乌司他丁加甲基泼尼松龙对大鼠急性坏死性胰腺炎血清淀粉酶及细胞因子的影响

段志学

急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)，特别是急性重症胰腺炎(severe acute pancreatitis,SAP)，实质上是一种全身性炎症反应综合征，炎症介质和细胞因子在其发病机制中的作用受到越来越多的研究者的重视[1]。AP的发病机制相当复杂，至今尚未完全阐明[2]。因此，笔者根据近年来对ANP发病机制的最新研究进展，应用乌司他丁和甲基强的松龙治疗ANP大鼠模型，探讨其药理作用机理，为ANP临床治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物及材料 雄性Wistar大鼠150只，体重240～270g，由温州医学院动物实验中心提供；注射用乌司他丁为广东天普生化医药股份有限公司产品(批号：H19990134，1×105U/瓶)；甲基泼尼松龙注射液为Pfizer Manufacturing Belgium NV(辉瑞投资有限公司)产品(批号：H20060054，每支40mg/瓶)；I淀粉酶试剂盒购自上海荣盛生物试剂厂；IL-6试剂盒购自南京建成生物工程研究所；TNF-а试剂盒购自上海森雄科技实业有限公司；酶标仪为美国Bio-tekELx800公司产品。

1.2 分组及ANP动物模型 150只雄性大鼠随机分成A、B、C、D、E 5组，每组30只，各组的体重无显著差异(P＞0.05)。用3%戊巴比妥钠(30mg/kg)腹腔内注射麻醉，腹部去毛，经2%络合碘消毒腹部皮肤，铺无菌孔巾，取中上腹部正中切口。A组术中仅翻动胰腺，未作特殊处理，缝合腹部切口。其它组提起十二指肠，显露胰胆管的全程，无创伤性动脉夹夹闭肝门区胆管，向胰管内注射5%牛磺胆酸钠，5min后可见整个胰腺出现明显充血、水肿、片状出血，证实ANP动物模型已建立成功，移去小动脉夹。B组按容积12.5ml/kg给予生理盐水，C组按剂量20mg/kg、容积12.5ml/kg给予甲基泼尼松龙，D组按剂量10万U/kg、容积12.5ml/kg给予乌司他丁，E组剂量同上。分别于术后2、6h从下腔静脉抽血1ml。

1.3 血清样品采集和处理 取静脉血0.5ml，置入普通塑料试管中，4℃离心10min(2000r/min)，分离血清后置于EP管中，放入-20℃冰箱中保存，待测。

1.4 血清淀粉酶和细胞因子的检测方法 ①血清淀粉酶检测：取血清样品待测液，经淀粉-碘比色法分别测定660nm波长下测定管(加入血清样品)和对照管(不含血清样品)的吸光度(A)，计算淀粉酶活性。②血清IL-6、TNF-a测定：采用双抗体夹心ABCELISA法检测血清IL-6、TNF-a水平，按试剂盒说明书要求操作。

表1 5组2h、6h血清AMS、IL-6、TNF-α比较(±s)

表1 5组2h、6h血清AMS、IL-6、TNF-α比较(±s)

注：与A、C、D、E组比较，▲P＜0.05；与B、C、D组比较，*P＜0.05；与B、C组比较，#P＜0.05；与2h组比较，◇P＜0.05。

组别 n 血清淀粉酶(IU/ml) IL-6(ng/L) TNF-α(pg/ml)2h 6h 2h 6h 2h 6h A组 30 130.31±30.45* 131.40±29.14*◇ 13.24±1.21* 11.25±2.68*◇ 11.06±2.44* 49.89±1.75*◇B组 30 485.37±40.27▲ 621.48±53.57▲◇ 48.67±8.62▲ 92.68±15.47▲◇ 152.29±24.32▲ 186.57±31.24▲◇C组 30 375.70±71.83 449.10±43.80◇ 32.65±8.47◇ 63.28±9.86◇ 128.93±13.39 150.4±21.05◇D组 30 373.46±58.72 447.28±34.64◇ 31.84±5.41 62.51±10.37◇ 126.62±12.48 148.3±19.64◇E组 30 213.20±41.96# 342.60±53.43#◇ 21.58±5.67#◇ 51.23±9.47#◇ 60.56±8.17#◇ 95.92±4.42#◇

2 结果

血清淀粉酶和IL-6、TNF-α的检测结果见表1。

3 讨论

文献报道[3]IL-6可由单核、巨噬细胞、T细胞、B细胞等多种细胞产生，参与到烧伤、脓毒症、重大手术等机体的许多急性反应。TNF-α早期升高后，可诱导 IL-6、IL-8 及其自身的基因表达引起级联反应造成炎症介质的失控性释放[4]。研究发现ANP模型大鼠与正常大鼠比较及模型大鼠的2h与6h组比较，AMS、IL-6、TNF-α均出现明显升高(P＜0.05)，因此，IL-6、TNF-α在急性胰腺炎的发病中起重要作用。

乌司他丁是从人尿中分离纯化出的一种糖蛋白,主要具有以下作用:(1)对多种蛋白酶、糖和脂水解酶的活性有明显的抑制作用。(2)稳定溶酶体膜,抑制溶酶体酶的释放。(3)抑制炎性介质和细胞因子的释放,从而减轻ANP后全身炎症反应并预防多器官功能损害。文献报道[5]，早期应用甲基强的松龙可以改善胰腺及胰周的微循环，能稳定胰腺腺泡，抑制胰腺外分泌及胰腺对各种介质的反应和其他药物配合达到抗炎、中和毒素、抑制坏死、复苏濒临死亡的胰腺组织作用。实验发现C组、D组、E组与B组比较AMS、IL-6、TNF-α均出现明显下降(P＜0.05)。乌司他丁是一种蛋白酶抑制剂，能够同时抑制胰蛋白酶、磷脂酶A2、透明质酸酶、弹性蛋白酶等多种水解酶的活性[6]；糖皮质激素甲基泼尼松龙可诱导IkB基因转录，从而增加IkB-α蛋白合成，抑制NF-κB向核内的移位，减少细胞因子合成，阻断机体免疫系统的激活[7]。实验发现E组与B、C组比较AMS、IL-6、TNF-α均出现明显下降(P＜0.05)，因此，联合应用乌司他丁和甲基泼尼松龙治疗大鼠急性坏死性胰腺炎比单独用药效果好，可有效的抑制AMS、IL-6、TNF-a的分泌、释放，改善ANP的预后，但有待于临床实践进一步研究证实。

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[5]陈月莉,李建恒,吴富.应用甲基强的松龙治疗早期重症急性胰腺炎的临床分析[J].河北职工医学院学报,2001,3(18):28-29.

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