抗菌药物敏感性试验中应注意的问题

周春凤 王艳萍 郭时金

（①山东省滨州畜牧兽医研究院 ②山东绿都安特动物药业有限公司 256600）

抗菌药对细菌性传染病的控制起到了非常重要的作用，但由于养殖过程中不科学的、盲目的滥用抗菌药，很多致病性细菌产生了耐药性，使得抗菌药对细菌性疾病的控制效果越来越差，这样不但造成药物浪费，而且还延误病情，给养殖户造成了很大的经济损失。为了更准确有效的治疗，必须对现有药物进行药物敏感度测定，通过这种有的放矢的投药方式，会大大减少药物浪费，降低养殖成本，下面就从药敏纸片的制备和药敏试验的操作等方面作一总结。

1 药敏纸片的制备

（1）选用质地均匀、吸水力强的滤纸(如国产新华1号滤纸)，印上药物名称，然后用打孔机打成直径6mm的圆纸片，置于干净的小西林瓶内，压线后瓶口以单层牛皮纸包扎。经15磅20min高压灭菌，置于超净工作台内，将灭菌纸片倾倒于灭菌90mm培养皿，均匀铺开，然后置于60℃干燥箱内充分干燥。

（2）在超净工作台内，将纸片倾斜于培养皿一角，然后按每100张纸片加入一种抗菌药物1ml，用灭过菌的小镊子翻动纸片，使各纸片充分浸透药液，翻动纸片时不能将纸片搅烂。同时在培养皿上记录药物名称，浸泡0.5h后，将培养皿放平后，用小镊子将纸片在培养皿内均匀铺开，置37℃温箱内干燥，干燥后即可在超净工作台内装瓶，密塞，如有条件可真空干燥。置阴暗干燥处存放，避免受潮，有效期3～6个月。

（3）各种抗菌素纸片的制备：青霉素：用无菌生理盐水稀释成10000u/ml，吸取1ml加甲醇9ml即成。每片含药量10IU。链霉素：称取原药10mg，加无菌生理盐水1ml混匀，再加75%的甲醇9ml，即成。每片含药量10µg。四环素、土霉素、金霉素：称取原药10mg，加0.9%甘氨酸钠1ml，再加pH3.6甲醇9ml即成。每片含药量10µg。新霉素、新生霉素、庆大霉素、多粘菌素、呋喃西林：称取原药10mg，加无菌生理盐水1ml，再加甲醇9ml混匀即成。氯霉素、合霉素、红霉素：称取原药10mg，加甲醇10ml即成。每片含药量10µg。卡那霉素：称取原药10g加无菌生理盐水1ml混匀再加50%的甲醇9ml混匀即成。每片含药量10µg。粘菌素：用无菌生理盐水稀释成1000000IU/ml取1ml加甲醇9ml混匀即成。每片含药量10IU。磺胺类药物：称取原药10mg加甲醇10ml混匀。每片要含量100µg。

2 药敏试验操作步骤

2.1 涂菌 用灭菌棉花棒蘸取试验菌涂布于培养基表面，倒置37℃温箱中20min，使培养基表面干燥。

2.2 放纸片 将各种抗菌素纸片放置于培养基表面，用灭菌小镊子轻压，使其紧贴于培养基上，置4℃冰箱中放置2～4h，再取出置37℃温箱内培养16～24h。

2.3 测抑菌圈直径 取出培养皿，测量各纸片周围的抑菌圈直径，准确到0.1mm。

3 影响药敏结果的因素

3.1 培养基 应根据试验菌的营养需要进行配制。倾注平板时，厚度合适(约5～6mm)，不可太薄，一般90mm直径的培养皿，倾注培养基18～20ml为宜。培养基内应尽量避免有抗菌药物的拮抗物质，如钙、镁离子能减低氨基糖苷类的抗菌活性，胸腺嘧啶核苷和对氨苯甲酸(PABA)能拮抗磺胺药和TMP的活性。

3.2 细菌接种量 细菌接种量应恒定，如太多，抑菌圈变小，能产酶的菌株更可破坏药物的抗菌活性。

3.3 药物浓度 药物的浓度和总量直接影响抑菌试验的结果，需精确配制。商品药应严格按照其推荐治疗量配制。

3.4 培养时间 一般培养温度和时间为37℃ 8～18h，有些抗菌药扩散慢如多粘菌素，可将已放好抗菌药的平板培养基，先置4℃冰箱内2～4h，使抗菌药预扩散，然后再放37℃温箱中培养，可以推迟细菌的生长，而得到较大的抑菌圈。

4 应用

药物敏感试验后，应选择高敏药物进行治疗，也可选用两种药物协助使用，以减少耐药菌株。在选择高敏药物时应考虑药物的吸收途径，因为药敏试验是药液直接和细菌接触，而在给禽用药的时候，必须通过机体的吸收才能使药物达到一定的效果，所以在给禽用药时，高敏药物一定要配合适宜的给药方法，这样才会达到好的治疗效果。