大黄赤芍对术后肝衰竭大鼠肝细胞再生凝血功能水平的影响

毛德文,张荣臻,程万里,王 林,邱 华

(广西中医学院第一附属医院肝病科(广西中医肝病治疗中心),广西南宁530023)

近年研究[1-3]表明大黄具有促进大鼠肝移植术后肝细胞再生和恢复肝功能的作用,赤芍具有保护肝细胞、调整血浆环化核苷酸及恢复肝功能等多种作用[4]。体外研究发现,赤芍能促进肝细胞DNA合成,促进肝细胞再生[5]。肝脏是合成多种凝血物质的场所,并能合成和灭活纤维蛋白的溶解物质,在凝血、抗凝系统保持动态平衡中起到重要作用。肝衰竭时,由于肝细胞数量减少及许多生物活性物质,如内毒素、细胞因子、细菌产物及病毒感染可以使维生素K的吸收、利用障碍,促抗凝物质生成障碍,使凝血系统平衡受到破坏,引起血液栓塞或出血[2-3]。肝衰竭时凝血酶原时间延长、凝血酶原活动度低于40%,常因病情危重导致死亡[6-7]。本研究以90%肝叶切除术构建大鼠肝衰竭肝再生模型,测定大鼠凝血功能,并观察大鼠术后96 h内存活率,客观评价大黄、赤芍对肝衰竭大鼠凝血功能的影响,并尝试探讨其促进肝细胞再生的作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验药物 大黄注射液含生药为0.2 g/mL、赤芍注射液含生药为0.4 g/mL,由广西中医学院药学院制备提供,促肝细胞生长素注射液(PHGF)购自威海赛洛金药业有限公司,浓度为2 mL∶30 μ g。

1.2 动物 Wistar大鼠,体重(250±50)g,SPF级,雄性,300只,由广西医科大学实验动物中心提供(动物生产许可证号：SCXK桂2009-0002)。

1.3 设备 SYSMEX1500型全自动血凝仪。

1.4 方法 SPF级Wistar大鼠300只,雄性,体重(250±30)g,随机分为6组：假手术组50只、模型组50只、大黄注射液组50只、赤芍注射液组50只、大黄与赤芍联合组50只、促肝细胞生长素组50只。参照Higgins法,行90%[8]肝叶切除术,建立急性肝衰竭大鼠模型,大黄组、赤芍组以及大黄赤芍联合组,通过预实验取得最佳剂量后,在造模前3 d开始腹腔注射给药,1次/d,间隔24 h,共给药7 d。假手术组和模型组予0.9%生理盐水10 mL/(kg/d),促肝细胞生长素组参照文献给予11 μ L/(kg/d)。

1.4.1 观察项目 观察各组大鼠成模后的外观、皮毛、肤色、呼吸、行为活动、精神状态、食欲、大小便及鼻、眼、口腔有无异常分泌物等变化,并准确记录每只大鼠死亡的时间、数量分布等情况。

1.4.2 各组大鼠凝血功能检测 成模后,按3,6,12,24,48,72 h不同时间点每组取存活大鼠6只,采用1%的戊巴比妥钠0.4 mL/100 g腹腔注射麻醉大鼠,固定于手术台上,腹部碘伏消毒,无菌条件下正中切口开腹,用真空抗凝管抽取大鼠腹静脉血2 mL,采血结束后应立即颠倒混匀5～10次,不可用力猛摇。30 min内用采用SYSMEX1500型全自动血凝仪,测定PT值,计算PTA。其余大鼠用于96 h内存活率观察。

2 结果

2.1 大鼠存活率观察 大鼠在实施90%肝叶切除术后,6～12 h后开始出现竖毛、神志不清、昏睡等不适症状,12 h内一般无大鼠死亡;12 h后开始出现死亡现象。成模后96 h各组之间的存活率比较,以大黄、赤芍联合组与促肝细胞生长素组疗效最佳,其余次序为大黄组、赤芍组、模型组。提示大黄、赤芍以及促肝细胞生长素均能提高肝衰竭大鼠的存活率(见表1)。

表1 成模后96 h内存活率观察结果

2.2 大黄、赤芍对大鼠凝血功能的影响 实验各组大鼠PT、PTA测定结果：模型组与假手术组比较,模型组PT显著升高,PTA下降,表明肝叶切除术可致残存肝组织凝血机制严重障碍。中药干预组凝血酶原时间(PT)与促肝细胞生长素组比较：24～48 h大黄注射液组、赤芍注射液组、大黄赤芍联合组及促肝细胞生长素组均有下降。在改善PTA方面：大黄注射液组、赤芍注射液组、大黄赤芍联合组、促肝细胞生长素组均有上升,但以大黄赤芍联合组与促肝细胞生长素组效果明显,二者之间比较无统计学意义。说明大黄赤芍联合用药与促肝细胞生长素均能显著改善肝衰竭大鼠凝血功能(见表2)。

表2 各组大鼠凝血功能水平的比较(±s,n=6)

表2 各组大鼠凝血功能水平的比较(±s,n=6)

注：与促肝组比较,#P＜0.05,##P＜0.01。

指标 组 别 3 h 6 h 12 h 24 h 48 h 72 h PT/s假手术组 13.20±1.12## 13.10±1.84## 13.02±1.67# 13.24±1.66# 13.48±1.81# 13.78±1.20模型组 25.30±1.31 25.64±1.24 28.42±1.24# — — —大黄组 23.12±1.37 23.41±1.51 22.16±1.20 20.51±1.68# 22.18±1.08# 21.10±1.09#赤芍组 24.20±1.22 23.14±1.41 20.68±1.19 19.94±1.49# 18.67±1.01# 17.54±1.64#大黄赤芍联合组 24.23±1.91 23.21±1.84 19.15±1.19 16.99±1.09 16.01±1.18 15.95±1.34促肝组 23.13±1.44 23.16±1.24 20.51±1.21 16.24±1.11 15.84±2.09 15.93±1.88 PTA假手术组 0.601±0.033## 0.613±0.031## 0.585±0.037## 0.596±0.031# 0.613±0.036# 0.599±0.032#模型组 0.201±0.031 0.181±0.022 0.178±0.031 — — —大黄组 0.235±0.032 0.265±0.031 0.305±0.033 0.405±0.039# 0.445±0.037# 0.463±0.036#赤芍组 0.222±0.031 0.272±0.031 0.281±0.036 0.381±0.032# 0.392±0.035# 0.437±0.038#大黄赤芍联合组 0.217±0.038 0.269±0.031 0.361±0.032 0.467±0.038 0.462±0.031 0.477±0.031促肝组 0.202±0.031 0.282±0.034 0.315±0.036 0.441±0.034 0.451±0.032 0.461±0.032

3 讨论

大黄、赤芍[9-11]具有改善肝衰竭大鼠肝脏的合成、分泌、解毒功能,减少肝脏坏死面积,保护肝细胞线粒体,抑制肝细胞凋亡,提高存活率等作用。本研究发现,与假手术组比较,成模后模型组、大黄注射液组、赤芍注射液组、大黄赤芍联合用药组和促肝细胞生长素组PT水平均有下降;中药干预组与促肝细胞生长素组比较,以大黄赤芍联合组的下降水平最为明显(P＜0.05)。PTA均有上升,以大黄赤芍联合组的上升水平最为明显(P＜0.05),提示大黄赤芍联合用药可以明显改善大鼠凝血功能。成模后96 h各组之间的存活率比较,以大黄、赤芍联合组与促肝细胞生长素组疗效最佳,其余依次为大黄组、赤芍组、模型组。通过本实验证实大黄、赤芍具有改善大鼠凝血功能以及提高肝切除术后大鼠存活率的作用。并且肝切除术后肝衰竭大鼠存活率的提高与改善大鼠凝血功能的程度呈现一致性。提示药物治疗组可能是通过改善大鼠凝血功能的水平,从而促进肝衰竭肝细胞的增殖,最终达到肝切除术后肝衰竭大鼠生存率的提高。

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