珠光香青对α-葡萄糖苷酶的抑制活性研究

闫红月 刘世峰 孙利伟

珠光香青(Anaphalis marguuritacea Benth.Et Hook)为菊科香青属植物，具有清热解毒、祛风活络等作用。其含黄酮类甾体和三萜类。国内外对它的药理研究报告很少，本文对其α-葡萄糖苷酶的抑制活性进行了研究。

1 仪器与材料

Multiskan MK3酶标仪(美国 Thermo Electron公司);DELTA 320型PH计(美国Mettler-Toledo公司)。α-葡萄糖苷酶(α-glucosidase，EC 3.2.1.20)购自美国Sigma公司。

珠光香青于2008年7月采集于河南商城，经河南大学天然药物研究所袁王俊博士鉴定为菊科香青属植物珠光香青 Anaphalis marguuritacea Benth.Et Hook，标本存于河南大学天然药物研究所。

2 实验部分

将珠光香青粉碎，放入桶内，分别用石油醚、乙酸乙酯、甲醇冷浸提取3次，1次/7 d，然后将各个部分的提取液合并，用旋转蒸发仪回收溶剂，即可得到石油醚、乙酸乙酯、甲醇部分提取物。

2.1 α-葡萄糖苷酶劣力的测定 112 μL磷酸钾缓冲液(pH 6.8)，加入0.2 U/ml的 α-葡萄糖苷酶20 μL，DMSO 8 μL，37℃恒温15 min后加入2.5 mmol/L PNPG 20 μL，37℃恒温反应15 min。再加入0.2 mol/L的Na2CO3溶液 80 μL，于405 nm波长下测OD值。

2.2 标准曲线制作 根据采用的反应体系，用磷酸缓冲液(pH 6.8)配置 1000 μmol/L PNPG，稀释成 400、300、200、150、100、50、25、5 和 0 μmol/L。分别取 7 种不同浓度的PNPG 溶液各 160 μl，加入 0.2 mol/L Na2CO3溶液 80 μl，混匀，在405 nm下测定OD值，测三组取平均值。以OD值为纵坐标，对硝基苯酚浓度为横坐标，做出标准曲线。

2.3 α-糖苷酶抑制活性的检测 以张丽［3］等建立的96微孔板筛选方法，405 nm处检测其OD值。并用Origin软件求出相应IC50值。

3 结果与讨论

珠光香青三个部分的提取物在相同浓度下(1.5 mg/ml)测定其α-葡萄糖苷酶的抑制活性。乙酸乙酯部分和甲醇部分在浓度为1.5 mg/ml时对α-葡萄糖苷酶的抑制活性均较高。

为进一步研究抑制活性，对珠光香青三个部分的提取物的初筛终浓度依次对半稀释进行IC50值计算。得出各提取物的IC50值大小为:石油醚部分的IC50为173.3μg/ml;甲醇部分的IC50为669.1 μg/ml;它们都远低于阳性对照Acarbose(1081.27 μg/ml)，只有乙酸乙酯部分的 IC50为 1125.2μg/ml，高于阳性对照 Acarbose(1081.27 μg/ml)。

珠光香青不同部位提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性均呈剂量依赖性，而且，当抑制率达到一定程度时，再增加提取物质量浓度，抑制活性不会提高［3］。其中，石油醚部分提取物在1 mg/ml时，就达到了它的最大抑制率，说明石油醚部分提取物具有良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性。

［1］张丽，李晓梅，李彩芳，等.加拿大蓬α-葡萄糖苷酶抑制作用研究.河南大学学报(医学版)，2008，27(4):39-41.