性分析。

2 结果

2.1 RA患者组与OA组、健康对照组血浆VEGF、IL-17检测 结果比较见表1,RA患者血浆VEGF、IL-17水平显著高于OA组和对照组,OA组与对照组无统计学差异。

表1 RA患者组与OA组、对照组血浆VEGF、IL-17水平比较(±s)

表1 RA患者组与OA组、对照组血浆VEGF、IL-17水平比较(±s)

注:*RA组与OA组、对照组比较(P＜0.05),△OA组与对照组比较(P＞0.05)

组别 n VEGF(ρ g/ml) IL-17(ρ g/ml)RA 组 86 48.45±22.13* 42.18±19.22*OA 组 45 16.35±7.63△ 13.17±5.78△对照组 30 13.26±6.59 10.31±3.29

2.2 RA活动组、缓解组与对照组血浆VEGF、IL-17检测 结果见表2,RA活动组血浆VEGF和IL-17水平显著高于缓解组、对照组,RA缓解组与对照组无明显差异。

表2 RA活动组、缓解组与对照组血浆VEGF、IL-17 水平(±s)

表2 RA活动组、缓解组与对照组血浆VEGF、IL-17 水平(±s)

组别 n VEGF(ρ g/ml) IL-17(ρ g/ml)活动组 30 65.35±12.33* 72.36±16.93*缓解组 56 16.12±10.37△ 17.38±13.47△对照组 30 13.26±6.59 10.31±3.29

注:*RA活动组与缓解组、对照组比较(P＜0.01),RA缓解组与对照组无明显差异(P＞0.05)

2.3 AECA检测结果 见表3。AECA滴度与活动性明显相关(P＜0.05)。

表3 各组全血AECA检测结果比较

2.4 RA患者AECA阳性组与AECA阴性组血浆VEGF、IL-17水平见表4,RA患者AECA阳性组血浆VEGF、IL-17水平明显高于AECA阴性组。

表4 RA患者AECA阳性组与AECA阴性组血浆VEGF、IL-17 水平(±s)

表4 RA患者AECA阳性组与AECA阴性组血浆VEGF、IL-17 水平(±s)

注:*RA患者AECA阳性组与AECA阴性组比较(P＜0.05)

组别 例数 VEGF(ρ g/ml) IL-17(ρ g/ml)AECA阳性组 30 62.46±10.28* 48.52±13.25*AECA阴性组 56 18.57±12.66 21.65±15.32

2.5 RA活动组血浆VEGF、IL-17水平,AECA阳性滴度与ESR、hs-CRP、RF的相关性分析见表5,RA患者AECA滴度、血浆 IL-17、VEGF水平与 ESR、hs-CRP、RF指标呈正相关关系。

从表5可以看出,RA活动组VEGF、IL-17水平,AECA阳性滴度与ESR、hs-CRP、RF、关节疼痛指数、关节肿胀指数、Ritchie指数、病程呈正相关(P＜0.01或P＜0.05);RA活动组VEGF、IL-17水平,AECA阳性滴度与晨僵时间无明显相关性。

表5 RA活动组VEGF、IL-17水平,AECA阳性滴度与ESR、hs-CRP、RF的相关性分析

3 讨论

国外研究表明,AECA参与血管损伤[4],是反映血管内皮细胞受损的分子标志物[5]。AECA作为血管内皮细胞的特异性抗体,可通过改变内皮细胞功能或通过激活补体或抗体依赖细胞介导的细胞毒作用而使血管内皮活化损伤。血管内皮损,基底膜抗原充分暴露,抗体与抗体结合形成免疫复合物,故AECA可能是间接或直接触发血管病变的重要因素之一[3]。

血管内皮生长因子(VEGF)又称血管渗透因子(Vascular Permeability Factor,VPF),是由2个相同的多肽链通过二硫键构成的二聚体,相对分子质量约为45 000 Da,VEGF与其受体(VEGFR)特异性结合具有促进血管内皮细胞增殖、促进炎症反应和新生血管的形成等多重作用,参与RA的发病机制及病理改变等[6]。IL-17(interleukin-17,IL-17)主要由活化的记忆性CD4+T淋巴细胞分泌,是含有一个N-末端信号肽的155个氨基酸的糖蛋白,是新近发现的细胞因子,是一种重要的前致炎细胞因子,在RA的发病中,IL-17可与其他细胞因子相互作用,相互调节,促进炎症反应的发生[7]。IL-17刺激血管内皮细胞迁移和血管索形成,并上调多种血管形成因子表达,有促血管形成作用[8-9]。RA中VEGF水平的升高,可显著提高血管的通透性,加重炎症过程,同时VEGF对单核细胞、淋巴细胞有趋化激活作用,促进T淋巴细胞等炎性细胞分泌IL-17等炎性细胞因子。IL-17和VEGF的相互关系还表现在RA关节软骨的破坏、关节畸形等病理过程中,IL-17通过刺激滑膜细胞泌KGF、HGF、HB-EGF[10],刺激血管内皮细胞分泌VEGF等血管因子促进血管翳的形成,IL-17还通过诱导滑膜细胞和软骨细胞表达金属蛋白酶,使蛋白多糖分子断裂,破坏软骨组织,刺激破骨细胞的生长[11];同时炎性细胞浸润引起关节的破坏和产生防御性修复,多方面因素造成炎症反应、关节滑膜损伤、关节软骨破坏和关节变形等病理改变。

从我们研究结果表明,RA患者血浆VEGF和IL-17水平显著高于OA组和健康对照组(P＜0.05),RA患者AECA阳性率为8.1%高于OA患者的阳性率2.2%和健康对对照的阳性率0%(P＜0.05),RA患者活动期血浆IL-17和VEGF水平明显高于RA缓解组及健康对照组(P＜0.01),RA活动期AECA阳性率为16.7%高于RA缓解期的阳性率3.6%(P＜0.05),RA患者AECA阳性组与AECA阴性组比较(P＜0.05),均提示AECA 、VEGF、IL-17与RA的发病及病情进展存在一定的关系,它们在血管炎症、血管增生及血管翳的形成等方面作用应引起临床研究的重视。另外,RA患者AECA滴度、血浆IL-17、VEGF 水平与与ESR、hs-CRP、RF、关节疼痛指数、关节肿胀指数、Ritchie指数、病程呈正相关呈正相关,说明血浆IL-17、VEGF水平变化及AECA的滴度可作为临床观察RA病情活动、判断疗效及预后等方面的参考指标。

目前国内对AECA 、VEGF、IL-17三者在RA的发病及血管病变等方面的作用报道较少,三者在RA发病中的作用,尤其是RA血管病变中的作用机制仍然值得我们进一步探讨,以便为RA临床诊断和治疗、减少RA并发症的发生及提高RA患者的生活质量等方面提供实验诊断参考依据。

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The detection of AECA,VEGF and IL-17 and the study of their correlation in patients with Rheumatoid Arthritis

FAN You-long1,FUYing-yuan2*.(1.The Second Affitiated Hospital of Nanchang University Nanchang330006,China;2.Medical College of Nanchang University,Nanchang330006,China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance of plasma Anti endothelial cell antibodies(AECA),vascular endothelial growth factor(VEGF)and interleukin-17(IL-17)in patientswith rheumatoid arthritis.MethodsAECA,VEGF and IL-17 were detected in 86 cases of rheumatoid arthritis,45 cases of osteoarthritis(OA)and 30 healthy controls by indirect immunofluorescence(IIF)and by double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA).The correlation analysis was done among above results and erythrocyte sedimentation rate(ESR),high-sensitivity C-reactive protein(hs-CRP),rheumatoid factor(RF)for correlation!analysis.ResultsThe positive rate of AECA in patients with RA(8.1%)was much higher than that in patients with OA(2.2%)and in the normal group(0%)(P＜0.05).The plasma level of IL-17 andVEGF of RA patients were significantly higher than that of OA patients and the normal control(P＜0.05);plasma level of IL-17 and VEGF of active RA patientswere significantly higher than that of RA remission group and healthy control group(P＜0.01),but there was no significant difference between RA remission group and healthy control group(P＞0.05);The titer of AECA,plasma IL-17 andVEGF of R A patients are positively correlatedwith ESR、hs-CRP、RF.ConclusionAECA、VEGF and IL-17 are correlated with the pathogenesis and activity of RA.they can be used as important indicators for the disease activity,therapeutic effect,prognosis of patientswith RA.

Rheumatoid arthritis;interleukin-17;Vascular endothelial growth factor;Anti endothelial cell antibodies(Chin J Lab Diagn,2010,14:0907)

R593.22

A

1007-4287(2010)06-0907-04

江西省教育厅资助项目(项目编号:GJJ09099)

*通讯作者

樊有龙(1973-),男,副教授,副主任技师,主要从事分子和细胞免疫学研究。

2009-06-18)