正交试验法优选糖肾丸提取工艺

2010-12-27陈建伟

长春中医药大学学报 2010年5期

关键词：南京中医药大学丹参酮丹参

周越，陈建伟

(1.南京中医药大学附属连云港市中医院，江苏连云港 222000;2.南京中医药大学，江苏南京 210046)

正交试验法优选糖肾丸提取工艺

周越1，陈建伟2＊

(1.南京中医药大学附属连云港市中医院，江苏连云港 222000;2.南京中医药大学，江苏南京 210046)

目的筛选和优化糖肾丸提取工艺。方法采用正交试验设计，以高效液相色谱法测定提取液中丹参酮ⅡA含量为指标，优选糖肾丸的提取工艺。结果糖肾丸的最佳工艺为加6倍85%乙醇，提取2次，每次提取2 h。结论糖肾丸提取工艺稳定，可行。

丹参酮ⅡA;高效液相色谱法;正交设计

糖肾丸为南京中医药大学附属连云港医院经验方剂，由黄芪、生地黄、丹参、茯苓、车前子等中药组成，具有益气滋阴，活血通络，利水化痰之功效，临床用于糖尿病肾病的治疗。本试验对糖肾丸的提取工艺进行了研究，采用正交设计法，优选出最佳提取工艺，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1200高效液相色谱仪(安捷伦科技有限公司生命科学与化学分析仪器部);电子分析天平(上海精密科学仪器有限公司天平仪器厂);ZF-I型三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂);电热恒温水浴锅(江苏省医疗器械厂)。丹参酮ⅡA对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110766-200417);糖肾丸方中药材均购自安徽海鑫中药饮片有限公司。甲醇为色谱纯(南京化学试剂有限公司)，水为二级蒸馏水，其它实验所用试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 丹参酮ⅡA含量测定[1-2]

2.1.1 色谱条件与系统适用性试验色谱柱:以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:甲醇-水(82∶18);检测波长为 270 nm，柱温:室温;流速:1.0 mL/min;理论板数:按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2 000。

2.1.2 溶液制备精密称取丹参酮ⅡA对照品10 mg，置50 mL棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀;精密量取2 mL，置25 mL棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得对照品溶液(每1 mL含丹参酮ⅡA16μg)。

取本品适量，研细(通过4号筛)，精密称取1 g，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

按处方量比例称取除去丹参的其他药材，依照制粒方法及供试品溶液制备方法制备不含丹参的阴性对照品溶液。

2.1.3 方法学考察线性关系考察:准确配置质量浓度为 9.34 ，18.67 ，28.02 ，37.36 ，46.70μg mL 丹参酮ⅡA对照品溶液，精密吸取10μL进样，以峰面积对浓度进行线性回归，得回归方程为:Y=265.1X-11.5，r=0.999 5(n=5)。结果表明丹参酮ⅡA浓度在9.34～46.70μg范围内有较好的线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10μL，按上述色谱条件测定，连续测定5次峰面积。结果RSD为0.54%(n=5)，表明精密度良好。

加样回收试验:精密称取已知含量的同一批号样品细粉 0.1 g，共 5份，分别准确加入浓度为18.67μg/mL的对照品溶液各4 mL ，按“2.1.2”项下的方法制备样品溶液，依法测定并计算加样回收率，得平均回收率为99.17%，RSD为1.16%。

2.2 正交设计根据预试验，对影响提取工艺的主要因素提取溶媒(乙醇)浓度(因素A)、溶媒用量(因素B)、提取时间(因素C)及提取次数(因素D)进行L9(34)正交试验，各因素水平见表1[3-4]。正交设计及结果见表2，方差分析见表3。